微生物实验实验一培养基的配制和灭菌法

微生物学实验本学期本学期 农业微生物学农业微生物学 实验课共开设实验课共开设 6个实验个实验项目。项目。p 培培 养养 基的配制及基的配制及 灭灭 菌法；菌法；p 微生物微生物 测数测数 技技 术术 ；p 微生物菌落形微生物菌落形 态观态观 察、察、 纯种纯种 分离及接分离及接 种种 技技 术术 ；p 细细 菌的染色技菌的染色技 术术 及基本形及基本形 态态 、特殊、特殊 构构 造造 观观 察；察；p 放放 线线 菌、霉菌形菌、霉菌形 态观态观 察；察；p 化化 学药剂对学药剂对 微生物的作用及拮抗微生物的微生物的作用及拮抗微生物的 筛选筛选 。实验课课程安排实验课课程安排一个连续的大实验 “ 环境微生物分离、纯化、观察及功能检测 ”实验课考核办法实验课考核办法实验成绩（占课程总成绩 30%）平时成绩技能考核： 操作考试实验报告 :按时交。操作：实验实验 室室 规则规则 和要求和要求实验一实验一 培养基的配制和灭菌法培养基的配制和灭菌法 培养基 ： 按照微生物生长发育的需求，将不同组合的营养物质调制成的营养基质 。一、实验原理一、实验原理营养成分n 水分n 碳源n 氮源n 无机盐n 生长因子不同微生物的生长对于培养基有不同的要求（细菌、放线菌： pH值中性至偏碱性；真菌喜好酸性）n 天然培养基 : 用生物的组织、器官以及提取物配制成的培养基。 通常其化学成分难以确切知道。n 合成培养基 ： 用成分和数量已知的化学试剂配制而成。 成分明确，重复性好。n 半合成培养基 : 部分天然材料和部分纯化学试剂配制而成。培养基的种类培养基的种类1. 按照培养基成分不同分为：培养基的种类培养基的种类2. 按照培养基形态的不同分为：n 液体培养基 ： 将配方中的成分溶解而成，不含凝固剂。n 固体培养基： 加入琼脂凝固剂 1%-2%.n 半固体培养基： 加入琼脂凝固剂 0.2%-0.5%。培养基凝固剂培养基凝固剂琼脂 ： 常用 ； 海藻多糖，不易被分解利用；透明度 好；凝固点： 45 ，溶解点： 96 ；硅胶：n 基础培养基 :n 选择培养基 ：n 加富培养基n 鉴别培养基培养基的种类培养基的种类3. 按照培养基用途不同分为：培养基配制流程原料称量 加热溶解、搅拌 定容 调节 pH值过滤澄清 分装 塞棉塞和包扎、注明培养基名称、班级、组高压蒸汽灭菌 冷藏、待用（配制 1000mL用量）牛肉膏 3.0g蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g琼脂 10 15g水 1000mLpH 7.2 7.4（配制 1000mL用量）可溶性淀粉 20gKNO3 1.0gNaCl 0.5gK2HPO4 0.5gMgSO47H2O 0.5gFeSO47H2O 0.01g琼脂 10 15g水 1000mLpH 7.4 7.6 牛肉膏蛋白胨培养基 高氏 1号培养基 马丁氏培养基（配制 1000mL用量）葡萄糖 10g蛋白胨 5.0gKH2PO4 1.0gMgSO47H2O 0.5g孟加拉红 （ 1/300) 10mL琼脂 10 15g水 1000mLpH 自然马丁氏培养基培养基配方二、实验内容二、实验内容1 以小组为单位，分别配制 牛肉膏蛋白胨培养基 （第一组、第四组）、 高氏一号培养基 （第二组）、 马丁氏培养基 （第三组）各 400mL。 234每组制备无菌水： 1个 90mL 三角瓶无菌水、 6只 9mL试管无菌水。每人包 1mL移液管一支。学习灭菌、消毒方法；操作高压蒸汽灭菌。灭菌和消毒技术（ P16)灭菌： 用物理或化学的方法杀死物体上全部微生物的过程。消毒 ： 用物理或化学的方法杀死物体上大部分微生物 (特别是 病原微生物 )，尚存少数无害微生物 。灭菌（消毒）技术 过滤除菌辐射杀菌高温灭菌化学药剂灭菌常用灭菌方法干热灭菌时间： 1-2小时温度： 160-170压力： 常压仪器： 电烘箱高压蒸汽灭 菌时间： 15-30分钟温度： 121压力 : 0.1M