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LPC-2013051第一章 绪论一简述分子生物学的主要内容。1.DNA 重组技术(又称基因工程)2. 基因表达调控研究3.生物大分子的结构功能的研究结构分子生物学4.基因组、功能基因组与生物信息学研究二什么是遗传学的中心法则和反中心法则?遗传学中心法则:描述从一个基因到相应蛋白质的信息流的途径。遗传信息贮存在 DNA 中,DNA 被复制传给子代细胞,信息被拷贝或由 DNA 转录成 RNA,然后 RNA 翻译成多肽。反中心法则:由 RNA 逆转录到 DNA,再由 DNA 转录到 RNA,然后 RNA 翻译成多肽、蛋白质。第二章 染色体与 DNA一、名词解释半保留复制:DNA 复制时,以亲代 DNA 的每一条链作为模版,合成完全相同的两个双链自带 DNA 分子,每个子代 DNA 分子中都含有一条亲代 DNA 链的复制方式。冈崎片段:在 DNA 复制过程中,前导链能连续合成,而滞后链只能是断续的合成 53 的多个短片段,这些不连续的小片段称为冈崎片段。复制子:从复制原点到终点,组成一个复制单位,叫复制子。插入序列:最简单的转座子,不含有任何宿主基因,它们是细菌染色体或质粒 DNA 的正常组成部分。 DNA 的变性和复性:变性:指 DNA 双链的氢键断裂,完全变成单链。复性:指热变性的 DNA 缓慢冷却,单链恢复成双链。双向复制:复制从一个固定的起始点开始,同时向两个方向等速进行。引物酶:一种特殊的 RNA 聚合酶,在 DNA 模版上合成一段 RNA 链,这段 RNA 链是 DNA 复制起始时必需的引物。转座子:存在与染色体 DNA 上可自主复制和位移的基本单位。碱基切除修复:首先由糖苷水解酶识别特定受损核苷酸上的 N- 糖苷键,在 DNA 上形成 AP 位点,由 AP核酸内切酶把受损的核苷酸的糖苷-磷酸键切开,移去包括 AP 位点在内的小片段 DNA,由聚合酶合成新片段,DNA 连接酶最终把两者连接成新的 DNA 链。 DNA 重组修复:即“复制后修复” 。机体细胞对在复制起始时尚未修复的 DNA 部位可先复制再修复。在复制时,先跳过损伤部位,在和成链中留下一个缺口。对该缺口的修复即“DNA 重组修复”:先从同源 DNA 母链上将相应核苷酸序列片段移至子链缺口处,然后再用新合成的序列补上母链空缺。解旋酶:通过水解 ATP 获得能量来解开双链 DNA 的酶。单链结合蛋白:与解开的 DNA 单链紧密结合,防止重新形成双链,并免受核酸酶降解。在复制中维持模板处于单链状态。DNA 连接酶:连接 DNA 链 3-OH 末端和相邻 DNA 链 5-P 末端,形成磷酸二酯键,从而把两段相邻的 DNA 链连接成完整的链。转座子:一段 DNA 顺序可以从原位上单独复制或断裂下来,环化后插入另一位点,并对其后的基因起调控作用。P 转座子:是一种能够诱发杂种不育的果蝇转座子,果蝇中几乎所有的杂种不育都由 P 转座子引起。二、理解题1DNA 和 RNA 分子的基本组成成分。1、DNA 由 4 种主要的脱氧核苷酸(dAMP、dGMP、dCMT 和 dTMP)通过 3,5-磷酸二酯键连接而成。2、RNA 是由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。RNA 的碱基主要有 4 种,即 A 腺嘌呤,G 鸟嘌呤,C 胞嘧啶,U 尿嘧啶。2.DNA 分子的一级结构:定义、组成和表示方法。LPC-20130521、定义:指 DNA 分子中多个脱氧核苷酸的排列顺序。即数目庞大的四种碱基的排列顺序。2、DNA 的碱基组成符合 Chargaff 定则:(1)在所有的 DNA 中,A=T,G=C 即 A+G=T+C(2)DNA 的碱基组成具有种的特异性,即不同生物物种的 DNA 具有自己独特的碱基组成,但没有组织和器官的特异性。表示方法:(1)结构式表示法:(2)线条式表示法:(3)字母式表示法:3.DNA 双螺旋结构的基本特点?1、螺旋直径 2nm;螺旋周期包含 10 对碱基;螺距 3.4nm;相邻碱基对平面的间距 0.34nm。2、嘌呤和嘧啶碱基对层叠于双螺旋的内侧。