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文档简介

实验五 细菌的生化反应实验,掌握细菌鉴定中常用生化实验的原理和方法了解细菌生化试验在细菌鉴定及诊断中的重要意义,一、实验目的,二、实验原理,不同的细菌具有不同的酶系统，对糖类和蛋白质的分解能力不同，最终形成的分解代谢产物不同。 通过对代谢产物的检测，可鉴定细菌。,吲哚试验Indol,细菌分解培养基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可与试剂中的对二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色反应结束加试剂0.5ml 两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性,甲基红实验（M.R实验）,微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸pH下降加入指示剂甲基红红色,V.P实验原理,菌 种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、未知菌斜面培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基试管、 蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、 明胶发酵培养基等。试 剂：大肠杆菌IMViC鉴定管、金黄色葡萄球菌生化鉴定管、 甲基红指示剂、40%KOH、5%-萘酚、乙醚、吲哚试剂等其他材料：试管架、酒精灯、接种环等,三、实验材料,（一）糖发酵试验1. 用记号笔在各试管上标明发酵培养基名称和所接种的细菌取葡萄糖发酵培养基管3支，分别接种大肠杆菌、未知菌，第三支不接种，作为对照。另取3支乳糖发酵培养基，作同样的操作。3. 37 ，24-48h。4. 观察颜色变化及有无气体产生。,三、实验步骤,结果： 将结果填入下表，“ ”表示产酸或产气；“+”表示产酸不产气,“-”表示不产酸不产气。,OF :Oxidize and ferment,氧化发酵实验,（二）IMViC试验(吲哚、甲基红、伏-普、柠檬酸盐）1. 接种和培养 用接种针将大肠杆菌与未知菌分别接种于2支蛋白胨水培养基（吲哚试验），2支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和伏-普试验），2支柠檬酸盐斜面培养基，置37 培养2d。,2. 结果观察（1）吲哚试验：于培养24h后的蛋白胨水培养基内加3-4滴乙醚，摇动数次，静置1-3分，待乙醚上升后沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。,（2）甲基红试验：于培养24h后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养物内加甲基红试剂2滴，培养基变为红色者为阳性，变黄色者为阴性。（3）伏-普试验：于培养24h后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养物内加入5-10滴40%KOH，然后加入等量的5% -萘酚，用力振荡，再放入37温箱中保温5-10分，以加快反应速度。若培养物呈红色者为V-P试验阳性。,（4）柠檬酸盐试验：培养48h后观察柠檬酸盐斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色为阳性，绿色为阴性。,（三）金黄色葡萄球菌的生化鉴定,以16种生化鉴定管检测金黄色葡萄球菌对各种物质的利用情况，每组一套（尿素、蔗糖、精氨酸水溶液、木糖、乳糖、甘露糖、木糖醇、麦芽糖、蕈糖、甘露醇、乙酰葡胺、硝酸盐、蜜二糖、果糖、葡磷胨水、山梨醇），将实验结果记入表格中。接种方法：将鉴定管上端用砂轮划痕折断
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