现代分子生物学试题及答案

现代分子生物学习题及答案一、填空题1 基因工程是 70 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2 基因工程的两个基本特点是： (1)分子水平上的操作，(2)细胞水平上的表达3 基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择4 通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小 的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的限制性酶切图谱。5 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自属名的第一个字母，第二、三两个字母取自_种名的前两个字母，第四个字母则用株名表示。6部分酶切可采取的措施有：(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积等。7第一个分离的限制性内切核酸酶是 EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_ EcoRl。8限制性内切核酸酶 BsuRI 和 Hae的来源不同，但识别的序列都是 GGCC，它们属于异源同工酶。9DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用_枯草杆菌蛋白酶切割 DNA 聚合酶 I 得到的分子量为 76kDa 的大片段，具有两种酶活性： (1) 5-3合成酶的活性； (2) 3-5外切核酸酶的活性。10为了防止 DNA 的自身环化，可用碱性磷酸酶去双链DNA_5端的磷酸基团。11EGTA 是_Ca2+_离子螯合剂。12测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，它只有 _ 5-3合成酶的活性，而没有 3-5外切酶的活性。13切口移位(nick translation)法标记 DNA 的基本原理在于利用 DNA 聚合酶 I 的_5一 3外切核酸酶和 5一 3合成酶的作用。14欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA 分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_ S1 核酸酶切割或 DNA聚合酶补平。15反转录酶除了催化 DNA 的合成外，还具有_核酸水解酶 H 的作用，可以将 DNA-RNA 杂种双链中的_RNA_ 水解掉。16基因工程中有 3 种主要类型的载体：质粒 DNA，病毒DNA，质粒和病毒 DNA 杂合体。17就克隆一个基因(DNA 片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源 DNA 的插入。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18 一个带有质粒的细菌在有 EB 的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫 质粒消除(或治愈) 。19 pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来源于pMBl ，它的四环素抗性基 因来自于 pSCl01，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 pSF2124(R 质粒)。20YAC 的最大容载能力是 1000kb，BAC 载体的最大容载能力是 300kb 。21pSCl01 是一种 严紧 复制的质粒。22pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC 系列的载体是通过 pBR322 和 M13 两种质粒改造而来。它的复制子来自 pMBl ，Amp抗性基因则是来自 转座子。23噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA 的扩增； 二是对某些噬菌体( 如 噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽。24 野生型的 M13 不适合用作基因工程载体，主要原因是没有合适的限制性内切核酸酶识别位点和 选择标记。25 黏粒 (cosmid)是质粒噬菌体杂合载体，它的复制子来自质粒、COS 位点序列来自 噬菌体，最大的克隆片段达到 45 kb。26 野生型的 噬菌体 DNA 不宜作为基因工程载体，原因是：(1) 分子量大，(2) 酶的多切点，(3) 无选择标记27噬菌粒是由质粒和噬菌体 DNA 共同构成的，其中来自质粒的主要结构是复制区，而来自噬菌体的主要结构是 IG 区 。28 噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源 DNA 片段后，总的长度应在噬菌体基因组的 75105 的范围内。29 在分离 DNA 时要使用金属离子螯合剂，如 EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 螯合 Mg2+离子，抑制核酸酶的活性 。30 用乙醇沉淀 DNA 时，通常要在 DNA 溶液中加人单价的阳离子，如 NaCl 和 NaAc，其目的是 中和 DNA 分子的负电荷，增加 DNA 分子间的凝聚力。31 引物在基因工程中至少有 4 个方面的用途： (1)合成探针；(2)合成 cDNA；(3)用于 PCR 反应；(4)进行序列分析32Clark 发现用 Taq DNA 聚合酶得到的 PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链 DNA 分子。根据这一发现设计了克隆 PCR 产物的 T载体。33在 cDNA 的合成中要用到 S1 核酸酶，其作用是切除在 第二链合成时形成的发夹环 34乙醇沉淀 DNA 的原理是乙醇使 DNA 分子脱水。35 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号36 受体细胞的感受态是接受外源 DNA 的生理状态_。37 DNA 重组连接的方法大致分为四种： (1)黏性末端连接； (2)平末端连接；(3) 同聚物接尾连接；(4) 接头连接法。38 将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组 DNA 克隆_，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个基因组 DNA 文库。39将含有一个 mRNA 的 DNA 拷贝的克隆称作一个_cDNA 克隆，源于同一批 RNA 制备物的克隆群则构建了一个_ cDNA 文库_ 。40只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用_聚合酶链式反应(PCR)可以将这段 DNA 进行百万倍的扩增。41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为 0C 时吸附 DNA, 42C _时摄人 DNA。42目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。大致可以分为：(1)遗传学方法；(2)物理筛选法；(3) 核酸杂交法；(4)表达产物分析法等。43PCR 扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于_插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选。44 核酸杂交探针可分为两大类： DNA 探针和 RNA 探针。其中 DNA 探针又分为_基因组 DNA 探针和 cDNA 探针。45如果用限制性内切核酸酶切割双链 DNA 产生 5突出的黏性末端，则可以用_ Klenow 酶填补的方法_进行 3末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割 DNA 产生的是 3突出的黏性末端，可以用_ T4DNA 聚合酶进行 3末端标记。46单链 DNA 探针的标记可以采用下列方法：(1)用 M13噬菌体载体合成单链 DNA 探针；(2)从 mRNA 反转录合成单链 cDNA 探针；(3) 用不对称 PCR 合成单链DNA 探针。47根据 Northern 杂交的结果可以说明：外源基因是否进行了转录_。48差示杂交(differential hybridization)技术需要_两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因。