顺着螺旋轴心从上向下看,可见碱基平面与纵轴垂直,且螺旋的轴心穿过氢键的中点。3、两链上的碱基以氢键相连,C 与 G,A 与 T 配对。4、由两条反向平行的多核苷酸链围绕同一中心轴构成的右手螺旋结构。一条由 5端到 3端,另一条从3端到 5端。链间有螺旋形的凹槽,其中一个较浅的叫小沟(约 1.2nm)一个较深的叫大沟(约 2.2nm) 。4.DNA 复制体系包括哪些要素?底物:dNTP (dATP、dGTP 、 dCTP 、dTTP) ;聚合酶(polymerase):依赖 DNA 的 DNA 聚合酶, 简写为 DNA-pol;模板(template):解开成单链的 DNA 母链;引物(primer):提供 3-OH 末端的寡核苷酸;其他的酶和蛋白质因子5.原核生物 DNA 聚合酶的种类和异同?LPC-2013053原核生物 DNA 聚合酶种类的比较pol-I pol-II pol-III53聚合酶活性 + + +35外切酶活性 + + +53外切酶活性 + +构成 (亚基数) 单体 不详 多亚基体外链延长速度 (核苷酸/分) 600 30 9000分子数 /细胞 400 不详 1020功能修复合成去除引物填补空隙校对不详复制校对6.DNA 复制的基本过程和终止机理?1、DNA 双螺旋的解旋:DNA 在复制时,其双链首先解开,形成复制叉,这是一个有多种蛋白质以及酶参与复制的过程。2DNA 复制的引发:所有的 DNA 聚合酶都从 3羟基端起始 DNA 合成。DNA 复制时,往往先由引发每在DNA 复制时,往往先由引发酶在 DNA 模版上合成一段 RNA 链,它提供引发末端(即引物) ,接着由 DNA 聚合酶从 RNA 聚合酶从 RNA 引物 3端开始合成新的 DNA 链。3、在 DNA 聚合酶的作用下,水解切除 RNA 引物,填补空缺。4、在 DNA 连接酶的作用下,连接相邻 DNA 片段。5、终止机理:当复制叉前移遇到 22 个碱基的重复性终止序列(TER)时,Ter-Tus 复合物能使 DnaB 不再将 DNA 解链,阻挡复制叉的继续迁移,等到相反方向的复制叉到达后,停止复制。期间,人后 50100bp未被复制,由修复方式填补空缺,而后两条链解开。7.DNA 复制保真信的原理?至少依赖三种机制:1. 遵守严格的碱基配对规律;2. 聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能;3. 复制中的即时校读功能。8.什么是 RNA 反转录,以及他的生物学意义?定义:以 RNA 为模版以四种 dNTP 为原料,在 PBA 指导的 DNA 聚合酶的催化下,按照碱基互补配对的原则合成 DNA 的过程。意义:对分子生物学的中心法则进行了修正和补充;在实际工作中,有助于基因工作的实施,可用于目的基因的制备。 9.什么是 DNA 自发性损伤?复制过程中碱基配对时产生的误差,经 DNA 聚合酶校正和 SSB 等综合校对,任未被校正的 DNA 损伤。包括:DNA 复制中的错误;DNA 的自发性化学变化(碱基的异构互变、碱基的脱氨基作用、脱嘌呤与嘧啶、碱基修饰与链断裂); 10.DNA 修复包括哪些类型?LPC-2013054DNA 修复系统 功能错配修复 恢复错配碱基切除修复 切除突变的碱基核甘酸切除修复 修复被破坏的 DNADNA 直接修复 修复嘧啶二体或甲基化 DNA第三章 RNA 的合成一名词解释有义链: 与 mRNA 序列相同的那条 DNA 链,也称为编码链。 反义链:根据碱基互补原则指导 mRNA 合成的 DNA 链,也称为模板链。启动子:指能被 RNA 聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段 DNA 序列。 因子:原核生物 RNA 聚合酶的一个亚基,是转录起始所必需的因子,主要影响 RNA 聚合酶对转录起始位点的识别。剪接体:是在真核生物中,mRNA 前体在剪接过程中组装形成的多组分复合物,主要由细胞核内小分子 RNA和多种蛋白质因子组成。转录起始点:是指与新生 RNA 链第一个核苷酸相对应 DNA 链上的碱基.三元起始复合物:又称三元起始复合物。