血管紧张素ⅰ.sop

【原理】血浆肾素活性的测定，实际上是测定血浆中血管紧张素的产生速率。即同一样品（血浆）取双份，一份让其直接与抗体反应，测其 A的浓度，称为对照管；另一份则在 37温浴一段时间后，再让其与抗体反应，测其 A浓度称作测定管。测定管的 A浓度减去对照管的 A被温浴时间除之，则为单位时间内 A的产生速率，称之为肾素活性。【试剂】生产商：北京北方生物技术研究所。【仪器】1，-计数器 2，低温离心机3，37水浴箱【样本要求】1， 酶抑制剂抗凝管的准备：按取血 5ml 计，每支取血管中加50ul 0.30EDTA （如有晶体析出，可温热溶解后使用）25ul 0.32M 二巯基丙醇50ul 0.34M 8-羟基喹啉硫酸盐注：（1）酶抑制剂抗凝管最好使用带塞或盖的管子，配好后 28密封贮存可用一周，若用敞口管则最好现用现配。（2）取血量增加或减少时，请按比例增减各试剂。例如：取血 2ml 时，三种试剂加入量份分别为 20、10、20ul 。2，采血组份 100 管 50 管 制品状态1) A标准品(S 0S 6) 6 瓶 6 瓶 冻干品2） 125I- A（红色） 2 瓶 1 瓶 冻干品3）兔抗- A抗体（兰色）1 瓶 1 瓶 冻干品或液体4）驴抗兔免疫分离剂 1 瓶/50ML 1 瓶/25ML 液 体5）A、A缓冲液 1 瓶/40ML 1 瓶/40ML 液 体 6）EDTA 抗凝剂 1 瓶/3ML 1 瓶/3ML 液 体7）二巯基丙醇 1 瓶/1.5ML 1 瓶/1.5ML 液 体8）8-羟基喹啉硫酸盐 1 瓶/3ML 1 瓶/3ML 液 体9）A、A质控 2 瓶 2 瓶 冻干品10）A调节剂 1 瓶/1.5ML 1 瓶/1.5ML 液 体注：7） 、8） 、9）三种试剂与 A药盒共用。兔抗- A抗体为液体时请直接使用（10ml/100 管,5ml/50 管） 。实验室 主 题 文件编号 第 0 页 共 0 页第 0 版 第 0 次修改广州军区广州总医院检验科放免实验室（A）血管 紧张素 操作程序 撰写日期：2009 年 03 月 30日起草人 操作人 批 准 人 生效日期（1） 肘静脉取血 5ml，拔出针头后注入到酶抑制剂抗凝管中（采血管应有盖或塞） ，将管口封好后上下颠倒数次，混匀后即刻放入冰水浴中或4冰箱中 12 小时，取出后 2500 转/分，离心 7 分钟（最好在 4离心） ，分离血浆。将血浆密封后放入冰箱保存（-15以下） ，可用 2个月。（2） -阻断剂、血管扩张剂、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平、一般要在停药后三周测定。不适停药的病人改服胍乙啶等影响PRA 较小的降压药。（3） 钠摄入量影响 PRA 水平，故病人测定 PRA 三天前应适当减少食盐摄入量。病人应测定取血前 24 小时尿钠含量，以供分析 PRA 结果时参考。（4） 激发试验：病人清晨不起床或空腹平卧两小时，可在 6:008:00 之间抽取基础态血标本，然后肌肉注射速尿 0.7mg/kg 体重，总剂量不大于50mg，保持立位两小时（可以走动） ，即坐取激发态血标本。注：注射速尿后两小时内随尿排出的水和电解质的量较多，如病人血钾过低，试血前应适当给予补充。试验过程中病人可能出现口渴、无力、出汗等，一般不重。如过重，应酌情终止试验，让病人平卧，并给予糖盐茶水。 【操作】1: 用聚苯乙烯试管编写反应试管：T、NSB 管、标准管（ S0S 6） ，质控管（C1、 C2）和病人样品试管 1N 管（病人样品试管分为 “对照管”和“测量管” ） 。2: 先将调节剂加入所要测量的各试验管 10ul，再将病人血清 100ul 分别加入“对照管”和“测量管” 。3：将样品“测量管”放入 37水浴箱中 1 小时（准确记录时间） ，样品“对照管”置于 4冰箱中或者冰水浴中 1 小时。4：A、A缓冲液 200ul 加入 NSB 管；A标准品(S 0S 5)依次加入已编写好的各试验管 100ul；再将质控试剂加入编写好的质控管 100ul。5：将 125I- A（红色）试剂依次加入各管 100ul，兔抗 - A抗体（兰色）加入除T 管、NSB 管外的各反应试管 100ul。摇匀后放置 28冰箱过夜（1624 小时） 。6: 分离剂充分摇匀后加入各代测试管 500ul（T 管除外）室温放置 30 分钟， 3500RPM 低温离心 15 分钟，吸弃上请液，测各沉淀管的放射性计数（ cpm） 。7:计数。在电脑桌面打开“r i a”文件，进入 RIA6.0 软件的主菜单，选择主菜单“在线处理”在“选择测量项目”栏中双击“A.ddd”文件，屏幕跳转到“在线处理窗口”鼠标点击左下“开始测量”即可。一切准备就绪后，将准备好的待测样品管放在已打开的-计数器的通道上进行计数。 6：读取数据。在主菜单中选择“数据处理” ，鼠标选择“数据处理”左侧菜单中“A.ddd”项目，右侧菜单中选定将要读取的日期。点击“确定” 。在“标准曲线拟合处理”页面中选择“确认曲线” ，系统会跳出“是否要读取文件中未知样品”选择“是” 。待读取完毕后退出系统即可。7：接收数据。打开“上海科华实验室信息管理系统”点击屏幕右上方“启动接口程序”在窗口中将所需要接收的项目日期和名称打勾，选择将要接入的日期和接收顺序号。然后点击“入库”即可。【基本参数】1、 标准范围：0.212ng/ml2、 灵敏度： 0.1ng /ml3、 批内变异系数（CV）： 10%；批间变异系数（CV）：15% 【注意事项】1 收到药盒后，尽快存放在 2-8。2、 125I- A.及标准品应避光保存。3、不同药盒或不同月份的同种药盒的组分不得混用。4、吸弃上清液时，注意不得损失沉淀物，否则将明显影响测定结果。5、加入放射性标记物时，应做好防护、小心谨慎，以避免造成放射性污染。【临床意义】肾素是由肾脏近球体分泌分子量 40000 的蛋白水解酶。它作用于血管紧张素原产生血管紧张素（A、10 肽，分子量 1200） ，A在酶转换的作用下形成血管紧张素（A、8 肽、分子量 1046） 。肾素血管紧张素系统在机体的血压、水和电介质平衡的调节上起着重要的作用。因此， “血管紧张素活性” （简称 PRA）和 A浓度的测定已成为原发性和继发性高血压诊断与研究的重要指标。血管肾素活性（PRA）的测定是以血管紧张素（A）产生的速率来表示的。A是直接测定血浆中 A的含量。二者均采用加酶抑制剂来阻断转换酶和血管紧张素酶的活性，达到准确测定 PRA 和 A的目的。【参考值】1、 A正常参考值：饮食 状态 XSDpg/ml卧位 0.050.79 普食