左乙拉西坦缓释片的制备与质量研究

陕 西 中 医 学 院 学 位 论 文 独 创 性 声 明 及 使 用 授 权 声 明学 位 论 文 独 创 性 声 明本 人 郑 重 声 明 ： 所 呈 交 的 学 位 论 文 ， 是 个 人 在 导 师 的 指 导 下 ， 独 立 进 行 研 究 工作 所 取 得 的 成 果 ， 无 抄 袭 及 编 造 行 为 。 除 文 中 已 经 特 别 加 以 注 明 引 用 的 内 容 外 ， 本 论文 不 含 任 何 其 他 个 人 或 集 体 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 作 品 成 果 。 对 本 文 的 研 究 做 出 重 要 贡献 的 个 人 和 集 体 ， 均 已 在 文 中 以 明 确 方 式 标 明 并 致 谢 。 本 人 完 全 意 识 到 本 声 明 的 法 律结 果 并 由 本 人 所 承 担 的 法 律 责 任 。学位论文作者签名丞曼烬日期：皮严 f中年。月 7日关 于 学 位 论 文 使 用 授 权 的 声 明陕 西 中 医 学 院 有 权 保 留 使 用 本 人 学 位 论 文 ， 同 意 学 院 按 规 定 向 国 家 有 关 部 门 机 构送 交 论 文 的 复 印 件 和 电 子 版 ， 允 许 被 查 阅 和 借 阅 。 本 人 授 权 陕 西 中 医 学 院 可 以 将 本 学位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 编 入 有 关 数 据 库 进 行 检 索 ， 可 以 采 用 影 印 、 缩 印 或 其 他 复 印手 段 保 存 和 汇 编 本 学 位 论 文 。 可 以 公 布 (包 括 刊 登 )论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 。(保 密 论 文 在 解 密 后 应 遵 守 此 规 定 )论文作者签名些日期：小噼 易月 7日论文导师签础 T,-1 v 1日期：小，炸占月 7日中 文 摘 要左 乙 拉 西 坦 是 一 种 新 型 抗 癫 痫 药 物 ， 它 是 迄 今 惟 一 证 实 与 突 触 前 神 经 末 梢 内 突 触小 泡 蛋 白 SV2A 结 合 的 药 物 。 在 临 床 常 用 给 药 剂 量 范 围 内 血 药 浓 度 随 给 药 剂 量 成 比 例增 加 ， 无 剂 量 相 关 的 药 物 蓄 积 效 应 ； 药 物 相 互 间 作 用 少 ， 无 肝 肾 功 能 损 害 及 骨 髓 抑 制性，不良反应少。目前国内以普通制剂为主，每天服药 24 片，而国外以规格为 0。75N片 的 缓 释 片 ， 一 日 服 用 一 片 即 可 ， 这 样 极 大 方 便 了 患 者 用 药 ， 大 大 改 善 患 者 用 药 的 依从 性 ， 进 而 减 少 不 良 反 应 的 发 生 。目前国内已有单位在研制左乙拉西坦缓释制剂，但均没有获得生产批件。本文以质 量 源 于 设 计 的 理 念 ， 以 比 利 时 优 时 比 (UCB)公 司 的 样 品 作 为 参 比 制 剂 研 制 了 左 乙拉 西 坦 缓 释 片 。 在 处 方 研 究 中 以 与 参 比 制 剂 体 外 释 放 度 相 似 因 子 户 作 为 评 价 指 标 ，筛 选 了 缓 释 材 料 的 型 号 和 用 量 、 粘 合 剂 的 种 类 和 用 量 ， 考 察 了 压 片 的 压 力 、 包 衣 工 艺等 对 释 放 度 的 影 响 。 最 终 确 定 以 HPMC K15M 和 HPMC K100M 混 合 使 用 作 为 缓 释 材料 ， 采 用 PVP 作 为 粘 合 剂 ， 在 pH6 0 磷 酸 盐 缓 冲 液 中 ， 释 放 曲 线 接 近 一 级 释 放 ， 两制剂体外释放度相似因子约为 80。以确定的处方和工艺制备了三批样品，质量均符合规定，表明工艺的重现性良好本 文 建 立 了 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 释 放 度 、 含 量 、 有 关 物 质 的 方 法 ， 并 对 方 法 进 行了 精 密 度 、 准 确 度 、 线 性 、 检 测 线 、 定 量 限 、 耐 用 性 等 方 法 学 验 证 ， 建 立 了 科 学 、 合理 的 左 乙 拉 西 坦 缓 释 片 质 量 标 准 。在 影 响 因 素 试 验 中 发 现 ， 高 湿 (Im92 5 )对 片 的 外 观 、 释 放 度 有 一 定 影 响 ； 高温 (60 )使 有 关 物 质 稍 有 增 长 。 