为全酶、模板 DNA 和新生 RNA 形成的复合物,亦可理解为由全酶、DNA 和核苷三磷酸(NTP)构成。于 RNA 聚合酶正确识别 DNA 模板上的启动子后形成。转录终止子:在 DNA 分子上(基因末端)提供转录停止信号的 DNA 序列称为终止子,它能使 RNA 聚合酶停止合成 RNA 并释放出 RNA。转录单元:是一段从启动子开始至终止子结束的 DNA 序列。RNA 聚合酶从转录起点开始沿着模板前进,直到终止子为止,转录出一条 RNA 链,称为转录单元。Pribnow 框:Pribnow 分离了 fd 噬菌体等被酶保护的区域,在被保护区内有一个由 5 个核苷酸组成的共同序列,是 RNA 聚合酶的紧密结合点,现在称为 Pribnow 区。内含子/外显子:真核基因表达往往伴随着 RNA 的剪接过程,从 mRNA 前体分子中切除被称为内含子的非编码区,并使基因中被称为外显子。可读框:由 DNA 转录生成的原始转录产物核不均一 RNA(hnRNA),经过 5加“帽“和 3酶切加多聚腺苷酸,再经过 RNA 的剪接,编码蛋白质的外显子部分就连接成为一个连续的可读框RNA 编辑:RNA 的编辑是某些 RNA,特别是 mRNA 的一种加工方式,如插入。删除或取代一些核苷酸残基;它导致了 DNA 所编码的遗传信息的改变。RNA 拼接:将内含子部分切除,将外显子部分进行拼接或选择性拼接而成为成熟的 mRNA,这个过程被称为RNA 的拼接过程。核酶:是具有催化功能的 RNA 分子,是生物催化剂。二、理解题1.简述 RNA 的种类和生物学功能。 1、种类:mRNA(信使 RNA) 、rRNA(核糖体 RNA) 、tRNA(转运 RNA) 、snRNA2、功能:rRNA:是核糖体的组成成分,由细胞核中的核仁合成,而 mRNA tRNA 在蛋白质合成的不同阶段分别执行着不同功能。 mRNA:是以 DNA 的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息传递过程中的桥梁 LPC-2013055tRNA:功能是携带符合要求的氨基酸,以连接成肽链,再经过加工形成蛋白质 snRNA:一直存在于细胞核中,与 40 种左右的核内蛋白质共同组成 RNA 剪接体,在 RNA 转录后加工中起重要作用。另外,还有端体酶 RNA(telomeraseRNA),它与染色体末端的复制有关;以及反义RNA(antisenseRNA),它参与基因表达的调控。2.简述 RNA 转录的过程的主要步骤和特点。1、起始位点的识别:RNA 聚合酶与启动子 DNA 双链相互作用并与之相结合的过程。2、转录的起始:RNA 链上第一个核甘酸键的产生3、RNA 链的延伸: 亚基脱落,RNA pol 聚合酶核心酶变构,与模板结合松弛,沿着 DNA 模板前移;在核心酶作用下,NTP 不断聚合,RNA 链不断延长。4、转录终止:当 RNA 链延伸到转录终止位点时,RNA 聚合酶不再形成新的磷酸二酯键,RNA-DNA 杂合物分离,转录泡瓦解,DNA 恢复双链状态,RNA 聚合酶和 RNA 被释放。3.简述 RNA 聚合酶的结构和各亚基功能。1、结构:由核心酶和 因子组成。核心酶由:两个 亚基,一个 亚基,一个 亚基,一个 亚基组成。2、亚基功能:核心酶组装,启动子识别: 和 共同形成 RNA 合成的活性中心:存在多种 因子,用于识别不同的启动子4.启动子的基本结构。启动子:是一段位于结构基因 5端上游的 DNA 序列,能活化 RNA 聚合酶,使之与模版 DNA 准确的结合,并具有转录起始特异性。例:基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效的形成二元复合物,所以,RNA 聚合酶如何有效的找到启动子并与之结合,是转录起始过程中首先要解决的问题。5原核生物和真核生物的 mRNA 特征区别。1、原核生物 mRNA 常以多顺反子的形式存在。真核生物 mRNA 一般以单顺反子的形式存在。 2、原核生物 mRNA 的转录与翻译一般是偶联的,真核生物转录的 mRNA 前体则需经转录后加工,加工为成熟的 mRNA 与蛋白质结合生成信息体后才开始工作。