gcbi测序系列5-生物样本的收集方法及建库流程

生物 样 本的收集保存方法及 测 序建 库 的基本流程刘 艳 奎GCBI生物技 术 中心上海其明信息技 术 有限公司GCBI 生物 样 本的收集保存方法Page 2GCBI 生物 样 本 类 型细 胞组织血液Page 3其他GCBI 细 胞收集保存方法Page 4提取 RNA:贴 壁 细 胞： 细 胞培养好后，去除培养液，用 PBS快速的洗 一遍 ,将PBS弃干 净 ,直接加入 TRIZOL，并吹打裂解 细 胞，待 细 胞裂解完全后 ,即可收集 样 本， -80储 存。（不必胰 酶 消化）悬 浮 细 胞： 细 胞培养好后 ,3000RPM离心 5MIN,去除培养液 , 用 PBS快速的洗一遍 ,将 PBS弃干 净 ,直接加入 TRIZOL，并吹打裂解 细 胞，待 细胞裂解完全后 , -80储 存。TRIZOL用量： 106 的 细 胞需要 1ML TRIZOL。提取 DNA： 收集 细 胞后，离心去除培养液， PBS快速洗 2次，弃掉PBS，保存于 -80C冰箱。GCBI 组织样 本的收集方法Page 5提取 RNA: 样 本离体后 ,用生理 盐 水迅速洗一遍 ,装管后迅速投入液氮速 冻 30分 钟 ,转 移至 -80度保存。RNALATER作用：如 样 本无法立即液氮， 分离 组织 （薄膜状的 组织 等）注：植物 样 本 处 理方法均可参照 组织样 本。组织样 本的用量：以脂肪 组织为 例，一般黄豆大小的 样 本即可提出 5-10UG的 TOTAL RNA。提取 DNA:样 本离体后 ,用生理 盐 水迅速洗一遍 ,装管后 迅速投入液氮速 冻 30分 钟 ,转 移至 -80度保存。GCBI 注意事 项 ：1、要用 冻 存管保存 组织样 本（不可用 EP管），并且管盖不宜 拧 的 过紧，以防止从液氮取出 时 管子炸裂， 样 本 损 失。2、用油性 记 号笔直接在 样 本管上 标记样 本名称，如果用 标签纸 或胶 带粘 贴 ，在 长 期的低温状 态 下很容易脱落，照成 样 本信息 丢 失。GCBI 血液 样 本的收集保存方法Page 6提取 DNA: 血液抗凝收集后， -80度保存提取 RNA:1、采用 PAXgene blood RNA tube 收集 ,注意收集血液后混合均匀需室温至少放置 2小 时 ， 详细 操作参照 PAXgene说 明 书 。2、全血加 TRIZOL LS裂解液保存， 详细 操作参照 TRIZOL LS说 明 书 。如需血液中的特定 细 胞：需新 鲜 血液抗凝分离 细 胞，按照 细 胞 样 本 处 理保存。注：抗凝 剂 不可以使用肝素GCBI 其他 样 本 类 型收集保存方法石蜡 样 本：石蜡 块 或石蜡切片常温保存血清、血 浆 、尿液等液体 样 本提取 DNA:样 本收集后， -80保存。提取 RNA:样 本收集后，加入 3倍体 积 的 TRIZOL，迅速 摇 匀后， -80保存。外泌体：提取 DNA:样 本收集后， -80保存。提取 RNA:样 本收集后，加入 TRIZOL，放置 5分 钟 后， -80保存。Page 7GCBI 测 序建 库 的基本流程Page 2GCBI 生物 样 本 类 型DNA建 库RNA建 库Page 3GCBI DNA建 库Page 5GCBI RNA建 库Page 5GCBI 预 告第 六 讲 全基因 组测 序