实验6酶的特异性

实验六 酶的特异性生物化学实验之山东师范大学生命科学学院【 实验目的 】学习酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制备，了解酶的特异性及检测方法。【 实验原理 】酶是生物催化剂，酶对所作用的底物有严格的选择性，即酶的特异性。淀粉和蔗糖都是非还原性糖，分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。Benedict试剂（含有 Cu 2+）常用于检验还原糖的存在，其被还原后生成砖红色的 Cu2O沉淀。【 器材及试剂 】（一）器材：1. 恒温水浴锅 2. 试管及试管架 3. 离心机 4. 吸量管5.烧杯、量筒 、漏斗等（二）试剂： 1. 2%蔗糖 2. 1%淀粉（内含 0.3%的 NaCl）3. 唾液淀粉酶溶液 4. 蔗糖酶溶液 5. Benedict试剂【 实验步骤 】（一）淀粉酶的特异性1.唾液淀粉酶溶液的制备：先用蒸馏水漱口，然后用洁净试管 1支，取唾液（无泡沫）约 2ml，蒸馏水 20倍稀释，备用。2.取试管 5支，标号，按下表所列的次序操作：试剂 试 管 编 号1 2 3 4 51% 淀粉溶液（ ml） 1.0 1.0 2% 蔗糖溶液（ ml） 1.0 1.0 唾液淀粉 酶 （ml） 1.0 1.0 1.0蒸 馏 水（ ml） 1.0 1.0 1.03. 摇匀，置 37 恒温水浴保温10min，然后每管加入 Benedict试剂 2ml，再放沸水浴 5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。 (二 ) 蔗糖酶的特异性1. 蔗糖酶溶液的制备：取活性干酵母 1.0g，置于研钵中，加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min，再加蒸馏水至总体积约为20ml，过滤或离心，滤液或上清液备用。2. 取试管 5支，标号，按下表所列的次序操作：试剂 试 管 编 号1 2 3 4 51% 淀粉溶液（ ml） 1.0 1.0 2% 蔗糖溶液（ ml） 1.0 1.0 蔗糖 酶 （ ml） 1.0 1.0 1.0蒸 馏 水（ ml） 1.0 1.0 1.03. 摇匀， 置 37 恒温水浴保温10min，然后每管加入Benedict试剂 2ml，再放沸水浴 5min。观察各管颜色变化，并解释实验结果。【 注意事项 】唾液的稀释倍数因人而异，有时差别很大，稀释倍数可以是 50 300倍。【 思考题 】1、 若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸 1min，实验结果会发生什么样的变化？ 2、 酶作用的专一性有哪几种？量程的调节1.按照从大体积调为小体积的方法调节。2.用拇指和食指旋转取液器上的旋钮，使数字窗口出现所需容量体积的数字。注意：千万不要将旋钮旋出最大量程，否则会卡住内部机械装置或者弹簧弹出而损坏了移液枪。 微量移液器的使用方法枪头（吸液嘴）的装配在将枪头（ pipette tips）套上移液枪时，正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。移液的方法1.吸取液体时，用大拇指将按钮按下至第一停点，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下 2 3毫米。2.然后慢慢松开按钮回原点。3.接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。移液器的正确放置使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切