3、原核生物 mRNA 半寿期很短,一般为几分钟。真核生物 mRNA 的半寿期较长,有的可达数日。4、原核与真核生物 mRNA 的结构特点也不同。真核生物 mRNA 由 5端帽子结构、5端不翻译区、翻译区、3端不翻译区和 3端聚腺苷酸尾巴组成,原核生物 mRNA 无 5端帽子结构和 3端聚腺苷酸尾巴。6.什么是 mRNA5加帽和它的生物学意义?定义:5端的一个核苷酸总是 7-甲基鸟核苷三磷酸(m7Gppp) 。mRNA5端的这种结构称为帽子。意义:1、能被核糖体小亚基识别,促使 mRNA 和核糖体的结合;2、m7Gppp 结构能有效地封闭 mRNA 5末端,以保护 mRNA 免受 5核酸外切酶的降解,增强 mRNA 的稳定。3、是翻译所必须的。7什么是 mRNA poly A 尾巴和它的生物学意义?定义:真核生物 mRNA 的 3端都有 poly A 序列通常位于 mRNA 上的 150-200 个腺苷酸残基(又称为特殊的尾巴结构) 。意义:1、poly A 是 mRNA 从细胞核进入细胞质所必需的形式,大大的提高了 mRNA 在细胞质中的稳定性。2、这一特性已被广泛用于分子克隆。作为反转录酶合成的第一条 cDNA 链的引物。Poly A 位点及 AATAAA的存在对于基因的转录终止和成熟意义重大。8转录终止子的类型和终止原理是什么?类型:强终止子内部终止子;弱终止子。弱终止子可分为两类:一类不依赖于蛋白质辅因子就能实现终止作用;另一类则依赖蛋白辅因子才能实现LPC-2013056终止作用,这种蛋白质辅因子称为释放因子,通常又称 因子。原理:不依赖 因子的终止:终止位点上游一般存在一个富含 GC 碱基的二重对称区,RNA 形成发夹结构;在终止位点前面有一段由 4-8 个 A 组成的序列,RNA 的 3端为寡聚 U。依赖 因子的终止:六聚体蛋白、水解各种核甘三磷酸促使新生 RNA 链从三元转录复合物中解离出来,从而终止转录。9.什么是 RNA 编辑,它有和生物学意义?1、是指转录后的 RNA 在编码区发生碱基的突变、加入或丢失等现象。2、意义:校正作用:有些基因在突变过程中丢失的遗传信息可能通过 RNA 的编辑得以恢复。调控翻译:通过编辑可以构建或去除起始密码子和终止密码子,是基因表达的调控的一种方式。扩充遗传信息:能使基因产物获得新的结构核功能,有利于生物的进化。第四章:蛋白质的合成一:基本概念翻译:转炉形成的 mRNA 在蛋白质合成机制下指导蛋白质合成的过程。起始密码子:是蛋白质翻译的起始位点。终止密码子:蛋白质翻译终止的位点。密码子:mRNA 上每 3 个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一个氨基酸,这三个核苷酸被称为密码子。反义密码子:tRNA 上与 mRNA 上密码子配对的三个核苷酸序列。校正 tRNA:通过改变反密码子区校正蛋白质的结构基因的无义突变或通过反密码子区的改变,把正确的氨基酸加到肽链上,合成正常蛋白质来校正错义突变。同工 RNA:由于一种氨基酸可能有多个密码子,因此有多个 tRNA 来识别这些密码子,即多个 tRNA 代表一种氨基酸,这类氨基酸被称为同工 RNA。错意突变:由于结构基因某个核苷酸的变化使一种氨基酸的密码变成另一种氨基酸的密码。酰胺tRNA 合成酶:是一类催化氨基酸与 tRNA 结合的特异性酶,反应如下:AA+tRNA+ATPAA-tRNA+AMP+PPi。延长因子:对于原核生物指:EF-Tv、EF-Ts、EF-G。对于真核生物指:eEF-1、eEF2。终止因子:对于原核生物指:RF1、RF2、RF3。对于真核生物:eRF1、eRF2。蛋白质前体:新生的,没有功能的,必须经过加工修饰才能转变为有活性的蛋白质。二:思考题1、 遗传密码的特性包括哪些方面?1、连续性:翻译由 mRNA 的 5端的起始密码子开始,一个密码子接一个密码子连续的阅读直到 3端的终止密码子,密码间无间断,没有重叠。2、简并性:由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象。3、密码的通用性与特殊性:在生物界,密码子是通用的,但是有少数特例存在。