冰冻切片技术原理

冷冻切片制作技术 一、冷冻切片的意义 二、恒温冷冻切片机的结构与功能 三、冷冻切片组织的取材 四、冷冻切片的制作方法 五、冷冻切片的固定和染色 六、冷冻切片的标准及染色的注意事项 七、冷冻切片机的使用注意事项及日常维护一、冷冻切片的意义 1.快速诊断 ：冷冻切片可称之为病理科的 急诊工作 ，常用于临床手术科室快速组织学诊断，特别是在 手术进行当中 取出病变组织，要求病理医师在很短的时间内做出良、恶性的正确的诊断，为临床医师下一步的手术方案及治疗提供指导。 2.显示组织中脂质 脂肪染色和神经组织髓鞘的染色等 3.显示酶活性 主要应用于肌肉活检的检查 4.免疫荧光的研究二、恒温冷冻切片机的结构与功能 1.结构：恒温冷冻切片机主要由冷箱体及切片机构成，具有快速双重制冷、自动除霜、自动消毒、负压等功能。 2.功能：利用物理降温的方法将新鲜组织标本冷冻使其产生一定的硬度进行切片，与石蜡切片相比，冷冻切片不需要脱水处理，因此制片速度快，是为术中提供快速病理诊断的良好方法。 LEICA CM1850三、冷冻切片组织的取材 1.标本必须新鲜无固定，无液体浸泡； 2.组织块大小厚薄适宜； 3.组织块未受挤压； 4.尽量保持组织的原有形态； 5.选择好组织切面； 6.保持组织的清洁； 7.切除不需要的部分，遇有脂肪组织要剔除； 8.组织内有异物一定要清除。四、冷冻切片的制作方法 冷冻切片的重要环节是温度。 1.冷冻前将恒温冷冻切片机的速冻头温度和箱内温度调整到适宜的切片温度，一般情况下为 -25-18 。 2.在标本托上涂一层冷冻包埋剂 OCT，然后将取材后的新鲜标本安放在标本冷冻托上 并用 OCT包埋剂覆盖标本。 3.组织较小或较薄，可先将 OCT滴加在标本托上，冻成一个小冷台，将组织放在小冷台上，再覆盖 OCT冷冻，并用冷冻锤轻轻压平。 4.标本冷冻完成后将标本托固定在切片机的机头上，调整机头的位置使其恰好位于切片刀的后方。四、冷冻切片的制作方法 5.以粗切削的方式进行标本的粗切削至暴露标本的最大平面，用 毛笔清除机头、标本托及刀片上的组织碎屑。 6.确认切片的厚度，一般 610um不等，根据组织的不同可适当调整切片的厚薄。 7.放下放卷板使其位置恰好与刀片的刀刃完全平行并略突出刀刃。 8.以转动大轮推进的方式进行切片，良好的切片将在放卷板下方形成一张完整平坦无褶的薄片，若切片略有弯曲可用小毛笔轻轻展平。 9.打开放卷板，用载玻片平稳的轻压组织，使其平整的吸附到载玻片上。四、冷冻切片的制作方法 10.也可不使用放卷板，用毛笔轻带组织下方的白边（ OCT），随机器的慢慢转动，用毛笔轻轻从上至下展开组织，使其平坦， 组织齐全满意时，用毛笔轻轻压住切片的下方，右手拿载玻片轻轻平稳地压组织，使其平整地吸附在载玻片上， 迅速放入固定液， 进入染色程序。 11.正确地调整使用冷冻切片机的放卷板是获得平展完整冷冻切片的重要手段，放卷板的正确位置是，与切片刀的刀刃平行并略微突出于刀刃。五、冷冻切片的固定和染色 一、冷冻切片的固定、固定液的选择 1.丙酮液 2.10%中性福尔马林缓冲液 3.95%酒精 4.乙醚、纯酒精等量混合固定液 5.AF液 6.AFA液 可根据工作要求选择适合于本单位的固定液五、冷冻切片的固定和染色 二、冷冻切片染色 1.冷冻切片应立即放入固定液中。 2.固定 1min左右，水洗。 3.入苏木精染色 2min，水洗。 4.1%盐酸酒精分化数秒，水洗。（ 0.5%氢氧化铵水溶液返蓝数秒，水洗） 5.伊红染液 20s-1min，水洗。 6.70%乙醇、 80%乙醇、 95%乙醇逐级脱水。 7.无水乙醇脱水 2次。 8.二甲苯透明两次。 9.中性树胶封固。六、冷冻切片的标准及染色的注意事项 一、冷冻切片的标准 1.操作正确 2.切片完整 3.厚薄均匀 4.无褶无刀痕 5.组织内无冰晶 6.核质分明，染色适度 7.组织结构清晰 8.脱水透明洁净 9.封裱美观 10.时间迅速六、冷冻切片的标准及染色的注意事项 二、冷冻切片染色的注意事项 1.提倡使用新鲜苏木精染液，每天过滤，防止沉渣及结晶的形成，保证高质量的冷冻切片以利诊断。 2.室温过低时，影响着色，可适当加温促进染色。 3.盐酸酒精分化应适度， 显微镜下控制， 否则易造成核着色不佳，染色质不清晰，影响诊断。七、冷冻切片机的使用注意事项及日常维护 1.切片前，厚度应预先调制好，刀具提前安放好。 2.刀的角度调好位置，并多备几个冷冻托，以供速冻组织块使用。 3.切片时，观察窗不可打开过大，以防温度升高影响切