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实验 2 分离 以尿素为氮源的 微生物一 .实验原理尿素 NH3中性 碱性酚红颜色： (酸性 )黄色 红色(变色范围 pH6.4-8.2)二 .实验目的 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌 (有脲酶 ) 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基 pH的变化 (脲酶催化的化学反应 )三 .实验步骤 .倒平板 .制备一定浓度梯度的细菌悬液 g土壤 ml无菌水，振荡，为 -2稀释液，依次制备 -3、 -4、 -5的土壤稀释液。 .稀释涂布分离法分离细菌 .制备无菌的固体培养基和尿素固体培养基 P26 .培养观察 （倒置， 37 24-48h ）（无菌， 0.1ml，玻璃刮刀）配制培养基 尿素培养基葡萄糖 0.025gNaCl 0.12gK2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g酚红 0.25g尿素 10ml LB培养基蛋白胨： 0.25g酵母提取液： 0.12gNaCl： 0.25g琼脂糖 ： 0.5g 对照组选择培养基实验组为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？接种 取 0.1ml菌悬液涂布分离涂布分离37 倒置培养按浓度捆成一摞恒温 37 培养1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基 因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂思考题：2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与 SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现。 细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解，水解后产生氨，氨为碱性，酚酞在酸性环境里呈黄色，碱性里呈红色。培养基中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株以尿素为氮源。4、与全营养培养基上的菌落数比较，为什么尿素培养基上只有少数菌落 表明能利用尿素的细菌在土壤菌落中只占有极少数。5.
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