4、摆动性:在密码子与反密码子的配对中,前两对严格遵守碱基配对原则,第三对碱基有一定的自由度,可以“摆动” ,因而使某些 tRNA 可以识别 1 个以上的密码子。2、 简述蛋白质合成的主要步骤和各阶段的主要事件。1、翻译起始:核糖体与 mRNA 结合并与氨基酰-tRNA 生成起始复合物。2、肽链的延伸:由于核糖体沿 mRNA 5端向 3端移动,开始了从 N 端向 C 端的多肽合成,这是蛋白质合成过程中速度最快的阶段。3、肽链的终止及释放。核糖体从 mRNA 上解离,准备新一轮合成反应。3、 简述 tRNA 的结构特征及其功能。1、结构特征:三叶草型,其中:LPC-2013057a、受体臂:主要由链两端碱基配对序列形成的杆状结构和 3端未配对的 34 个碱基组成。b、TC 臂:根据 3 个核苷酸命名的,其中 表示拟尿嘧啶,是 tRNA 分子所拥有的不常见核苷酸。c、反密码子臂:是根据位于套索中央的三联反密码子命名的。d、D 臂:根据其含二氢尿嘧啶命名的。2、功能:携带氨基酸进入核糖体,在 mRNA 指导下合成蛋白质。即以 mRNA 为模版,将其中具有密码意义的核苷酸序列翻译成蛋白质中的氨基酸序列。4、 参与蛋白质合成的酶和因子有哪些?简述其作用。酶和因子 作用酰胺-tRNA 合成酶 用于活化氨基酸肽基转移酶 催化氨基酸之间形成肽键20 种氨基酸 蛋白质合成的基本原料tRNA 携带 RNA 进入核糖体的转运器mRNA 转录模版核糖体 蛋白质合成的场所起始因子 蛋白质合成起始延长因子 肽链的延伸释放因子 蛋白质合成的终止ATP、GTP 提供能量Mg+ 辅助蛋白质的合成5、 简述蛋白质翻译后加工修饰类型。1、N 端 fMet 或 Met 的切除:蛋白质氨基端的甲酰基在肽链合成前被脱甲酰化酶水解。2、二硫键的形成:蛋白质合成后,一些半胱氨酸氧化生成胱氨酸,两个胱氨酸之间形成二硫键。3、特定氨基酸的修饰:a、磷酸化:主要由多种蛋白激酶催化,发生在丝氨酸,苏氨酸,酪氨酸等氨基酸的侧链。b、糖基化:是真核细胞蛋白质的特征之一。主要由内质网中的糖基化酶催化进行。c、甲基化:主要由细胞质中的 N-甲基转移酶催化进行。4、切除非功能片段:例如:新合成的胰岛素前体是前胰岛素原,必须切除信号肽变成胰岛素原,再切去 C-肽才变成有活性的胰岛素。6、 比较原核生物和真核生物核糖体结构的组成。核糖体 小亚基 大亚基 蛋白质含量 RNA 含量原核生物 70s 30s 50s 2/3 1/3真核生物 80s 40s 60s 2/5 3/57、 什么是 SD 序列,其功能是什么?定义:原核生物 mRNA 上的一个 5-AGGAGGU-3序列,它与 30s 亚基上 16s rRNA 3端的富嘧啶区序列5-GAUCACCUCCUUA-3相互补。功能:能与细菌 16s rRNA 3端识别,辅助蛋白质翻译系统从起始 AUG 处开始翻译。第五章、第六章:分子生物学的研究方法 1、简述 PCR 扩增的原理和过程。1、原料:耐热 DNA 聚合酶;模版 DNA;两种引物;四种脱氧核糖核苷酸、缓冲溶液。2、过程:a、模版 DNA 的变性:模版 DNA 经加热至 93 摄氏度左右一定时间后,使模版 DNA 双链解离成为单链;LPC-2013058b、模版 DNA 与引物退火复性:模版 DNA 经加热变性成单链后,温度降至 55 摄氏度左右,引物与模版 DNA单链的互补序列配对结合;c、引物的延伸:DNA 模版-引物结合物在 TaqDNA 聚合酶的作用下,以 dNTP 为反应原料,靶序列为模版,按照碱基互补配对的原理,合成一条新的与模版 DNA 链互补配对的子链 DNA。d、按照要求重复上述步骤。2、基因组 DNA 文库和 cDNA 文库在构建原理和用途上有什么区别?1、基因组 DNA 文库:把某种生物的基因组 DNA 切成适当大小,分别与载体组合,导入微生物细胞,形成克隆。用途:分离特定基因片段、分析特定基因结构、研究基因表达调控,用于基因组物理图谱的构建和全基因组序列测定。2、cDNA 文库:人工以 mRNA 为模版反转录出 cDNA 后,与载体组合导入微生物中,形成克隆。用途:筛选目的基因、大规模测序、基因芯片杂交等功能基因组学研究。