局部用药的毒性研究

第十九章 局部用药的毒性研究局部用药的毒性试验是根据局部用药部位的解剖和生理特点设计的。涂剂、擦剂皮肤用药 膏剂、凝胶剂其他透皮吸收制剂常用局部用药制剂 滴眼剂、滴鼻剂喷雾剂、肌内注射直肠和阴道制剂第一节 皮肤用药（制剂）的毒性研究一、皮肤组织结构表皮真皮皮下组织皮肤覆盖全身。表皮较薄，厚为 0.1-0.2mm。角质层表皮 颗粒层生发层真皮依附于皮下组织，厚约 2mm。胶原真皮 弹性硬蛋白纤维母细胞二、化学物质对皮肤毒性作用的类型皮肤具有一定的保护作用，药物及其他化学物质对皮肤产生的损害损害主要为：一）皮肤原发性刺激原发性刺激 - 药物直接作用于皮肤引起的病理性反应。红斑、水肿原发性刺激的表现 水疱疮溃疡强碱脂溶性溶剂原发性刺激机理 镉酸盐银、汞、砷等金属盐特征有明确的毒理学量 -效关系。首次接触即可产生某种特征。二）皮肤致敏皮肤致敏为变态反应，包括药物致敏和光敏反应。作用机制药物与蛋白以共价键结合，具用免疫原性。药物在光的作用下，形成半抗原性物质。特征没有明确的毒理学量 -效关系。再次接触该药物才能激发特定症状。三）皮肤致癌有机大分子化合物 -多环芳烃类金属盐 -无机砷盐三、皮肤用药（制剂）毒性研究一）皮肤用药急性毒性试验1、试验目的 -观察完整与非完整皮肤短期内接触受试物所产生的毒性反应。2、实验材料1）动物 -家兔、豚鼠、大鼠2）受试药物 -膏剂、液体或粉末3、试验方法1）剂量选择 -3个剂量组2）给受试物方法和观察 -涂敷固定4、结果判断二）皮肤用药长期毒性试验1、试验目的 -观察动物皮肤长期接触受试物，对机体产生的异常毒性反应。2、实验材料1）动物 -家兔、豚鼠或大鼠2）受试药物 -膏剂、液体几粉末3、试验方法1）剂量选择 -3个剂量计对照组2）给受试物方法及时间 -涂敷固定、每日一次至少 6小时，按临床用药时间的 3倍时间。 3）检测项目 -每日观察皮肤临床症状、皮肤病力学检查；一般症状、血液学、血液生化指标及病理学检查。4、结果判断进行统计学计算，并应写明安全剂量、中毒剂量、中毒的靶器官以及中毒的可逆性。三）皮肤刺激性试验1、试验目的 -观察动物皮肤接触受试物后所产生的刺激反应情况。2、实验材料1）动物 -家兔、豚鼠2）受试药物 -膏剂、液体或粉末3、试验方法 - 1g或 1ml涂敷固定、于去除受试物后 1、 24、 48和 72小时观察涂敷部位红肿、红斑以及上述变化的恢复情况和时间。 皮肤刺激反应评分反应 分值 反应 分值红斑 水肿无红斑 0 无水肿 0略见红斑 1 稍有水肿 1中度红斑 2 明显可见 (边缘高出皮肤 )2严重红斑 3 皮肤隆起水肿轮廓清晰 3紫色红斑并有焦痂形成 4 水中隆起 1mm 4总分 84、结果判断与评价强 度 平均分值 无刺激 0.5(0-0.5)轻度刺激 2.0(0.5-2.0)中度刺激 4.0(0.5-4.0)严重刺激 6.0(0.5-6.0)极严重刺激 6.0(6.0-8.0) 四）皮肤过敏试验1、试验目的 -通过动物皮肤重复接触受试物，观察机体免疫系统反映在皮肤上的表现。2、实验材料1）动物 -豚鼠2）受试药物 -膏剂、液体不稀释直接涂敷3）阳性致敏物 -2,4-而硝基氯代苯1%-致敏浓度0.1%-激发浓度3、试验方法1）试验分组随机分成三组，给药组、赋形剂组、阳性对照组2）致敏接触0.1-0.2ml(g)涂于脱毛区，接触 6小时，第七天和 14天亦同样方法重复。3）激发接触末次给药后第 14天，激发给药， 6、 24、 48和 72小时观察皮肤过敏情况。4、结果判断与评价皮肤过敏反应评分标准刺激反应 程度 分值 刺激反应 程度 分值红斑形成 水肿形成无红斑 0 无水肿 0轻度红斑 1 轻度水肿 1中度红斑 2 中度水肿 2重度红斑 3 重度水肿 3水肿性红斑 4最高总分值 7致敏率分类过敏反应强度 致敏率 %弱致敏性 0-10轻度致敏性 10-30中度致敏性 30-60高度致敏性 60-80极度致敏性 80-100红斑形成总分 +水肿形成总分 反应平均值 =合计动物总数皮肤涂抹致癌试验1、试验目的2、实验材料1）动物 -敏感品系鼠2）受试物3）阳性对照药 -苯比、巴豆油3、试验方法1）试验分组 -阴性、阳性、实验组2）给药量 -每周 1-2次3）给药方法4）给药后观察4、结果判断与评价1）皮肤损伤程度2）组织病理学检查3）皮肤肿瘤发生率计发生率与时间的关系，评定皮肤致癌的效应。五）皮肤吸收试验1、整体皮肤吸收试验化合物经皮渗透的量同皮肤微灌流量直接相关，通过测量与皮肤灌流量相关的电压，测算出化学经皮吸收速率。1） LDV法用 643.8nm氦 -氖激光，照射血管中流动中的红细胞，测量用药前后变化，测定出皮肤吸收速度。2） PPG法LED射出的 800-940nm红外线照射，收集反射光转变成电压波谱，通过电压波谱变化，计算皮肤吸收量的大小。2、离体皮肤吸收试验1）静态渗透装置上室防药剂，下室接受液，下室中间方皮肤并密封，药剂放于皮肤之上，每隔一定时间后，测定接受液，计算皮肤渗透率。2）流动渗透装置上述方法的改进，接受液为血浆或白蛋白，以 5ml/小时的速度灌流，测定不同时间灌流液的药量。以次测定皮肤的透过率。六）皮肤光敏试验1、试验目的 -观察受试物接触皮肤后遇光照是否有光敏反应2、试验方法1）光敏反应试验评价标准2）光毒性试验评价标准第二节 眼睛用药刺激性试验眼睛的结构角膜结膜炎炎症 角膜表面水肿上皮脱落刺激作用 结膜充血、水肿灼痛、流泪、畏光慢性结膜炎、睑腺炎、分泌物增多试验目的 角膜浑浊刺激性试验 试验方法 虹膜结果与评价 结膜水肿分泌物一）试验目的 -观察动物眼睛接触受试物所产生的刺激反应二）试验方法家兔，原液（原膏）加入眼睛肿 0.1ml(0.1g)， 闭合 5-10分钟。 6、 24、 48和