49RNA 分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上，同一放射 DNA 探针杂交的技术称_ Northern 印迹_。50在_ Southern 印迹_技术中，DNA 限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的 DNA 探针杂交。51可用 T4 DNA 聚合酶进行平末端的 DNA 标记，因为这种酶具有_53合成酶_和_3 5外切核酸酶_的活性。52根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素：(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子。53Northern 印迹和 Southern 印迹有两点根本的区别：(1)印迹的对象不同：Northern 是 RNA，Southern 是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件。54放射免疫筛选的原理基于以下三点：(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记二、选择题(单选或多选)1 因研究重组 DNA 技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )(a)AKornberg (b)WGilbert (c)PBerg (d)BMcClintock2 第一个作为重组 DNA 载体的质粒是( )(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。(a)由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4型限制性内切核酸酶： ( )(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( )(a)限制酶是外切酶而不是内切酶(b)限制酶在特异序列( 识别位点)对 DNA 进行切割(c)同一种限制酶切割 DNA 时留下的末端序列总是相同的(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端6第一个被分离的类酶是： ( ) (a)EcoK (b)Hind (c)Hind (d)EcoB7在下列进行 DNA 部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )(a)反应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)酶反应的温度8在下列试剂中，那一种可以螯合 Ca2+离子?( )(a)EDTA (b)柠檬酸钠 (c)SDS (d)EGTA9在下列工具酶中，那一种可以被 EGTA 抑制活性?( )(a)S1 单链核酸酶 (b)末端转移酶 (c)碱性磷酸酶 (d)Bal 31 核酸酶10限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( )(a)双链 DNA 的特定碱基对 (b)双链 DNA 的特定碱基序列(c)特定的三联密码 (d)以上都正确11下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( )。(a)Sau3A I (b)EcoRI (c)hind III (d)Sau 3A112限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性大大提高(c)切割速度大大加快 (d)识别序列与原来的完全不同13下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )(a)甘油含量过高 (b)反应体系中含有有机溶剂(c)含有非 Mg2+的二价阳离子 (d)酶切反应时酶浓度过低14关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当(a)由作用于同一 DNA 序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对 DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统15在长模板链的指导下引物延伸合成长的 DNA 互补链时应选用( )(a)T4DNA 聚合酶 (b)Klenow 酶(c)大肠杆菌 DNA 聚合酶 I (d)T7DNA 聚合酶16末端转移酶是合成酶类，( )(a)作用时不需要模板(b)在 Ca2+的存在下，可以在突出的 3，末端延长 DNA链(c)在 Ca2+的存在下，可以在隐蔽的 3，末端延长 DNA链(d)上述说法有两种是正确的17在基因工程中，可用碱性磷酸酶( )(a)防止 DNA 的自身环化 (b)同多核苷酸激酶一起进行 DNA 的 5，末端标记(c)制备突出的 3，末端 (d)上述说法都正确18下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性(a) 核酸外切酶 (b)外切酶 (c)单核苷酸激酶 (d)碱性磷酸酶19 下列哪一种酶作用时需要引物? ( )(a)限制酶 (b)末端转移酶 (c)反转录酶 (d)DNA 连接酶20S1 核酸酶的功能是( )(a)切割双链的 DNA (b)切割单链的 RNA (c)切割发夹环 (d)以上有两项是正确的21Klenow 酶与 DNA 聚合酶相比，前者丧失了( )的活性。(a)5， -3，合成酶， (b)3，-5，外切酶 (c)5，-3，外切酶 (d)转移酶22 下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的(a)质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数(b)可以在氯霉素作用下进行扩增 (c)通常带有抗药性标记 (d)同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子 23 基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有( )被视为用作基因工程载体的天然质粒载体(a)pBR322 (b)pSCl01 (c)pUBll0 (d)pUCl8 24 下列哪种克隆载体对外源 DNA 的容载量最大?( )(a)质粒 (b)黏粒 (c)酵母人工染色体(YAC) (d) 噬菌体 (e) cDNA 表达载体 25. 松弛型质粒： ( ) (a)在寄主细胞中拷贝数较多 (b)可用氯霉素扩增(c)一般没有选择标记 (d)上述(a)、(b)两项正确 26Col El 是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒：( )(a)是松弛复制型 （b)具有，四环素抗性 (c)能被氯霉素扩增 (d)能产生肠杆菌素27同一种质粒 DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：( )(a)OCDNASCDNALDNA (b)SCDNALDNAOCDNA(c)LDNAOCDNASCDNA (d)SCDNAOCDNALDNA28pBR322 是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自： ( )(a)ColEl (b)Ri 质粒 (c)pSCl01 (d)pUCl829关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?( )(a)在不同的宿主中具有不同的复制机制(b)在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点(c)在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶(d)在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率30能够用来克隆 32kb 以下大小的外源片段的质粒载体是( )(a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid31第一个作为重组 DNA 载体的质粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl832. Ti 质粒：( )(a)可从农杆菌转到植物细胞中 (b)作为双链 DNA 被转移(c)在植物中导致肿瘤