3、简述基因克隆方法主要种类和原理及其应用。1、RACE 技术:原理:依赖于 RNA 连接酶连接和寡聚帽子的快速扩增。应用:在已知 cDNA 序列的基础上克隆 5端或 3端缺失序列。2、cDNA 差示分析法:原理:降低 cDNA 群体复杂性和更换从 DNA 两端接头。应用:充分发挥 PCR 能以指数形式扩增双链 DNA 模版,而以线性形式扩增单链模版的特性,特异性扩增目的基因片段。3、Gateway 大规模克隆技术:原理:利用 噬菌体进行位点特异性 DNA 片段重组,实现了不需要传统的酶切连接过程的基因快速克隆和载体间平行转移。应用:大规模克隆基因组注释的可译框架。4、图位克隆法:原理:1、构建遗传连锁图:将目的基因定位到某个染色体的特定位点,并在其两侧确定紧密连锁的 RFLP 或 RAPD 分子标记。2、通过一系列分析,找出与目的基因距离最近的 RFLP 标记,通过某些技术将位于这两个标记之间的基因片段克隆并分离出来。3、根据基因功能互作原理鉴定目的基因。应用:分离未知性状目的基因。4、简述 Southern blot,Northern blot 和 Western blot 技术原理和用途。1、southern blot:原理:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性,综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果,便可绘制出 DNA 分子的限制图谱。用途:进行基因组 DNA 特定序列定位。2、Northern blot:原理:通过电泳的方法将不同的 RNA 分子依据其分子量大小加以区分,然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段。作用:通过检测 RNA 的表达水平来检测基因表达。3、Western blot:原理:根据被测蛋白质能与特异性抗体结合的特性和该蛋白质的相对分子质量。作用:检测样品中是否含有蛋白质抗原。5、基因表达系列分析技术(SAGE)的原理和用途。1、原理:以 DNA 序列测定为基础定量分析全基因组表达模式。2、用途:直接读出任何一种细胞类型或组织的基因表达信息。6、简述基因芯片技术的方法和原理以及在分子生物学研究的意义。1、方法原理:能同时监测大量靶基因表达的实验手段,从而迅速准确的在基因组水平上阐述不同生物组织或者细胞中各种转录体的变化规律。2、应用:基因芯片可用于进行基因分析。先建立正常人的特定组织,器官的基因芯片,给出标准杂交信号图,用可疑病人的 cDNA 做探针杂交,确定哪些基因的表达被抑制或激活。将芯片玉带研究的 cDNA 或其他样品杂交,经过计算机扫描和数据处理,便可以观察到大规模的基因群在不同组织或同一组织不同发育时期或不同生理条件下的表达模式。7、什么叫 RNAi 和他的应用?1、定义:利用双链小 RNA 高效、特异性降解细胞内同源 mRNA 从而阻断靶基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型。LPC-20130592、应用:用于特异性降解已经转录产生的 mRNA,从而使某个基因表现为沉默。8、什么叫基因敲除和它的基本原理。1、定义:又称“基因打靶” ,该技术通过外源 DNA 与染色体 DNA 之间的同源重组,进行精确的定点修饰和基因改造,具有专一性强、染色体 DNA 可与目的片段共同稳定遗传等特点。2、基本原理:完全基因敲除:通过同源重组法完全消除细胞或者动物个体中的靶基因活性。条件型基因敲除:通过定位重组系统实现特定时 间和空间的基因敲除。9、什么叫酵母双杂交系统和他的应用。1、真核生物转录调控因子具有组件式结构特征,这些蛋白往往由两个或两个以 上相互独立的结构域,其中 DNA 结合结构域和转录激活结构域是转录激活因子发挥 功能所必须的。2、BD 能与特定基因启动区结合,但不能激活基因转 录,由不同转录调控因子的 BD 和 AD 所形成的杂合 蛋白却能行使激活转录的功能

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