样 品 经 过 6 个 月 加 速 试 验 后 ， 释 放 度 有 变 慢 趋 势 ，而 各 试 验 中 含 量 和 有 关 物 质 都 无 明 显 变 化 。 根 据 稳 定 性 试 验 结 果 ， 样 品 应 在 阴 凉 、 干燥 处 储 存 。关键词：左乙拉西坦，缓释片；释放度；质量研究；稳定性；ABSTRACTLevetiracetam is a new anti-epileptic drug which is SO far the only confirmed thepresynaptic nerve terminals within the synaptic vesicle protein SV2A bound In the doserange commonly used in clinical plasma concentration increases proportionally with doseand is not doserelated effects of drug accumulation Levetiracetam is fewer drugdruginteractions， no liver and kidney dysfunction and bone marrow suppression and feweradverse reactions It is generally used with the common tablets in the domestic and beadministrated two or four tablets one day， but the sustainedrelease tablets is usually usedin foreign of 0 759， which is administrated only one tablets one day It is very convenient topatient and can improve the compliance of patient SO that reduce the adverse reactionsSo far there are some research mechanisms having developed the LevetiracetamSustainedrelease Preparation， but have not been agreed to produce We develop theLevetiracetam Sustained-release Tablet with the product of UCB as the referencepreparation The study takes f2 as the evaluation quota， selects the model and amount ofsustainedrelease material， the kinds and amount of adhesives We study the effects ofpressure tableting， coating technology of release Fanally we take HPMC K1 5M andHPMC K1 00M as the sustainedrelease material， PVP as the adhesives In order to evaluatethe reproducibility,we produce three batch products， the quality meet the standardThe study develops HPLC to determine the release， content， related substances andverify the method such as precision， accuracy,the detection limit， limit of quantification，linearity,durability The method Can control the quality sciencely and accuratelyIn the study of influence factors of high humidity(RH92 5 )， we found that have acertain degee of influence in appearance and release； high temperature(60。 