免疫复合物及检测ppt课件

免疫复合物及检测1 当 Ag在体内持续存在或由微生物与宿主细胞不断释放入细胞外液时，可引起特异性 Ab产生，从而形成免疫复合物。一 .免疫复合物含义及形成：（一）含义： immune complex， IC 它主要指 AgAb复合物 及 AgAbC复合物 两种。2（二） IC的形成：1.Ag持续存在于体内：（产生 Ab，形成AgAb或 AgAbC） 感染：是 Ag持续存在于体内的最常见原因，如细菌、病毒、寄生虫感染； 组织 Ag：自身组织的部分成分发生变异，如 DNA、 IgG等； 外源性 Ag：在生活、工作环境中接触的外来性物质如粉尘、药物等； 肿瘤 Ag：如白血病等32.IC的清除受阻：形成的 IC一般分为 大分子 IC、中等大小的 IC及小分子 IC三种： 大分子 IC：沉降系数为 19S， MW100万，易被巨噬 细 胞吞噬而清除； 小分子 IC：可溶性， 沉降系数 6.6S， MW 50万，易被 肾 小球 滤过 而排除； 中等大小的 IC： 沉降系数在 8.8S 19S间，MW在 50 100万间，既不易被 巨噬 细 胞吞噬也不易被 肾 小球 滤过 ，而沉 积 在血管壁、 肾 小球基底膜 处 ，形成免疫复合物病。4二 .免疫复合物病：（一）致病机理：中等大小的 IC沉积在体内，通过 激活补体、激活血小板而致病。激活补体： a.激活 C3a、 C5a、 C567 趋化嗜中性粒细胞 释 放溶 酶 体 酶 引起 组织损伤 ； b.激活 C3a、 C5a（过敏毒素） 作用于肥大 细 胞和嗜碱性粒 细 胞 释 放血管活性物质 血管通透性增加 引起 组织 水 肿 ；5激活血小板： 与血小板上的 IgGFc受体结合 使血小板聚集 微血栓形成 局部出血缺血、坏死67常 见 病 损 部位 肾 小球、关 节 、皮肤8（二）所致疾病 内脏毛细血管炎：如急性肾小球肾炎、变态反应性肺泡炎、溃疡性结肠炎 关节炎：风湿性关节炎、类风湿性关节炎； 皮肤：皮肤炎、脉管炎； 全身： SLE9血血 清清 病病10类风湿性关节炎类风湿性关节炎体内体内 变性变性 IgG刺激机体产生刺激机体产生抗体抗体 (称为类风湿因子称为类风湿因子 ,IgM型型 )，形成，形成 IC，沉积于全身，沉积于全身小关节滑膜处，引起小关小关节滑膜处，引起小关节红肿、变形僵直、失去节红肿、变形僵直、失去运动功能。运动功能。11系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮细胞核物质细胞核物质 (如如 DNA、 RNA、核内可溶、核内可溶性蛋白性蛋白 )刺激机体刺激机体产生产生 抗核抗体抗核抗体 ，形，形成成 IC，沉积于全身，沉积于全身毛细血管、关节滑毛细血管、关节滑膜、心脏瓣膜等处膜、心脏瓣膜等处，引起全身性损伤，引起全身性损伤。12三 .IC检测方法的分类：(一 ) 局部组织中 IC的检测：制备局部组织切片，用光学显微镜或电镜检测 IC所致典型病理改变；或用 IF、免疫酶技术检测 IC在组织中的沉着。（二） 循环中 IC的检测：Circle immune complex，简称 CIC。CIC检测方法大致分为两类：13 1.抗原特异性方法： 利用 IC中 Ag的特异性而设计的方法。但由于每一待测标本中 Ag的特异性是不同的，不同 Ag就需不同方法进行检测，造成方法不统一，因此临床上使用较少。 2.抗原非特异性方法： 利用 CIC与游离的 Ag或 Ab相比较，在物理性质、生物学活性上的差异而设计的方法。14根据物理性质上的差异而设计的方法： A.根据 CIC与游离的 Ag或 Ab分子大小不同而设计的方法：凝胶过滤超滤法、蔗糖密度超速离心法； B.根据 CIC与游离的 Ag或 Ab溶解度不同而设计的方法：聚乙二醇（ PEG）沉淀试验15根据生物学性质的差异而设计的方法： A.根据 C1q+CIC （ AgAb)而设计的方法：抗补体试验、 C1q结合试验； B.根据 IgGFc受体 CIC （ AgAb)而设计的方法：血小板凝集试验； C.根据 C3b受体 CIC（ AgAbC)而设计的方法： Raji细胞试验16四 .IC检测方法概述：1.聚乙二醇（ PEG）沉淀试验： 原理： PEG为水溶性多聚体，在 3 -4低浓度时，能使血清中 CIC沉降。17 方法： PEG待测血清 使 PEG终浓度达到 3 44 过夜离心，取出沉淀将沉淀用 NaOH溶解在分光光度计上测定 OD（ A）值18优缺点： 该试验不但可检测 IC，还可获得 IC（收集沉淀），简单，快速； 特异性差，易受血清中大分子物质干扰； 常作为 CIC检测的粗筛试验192.抗补体试验：抗补体试验： 原理： C1q+IC 方法：豚鼠血清（含补体 )+待测血清 (561h灭活其中补体） 再加入致敏羊红细胞不溶血 溶血 （ IC阳性） （ IC阴性）2021优缺点：该试验敏感，干扰因素多，易出现假阳性 凡引起补体失活的原因都可引起假阳性，因此豚鼠血清必须保持新鲜； 待测血清在 561h灭活自身补体时，对其中的 Ig构型有改变，可引起 Ig聚集代替 IC而与C1q结合，出现抗补体活性。223.C1q结合试验 ： 原理： C1q IC 方法：待测血清（灭活补体）同位素标记的 C1qPEG(使 IC沉降） 测定沉淀物中的放射活性 优点：对 IC的检测既可定性又可定量，重复性好，结果客观；缺点：易出现假阳性， C1q不但能与 IC结合，还能与血清中鱼精蛋白、 C反应蛋白结合234.血小板凝集试验： 原理： IC+血小板上的 IgGFc 受体 血小板凝集 方法：待测血清血小板若出现凝集，则待测标本中含有 IC ；若不出现凝集，则待测标本中无 IC 。 特点：由于不同个体血小板对 IC的敏感性不同，所以实际运用时，至少需要三份不同个体的混合血小板。 可出现假阳性：高浓度的 Ig、凝血酶、蛋白溶解酶、胶原等都可使血小板凝集。245.Raji 细胞试验： 原理： Raji细胞是一种有 B细胞特征的淋巴母细胞样细胞，由 Burkitt氏淋巴瘤衍变而来，其表面无 SmIg，含有大量的补体受体，尤其是 C3b受体。该法仅适用于检测AgAbC复合物。 方法：待测血清 +Raji细胞 孵育 洗 涤 ，加入同位素 标记 的抗人 IgG 离心、洗 涤 检测 沉淀 细 胞的放射活性。25五 .IC检测的有关技术问题： 到目前为止，所有检测 IC 的试验，还没有另人满意的标准化措施； 在体外制备的 IC还很不稳定，因此用人工合成的复合物作为定量标准不适宜。 目前普遍应用的标准品是 HAHG 热聚合人 IgG（不是真正的 IC）。26检测 IC的理想方法 ： 操作简便，敏感； 可检测各种类型 IC