DB51T 658-2007 猪肉中己烯雌酚残留检测方法-高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法

案号： 四川省地方标准 658 2007 猪肉中己烯雌酚残留检测方法 高效液相色谱 of in of by 007布 2007施 四川省质量技术监督局 发布 658 2007 I 目 次 前 言 . 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 制样 . 1 品的制备 . 1 品的保存 . 1 4 测定方法 . 1 法提要或原理 . 1 剂和材料 . 1 器和设备 . 2 定步骤 . 2 果计算和表述 . 3 5 检 测方法灵敏度、准确度、精密度 . 4 敏度 . 4 确度 . 4 密度 . 4 附 录 A （资料性附录） 己烯雌酚特征离子质量色谱图、特征离子质谱图 . 5 658 2007 言 本标准按 2000 标准的结构和编写规则进行编制 本标准附录是资料性附录 本标准由 四川省畜牧食品局提出 并归口 本标准由 四川省质量技术监督局批准 本标准起草单位： 四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所 本标准主要起草人： 谢青、彭莉、岳秀英、 熊浩 山、官艳丽、王海波、吴晓岚 658 2007 1 猪肉中己烯雌酚残留检测方法 高效液相色谱 1 范围 本标准规定了猪肉中已烯雌酚残留检测的制样和高效液相色谱 定方法。 本标准适用于猪肉中己烯雌酚的残留量测定。检出限为 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不 注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 准化工作导则 第 1部分：标准的结构和编写规则 (, 1997, 6682分析实验室用水规则和试验方法 农牧发 20031号 兽药残留试验技术规范（试行） 3 制样 品的制备 取适量新鲜或冷冻的空白或 供试猪肉 组织，绞碎并 使之均匀，密封。 品的保存 下 冰箱中贮存备用。 4 测定方法 法提要或原理 猪肉中的己烯雌酚用叔丁基甲基醚提取，正己烷脱脂， 氮气吹干。 用高效液相色谱 外标法定 量。 剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合 6682规定的一级水。 烯雌酚（ 含 己 烯 雌酚 (得少于 99% 丁基甲基醚 色谱纯 腈 色谱纯 醇 色谱纯 己烷 水 烯雌酚标准贮备溶液 取己烯雌酚标准品约 10密称定，用甲醇溶解并稀释成浓度为1mg/标准贮备液，置 保存，保存期不超过 1 年 。 烯雌酚标准溶液 准确量取己烯雌酚标准贮备溶液适量，用乙腈稀释成浓度为 200ng/标准溶液， 置 4 冰箱中保存，保存期不超过 1 个月。 相萃取柱或相当者 5006用前分别用 3丁基甲基醚、 3预处理，保持柱体湿润。 658 2007 2 器和设备 相色谱 配电喷雾离子源） 平 感量 分析天平 感量 漩涡混合仪 荡器 织匀浆机 冻离心机 相萃取装置 转蒸发仪 吹 仪 孔滤膜 心管 20 50定步骤 料的制备 试料的制备包括： 取绞碎后的供试样品 ,作为供试试料。 取绞碎后的空白样品 ,作为空白试料。 取绞碎后空白样品 ,添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。 取 取 10000r/5 g，置 50叔丁基甲基醚 15旋 1荡 10在 以 6000r/0 上层清夜移至鸡心瓶中。再加叔丁基甲基醚 15并两次上清液， 于 45 水浴中减压旋转蒸发至干 。 化 加 80%乙腈溶液 2鸡心瓶中， 旋涡溶解残留物， 然后将其转移至 10心管中。加 正己烷5鸡心瓶中洗涤一并转移至鸡心瓶中，震荡混合 1 15以 6000 r/心 10弃 去 上清液。再加 正己烷 5离心管中同法操作，留下层备用。 取上述净化后的下层溶液， 以每 3 4秒 1滴的流速通过预处理后的 用甲醇：水（ 3+7）溶液 3后加水 3用甲醇 :2%氨水 (1+9)溶液 3去洗液，抽干。用甲醇 :叔丁基甲基醚 (1+9)溶液 7集洗脱液，氮气吹干，用 80%乙腈 1分涡旋，用 膜过滤，滤液供高效液相色谱 准曲线的制备 精密量 取 己烯雌酚标准溶液，用乙腈稀释制得浓度为 1ng/2ng/5ng/10ng/0ng/ 高效液相色谱 定。 定 相色谱条件 色谱仪： 效液相色谱仪 或相当者 色谱柱： 1505m) 或相当者 柱温： 30 流速： 样量： 20L 运行时间： 15动相： A：乙腈， B，水 658 2007 3 mL/ A(%) B(%) 40 60 1 4 95 5 6 8 95 5 6 15 40 60 1 谱条件 质谱仪： E 或相当者 电离模式： 描方式：负离子扫描 检测方式：多反应检测 电离电压： 温： 110 雾化温度： 350。 锥孔气流速： 50L/h； 雾化气流速： 450L/h； 数据采集窗口： 15留时间： 性、定量离子及对应的锥孔电压和碰撞电压见表 1。 表 1 己烯雌酚定性、定量离子对和锥孔电压及碰撞电压 药物 定性离子对 (m/z) 定量离子对 (m/z) 锥孔电压 (V) 碰撞电压 (己烯雌酚（ 51 22 28 30 22 35 定法 取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法以峰面积计算，即得。对照溶液及试样溶液 中 己烯雌酚的 响应值均应在仪器检测的线性范围之内。标准溶液的总离子流和选择离子流图分别见附录 白试验 除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。 果计算和表述 按下式计算试样中 己烯雌酚的残留量： 式中 : X 试样中己烯雌酚的残留量 (ng/g)； A 试样溶液中己烯雌酚的峰面积； 标准溶液中己烯雌酚的峰面积； 标准溶液中己烯雌酚的浓度 (ng/ V 溶解残余物的体积 ( m 供试试样的质量 (g)。 = As m 658 2007 4 注：计算结果需扣除空白值， 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留 3位有效数字。 5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 敏度 本方法在猪肉中的检测限为