C)make relatedsubstances increase slightly In the accelerated test for six months ， the release have thetendency of slow,but content and related substance do not change According to the resultof stability,the sample should be stored at cool， dry placeKey words： Levetiracetam； suatained-release tablet； release； quality research； stabilityAutho r： Zhang ShaohuaTutor ： Wang d i ngang目 录第 一 章 前 言 11 1 研 究 背 景 11 2 研 究 意 义 31 3 体 外 一 致 性 评 价 4第 二 章 处方前研究 62 1 左乙拉西坦基本信息 一 62 2 左 乙 拉 西 坦 缓 释 片 的 设 计 一 62 3 参比制剂信息分析 一 82 4 辅 料 相 容 性 试 验 8第 三 章 处 方 研 究 123 1 试 验 设 备 与 材 料 123 2 释放度测定方法 133 3 释 放 度 评 价 指 标 133 4 参比制剂的分析 143 5 左乙拉西坦缓释片的制备 143 6 处 方 筛 选 与 优 化 163 7 工艺优化 203 8 体外释放度评价 263 9 释药机制初步探讨 294 0讨 论 30第 四 章 质 量 研 究 324 1 实验仪器与试药 324 2 有关物质方法验证 3343 释放度方法验证444 4 含量测定方法验证 494 5讨 论 58第 五 章 稳 定 性 研 究 615 1 影响因素试验 615 2 加速试验 625 35 4长期试验 62小结 635 5讨 论 63第 六 章 全 文 结 论 646 1 处方及工艺研究 646 2 质 量 研 究 646 3 稳定性试验 64参考文献 66附 蜀 乏 68致 射 69左 乙 拉 西 坦 缓 释 片 的 制 备 与 质 量 研 究第一章 前 言1 1 研究背景1 1 1 骨 架 缓 释 制 剂2010 年 版 中 国 药 典 11 中 规 定 ， 缓 释 制 剂 (sustained release preparation)指 在规 定 释 放 介 质 中 ， 按 要 求 缓 慢 地 非 恒 速 释 放 药 物 ， 其 与 相 应 的 普 通 制 剂 比 较 ， 给 药 频率 比 普 通 制 剂 减 少 一 半 或 给 药 频 率 比 普 通 制 剂 有 所 减 少 ， 且 能 显 著 增 加 患 者 的 依 从 性的 制 剂 。缓释制剂的主要特点：使血药浓度平稳，降低药物毒副作用，减少对胃肠道的刺 激 性 。 减 少 给 药 频 率 ， 提 高 患 者 依 从 性 。 对 于 需 要 长 期 服 药 的 慢 性 病 (如 ， 心 血管 病 、 高 血 压 、 精 神 疾 病 )患 者 ， 缓 释 制 剂 可 以 1 日 给 药 1 次 ， 通 过 其 缓 释 作 用 ， 延长药物的作用时间，减少漏服和错服的概率，大大提高了患者依从性。骨架型制剂是指药物以分子或结晶状态分散在一种或多种惰性骨架材料中，其骨架 起 贮 库 作 用 ， 主 要 用 于 控 制 制 剂 的 释 放 速 率 。 骨 架 型 制 剂 按 骨 架 材 料 的 不 同 性 状 可分 为 ： 水 溶 蚀 (亲 水 凝 胶 )骨 架 制 剂 、 不 溶 性 骨 架 制 剂 、 生 物 溶 蚀 性 骨 架 制 剂 等 。 亲水 凝 胶 骨 架 材 料 指 遇 水 或 消 化 液 骨 架 膨 胀 ， 形 成 凝 胶 屏 障 从 而 控 制 药 物 释 放 ， 大 致 可分 为 四 类 ： 天 然 植 物 或 动 物 胶 。 如 海 藻 酸 钠 、 黄 原 胶 、 琼 脂 、 西 黄 耆 胶 、 果 胶 、 瓜耳 胶 等 ； 纤 维 素 衍 生 物 。 如 羟 丙 甲 纤 维 素 (HPMC)、 甲 基 纤 维 素 (MC)、 羧 甲 基纤 维 素 (SCMC)等 ； 非 纤 维 素 多 糖 。 如 壳 聚 糖 、 甘 露 聚 糖 、 半 乳 糖 等 ； 乙 烯 聚合物和丙烯酸树脂。如聚乙烯醇、聚羧乙烯等；生物降解材料指骨架材料逐渐降解，药物从骨架中释放，常用的有：硬脂酸、单硬酸甘油脂、巴西棕榈蜡、十八烷醇等；不 溶 性 骨 架 材 料 指 不 溶 于 水 或 水 溶 性 极 小 的 高 分 子 聚 合 物 等 ， 常 用 的 有 ： 乙 基 纤 维 素 、聚 硅 氧 烷 、 聚 乙 烯 、 聚 丙 烯 、 聚 甲 基 丙 烯 酸 甲 酯 和 乙 烯 醋 酸 乙 烯 共 聚 物 等 。三种不同骨架其释药机理不同，主要有扩散、溶蚀、扩散和溶蚀相结合。其中亲水 凝 胶 骨 架 缓 释 制 剂 最 为 常 见 ， 释 放 机 制 一 般 是 扩 散 和 溶 蚀 共 同 作 用 ： 亲 水 凝 胶 骨 架遇 水 膨 胀 形 成 凝 胶 屏 障 ， 该 屏 障 处 于 动 态 变 化 中 ， 一 方 面 水 分 间 骨 架 核 心 渗 透 进 一 步形成凝胶；一方面随着水分在凝胶层中含量变化，骨架外缘逐渐溶蚀。造 成 亲 水 凝 胶 骨 架 膨 胀 从 而 体 积 增 加 的 根 本 原 因 是 亲 水 凝 胶 材 料 遇 水 后 其 玻 璃化 温 度 (风 )下 降 ， 由 玻 璃 态 向 高 弹 态 迅 速 转 变 。 这 是 由 于 聚 合 物 分 子 链 在 吸 水 后 ，陕 西 中 医 学 院 2014 届 硕 士 学 位 论 文间 距 和 旋 转 半 径 扩 张 至 一 种 溶 剂 化 状 态 ， 而 呈 现 出 高 弹 态 的 性 质 ， 即 分 子 链 运 动 加 强 ，在 较 小 应 力 下 ， 可 迅 速 产 生 很 大 的 形 变 ， 其 它 分 子 如 药 物 和 水 在 其 中 的 扩 散 速 率 大大增 30Nt21。我 国 从 80 年 代 初 开 始 研 制 缓 释 制 剂 ， 但 是 投 入 临 床 的 品 种 较 少 ， 目 前 临 床 上 应用较多的缓释制剂大多为进口或合资药厂的产品。骨架缓释制剂由于投入较少、经济风险低、制备简便，可采用传统的生产工艺与设备，适合大生产，因此成为应用最广泛 的 骨 架 型 制 剂 。1 1 2 癫 痫 病癫 痫 (epilepsy)， 俗 称 “羊 角 风 ”或 “羊 癫 风 ”， 是 神 经 元 突 发 性 异 常 放 电 ， 引 起 短暂的脑功能失调的一种慢性疾病，以突然性、暂时性、反复性发作为特点。据我国最新 流 行 病 学 资 料 显 示 ， 国 内 癫 痫 的 总 体 患 病 率 为 7 0 o， 年 发 病 率 为 28 8 10 万 ， 1年 内 有 发 作 的 活 动 性 癫 痫 患 病 率 为 4 6 。 131。 据 此 估 计 我 国 约 有 900 万 左 右 的 癫 痫 患者，其中 500-600 万是活动性癫痫患者，同时每年新增加癫痫患者约 40 万，在我国癫 痫 已 经 成 为 神 经 科 仅 次 于 头 痛 的 第 二 大 常 见 病 。 在 过 去 的 20 年 间 ， 随 着 人 类 卫 生保健意识的增强以及对人们癫痫疾病认知的不断提升，开发出的抗癫痫药物无论是数量 还 是 种 类 都 有 了 大 幅 增 加 。 然 而 ， 由 于 部 分 类 型 癫 痫 发 病 机 制 尚 未 完 全 明 确 ， 因 此抗 癫 痫 治 疗 领 域 至 今 仍 有 着 尚 未 满 足 的 需 求 期 待 填 补 。根 据 2010 年 国 际 抗 癫 痫 联 盟 最 新 给 出 的 癫 痫 发 作 分 类 方 案 ， 癫 痫 发 作 分 为 部 分性局灶性发作、全面性发作、不能分类的发作、近年新确认的发作。而其发病机制非常复杂，迄今未完全阐明。近年来的研究表明，癫痫疾病与离子通道、神经递质、神 经 胶 质 细 胞 等 有 密 切 的 关 系 ， 抗 癫 痫 药 物 主 要 的 作 用 机 制 有 以 下 几 类 ：(1)离 子 通 道 【 4】离子通道是体内可兴奋性组织进行兴奋性调节的基础，任何离子通道的改变都有可能异化通道蛋白的正常功能，造成中枢神经系统电活动的失衡，最终诱发异常同步化 放 电 ， 从 而 导 致 癫 痫 发 作 。(2)神经递质 【5】谷 氨 酸 与 1， 氨 基 丁 酸 (GABA)分 别 作 为 主 要 的 兴 奋 性 神 经 递 质 与 抑 制 性 神 经 递质而与癫痫的发作有着密切的联系，它们的生成、释放、灭活及受体的异常皆可引起神 经 元 异 常 、 过 度 的 同 步 性 放 电 ， 也 是 抗 癫 痫 药 物 作 用 的 靶 点 。(3)星 形 胶 质 细 胞 【 6】，左 乙 拉 西 坦 缓 释 片 的 制 备 与 质 量 研 究星 形 胶 质 细 胞 是 大 脑 重 要 的 胶 质 细 胞 ， 对 神 经 元 具 有 支 持 和 保 护 作 用 。 星 形 胶 质细 胞 形 态 的 改 变 、 转 运 功 能 是 否 正 常 等 都 与 癫 痫 密 切 相 关 。 癫 痫 时 星 形 胶 质 细 胞 功 能上 的 增 强 ， 反 复 激 活 的 星 形 胶 质 细 胞 可 能 在 癫 痫 发 作 中 起 重 要 作 用 ； 星 形 胶 质 细 胞 反馈 性 分 泌 细 胞 因 子 对 神 经 元 的 活 动 与 癫 痫 发 作 极 为 相 关 。抗癫痫药物如：加吧喷丁、氨已烯酸、拉莫三嗪、噻加宾、唑尼沙胺、托吡酯、奥 卡 西 平 【 7】 等 治 疗 癫 痫 的 属 于 传 统 机 制 。 左 乙 拉 西 坦 是 一 种 新 型 抗 癫 痫 药 物 ， 其 确 切抗 癫 痫 作 用 机 制 虽 尚 不 完 全 明 确 ， 但 目 前 普 遍 认 为 其 与 传 统 抗 癫 痫 药 物 的 作 用 机 制 不同 ， 它 是 迄 今 惟 一 证 实 与 突 触 前 神 经 末 梢 内 突 触 小 泡 蛋 白 SV2A 结 合 的 抗 癫 痫 药 物 。新近研究发现脑内突触囊泡蛋白 SV2A 是其发挥抗癫痈作用的独特位点，左乙拉西坦与 SV2A 在 脑 内 有 很 高 的 亲 和 性 ， 而 且 与 抑 制 痫 性 放 电 密 切 相 关 ； 左 乙 拉 西 坦 发 挥 抗惊 厥 作 用 相 关 的 离 体 机 制 还 包 括 治 疗 浓 度 时 抑 制 海 马 脑 片 CAl 区 锥 体 神 经 元 高 电 压激 活 的 N 型 钙 通 道 ； 左 乙 拉 西 坦 虽 然 不 直 接 作 用 于 受 体 ， 但 能 通 过 解 除 负 性 变 构 抑制 剂 对 Y 氨 基 丁 酸 能 和 甘 氨 酸 能 神 经 元 的 抑 制 ， 从 而 间 接 起 到 增 强 中 枢 抑 制 的 作 用【8】o全 国 22 大 城 市 医 院 购 药 情 况 统 计 数 据 表 明 ， 2005 2009 年 间 ， 抗 癫 痫 药 市 场 呈平稳发展的态势，用药金额在不断递增，其在神经系统用药中的份额也稳定在 5 0左 右 【 9J， 因 此 抗 癫 痫 药 物 具 有 巨 大 的 市 场 前 景 。1 2 研究意义左 乙 拉 西 坦 (1evetiracetam， LEV， 商 品 名 Keppra)， 为 吡 拉 西 坦 衍 生 物 中 的 左 旋乙 基 吡 拉 西 坦 ， 是 比 利 时 优 时 比 (UCB)公 司 研 发 的 新 型 抗 癫 痫 药 物 。 左 乙 拉 西 坦 作为辅助药物治疗癫痫，在儿童及成人均有良好的疗效和耐受性。在临床常用给药剂量范围血药浓度随给药剂量成比例增加，无剂量相关的药物蓄积效应；药物相互间作用少 ， 无 肝 肾 功 能 损 害 及 骨 髓 抑 制 性 ， 不 良 反 应 少 10。 11。LEV 具有理想的药物代谢动力学特征，口服生物利用度 95 ，血药浓度达峰时间约 1-5 h， 进 食 不 影 响 其 生 物 利 用 度 ； LEV 的 血 药 浓 度 半 衰 期 在 健 康 成 年 人 和 成 年癫 痫 患 者 均 为 6 8 h， 儿 童 癫 痫 患 者 为 5 7 h， 以 半 衰 期 为 间 隔 连 续 给 药 ， 24 48 h 即可达到稳态血药浓度； LEV 几乎不与血浆蛋白结合，代谢不依赖细胞色素 P450 系统，对 肝 酶 系 统 无 诱 导 或 抑 制 作 用 ； 34 的 LEV 依 赖 肾 脏 经 水 解 作 用 转 化 为 无 活 性 代 谢产 物 后 随 尿 液 排 出 ， 剩 余 的 约 66 则 以 原 型 形 式 随 尿 液 排 出 12】 。陕 西 中 医 学 院 2014 届 硕 士 学 位 论 文Keppra 于 2000 年 4 月 获 FDA 批 准 ， 在 美 国 和 欧 盟 上 市 ； 左 乙 拉 西 坦 缓 释 片(商品 名 Keppra XRTM)于 2008 年 获 准 在 美 国 上 市 。 目 前 在 全 球 超 过 66 个 国 家 和 地 区 上市 ， 全 球 有 超 过 100 万 人 的 治 疗 记 录 ， 是 目 前 美 国 癫 痫 病 治 疗 中 应 用 最 多 的 新 型 抗 癫痫 药 物 。 Keppra 以 其 特 殊 的 治 疗 优 势 不 负 众 望 ， 上 市 后 不 久 即 在 临 床 中 获 得 广 泛 肯定，其销售额一路飙升。自 2004 年以强势增长态势迈入全球畅销药行列，并且在此后 几 年 ， 其 全 球 销 售 继 续 稳 步 攀 升 ， 尤 其 在 2007 和 2008 年 其 销 售 额 均 超 过 了 10亿美 元 ， 分 别 达 到 14 07 亿 和 18 64 亿 美 元 ， 成 为 了 名 副 其 实 的 重 镑 炸 弹 级 产 品 【 13】 。 左乙拉西坦于 2006 年获准进入中国市场， 2008 年该药销售额比 2007 年飙升了 8 倍，达 1443 万 元 ； 2009 年 更 是 再 接 再 厉 ， 实 现 了 2455 万 元 的 销 售 佳 绩 ， 相 比 2008 年增幅 达 70 。