【精品】药物的鉴别试验42

药物的鉴别试验Identification test of drug第二章p 药物的鉴别试验p 药物的杂质检查p 药物定量分析与分析方法验证药品检验工作的基本规律Basic regularity of drug inspection一、药物鉴别的目的和特点1鉴别目的 药物鉴别依据药物的化学结构和理化性质进行某些化学反应，测定某些理化常数或光谱特征，来判断药物及其制剂的真伪。 只有在药物鉴别无误的情况下，药物被证实是真的， 才有必要接着进行杂质检查、有效化学成份含量测定。 在药物分析中药物鉴别属首项工作， 为确保临床用药的安全与有效提供科学依据。第一节 常用鉴别方法（ 1）药物鉴别是根据药物的分子结构、理化性质，采用生物学、化学或物理化学方法来判断药物的真伪。药典所收载的药物项下的鉴别试验方法， 仅适用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证实是否为其所标示的药物， 它与分析化学中的定性鉴别有所区别 。2特 点（ 2）药物鉴别不只由一项试验就能完成，而是采用 一组试验项目 （ 2个或 2个以上） 全面评价一个药物 ，力求使结论正确无误。（ 3）药物鉴别通常选用 综合分析试验法 ，用化学鉴别法、仪器分析法、生物检定法等不同方法鉴别同一种供试品，综合做出判断。一般每种药品选用 2 4种方法进行鉴别试验，相互取长补短。药物鉴别采用的方法应是 专属性强，重现性好，灵敏度高，并且简单可行、快速 。常用的方法有化学法、紫外吸收光谱法、薄层色谱法、红外吸收光谱法等多种方法，下面主要介绍几种常用的鉴别方法。二、常用鉴别方法鉴鉴别别方方法法化学鉴别法化学鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法生物学法 HPLC、 GC鉴别法 薄层色谱鉴别法 纸色谱鉴别法 呈色反应鉴别法 紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法 沉淀生成反应鉴别法 色谱鉴别法 气体生成反应鉴别法 测定生成物的熔点荧光反应鉴别法 1、特点： 化学鉴别法 操作简便、快速、实验成本低，是药物鉴别时最常用的方法。2、鉴别依据： 根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反应或官能团反应产生 不同颜色，生成不同沉淀，放出不同气体，呈现不同荧光， 从而做出定性分析结论。（一）化学鉴别法（ 1）干法 干法系指将供试品加适当试剂在规定的温度条件下（一般是高温）进行试验，观测此时所发生的特异现象。常用的方法有 焰色试验和加热分解试验。3、类型： 根据试验条件的不同化学鉴别法可分为 干法和湿法 两种类型。l 焰色试验： 利用 某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。 方法为： 取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。 例如： 钠为鲜黄色，钾为紫色。在临床使用的青霉素类及头孢菌素类药物大多为其钠盐或钾盐，鉴别时利用钠、钾盐的焰色反应。l 加热分解： 在适当的温度条件下， 加热 使供试品分解，生成有 特殊气味 的气体。例如： 舒林酸的加热分解（取本品约 15mg,置试管中 ,小火加热数分钟），产生刺激性的 二氧化硫气体 ,并能使湿润的碘 -淀粉试纸蓝色消褪。（ 2）湿法湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进行反应，发生易于观测的 化学变化 ，如颜色、沉淀、气体、荧光等。l 呈色反应鉴别法：系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的 有色产物。常用的反应类型有： 三氯化铁呈色反应 酚羟基或水解后产生酚羟； 异羟肟酸铁反应 多为芳酸及其酯类、酰胺类； 茚三酮呈色反应 氨基酸及氨基糖苷类； 重氮 -偶合显色反应 芳伯氨基或能产生芳伯氨基； 氧化还原显色反应 及其他颜色反应。l 沉淀生成反应鉴别法常用的反应有： 与 重金属离子 的沉淀反应在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀； 与 硫氰化铬铵 （雷氏盐）的沉淀反应多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐； 其他沉淀反应 。l 荧光反应鉴别法：常用的荧光发射形式有 药物本身 可在可见光下发射荧光； 药物 溶液加硫酸 使呈酸性后，可见光下发射荧光； 药物和 溴反应 后，于可见光下发射出荧光； 药物和 间苯二酚反应 后，发射出荧光及药物经其他反应后，发射荧光。 l气体生成反应鉴别法 大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生 氨（胺）气； 化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生 硫化氢气体（硫喷妥） ； 含碘有机药物经直火加热，可生成 紫色碘蒸气 ； 含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生 乙酸乙酯的香味 。1紫外 -可见分光光度法 紫外 -可见分光光度法（ UV-Vis） 是药典中常用的一种药品鉴别方法 ， 鉴别时一般采用 对比法 ，即按规定的方法配制供试品溶液与对照品溶液，通过对比吸收光谱的特征数据、吸收度或吸收系数、吸收光谱的一致性等进行鉴别。（二）仪器鉴别法（ 1）测定最大吸收波长及不同波长的吸收度比值。例如：丙酸倍氯米松，取本品精密称定，加乙醇溶解并定量稀释成浓度为 20g/ml的溶液，依法测定，在 239nm处有最大吸收，吸收度为 0.57 0.60；在 239nm与 263nm波长处的吸收度比值应为 2.25 2.45。紫外 -可见分光光度法应用时，主要有以下几种方式：（ 2）测定吸收系数。药品在一定波长下的吸收系数，可用于药品的鉴别。例如： 甲砜霉素，取本品精密称定，加水溶解并定量稀释成浓度为 200g/ml的溶液，依法测定，在266nm和 276nm处有最大吸收，吸收系数分别为 2528和 21.5 23.5；取上述供试品溶液 1ml，加水稀释成 20ml后，在 224nm处有最大吸收，吸收系数为 370 400。（ 3）对比吸收度或吸收系数的比值。取不同吸收峰或吸收谷处的吸收度的比值作为鉴别的依据。 由于溶液浓度和吸收池厚度均相同，因此用此法可消除浓度和厚度的影响。例如 :维生素 B12的鉴别，中国药典（ 2010年版）规定 361nm处的吸收度与 278nm处的吸收度比值应为 1.70 1.88， 361nm处的吸收度与 550nm处的吸收度比值应为 3.15 3.45。（ 4）对比吸收光谱的一致性。用上述几种方法鉴别时，无法发现吸收曲线其他部分的差异。必要时可将浓度相同的试样与标准品在同一条件下分别扫描其吸收光谱，对比其一致性；也可利用文献中的标准图谱对照。图 4-1 连翘甙的紫外吸收图谱l 特点： 红外吸收光谱法（ IR）是一种 专属性很强、应用广泛（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。l 作用： 主要用于组成单一、结构明确的原料药鉴别， 特别是 结构复杂、用化学方法不易鉴别的药物 。2红外吸收光谱法 l 鉴别方法： 采用 标准图谱对比法， 即在药典规定的条件下测定供试品的图谱，然后与药品红外光谱集对照。对照时一般先看 最强峰 的吸收位置、形状、数目等是否一致，然后再检查 中等强度缝和弱吸收峰是否对应，如果供试品的红外光吸收图谱与对照品的图谱完全一致，一般可认为是同一种化合物。为了确保鉴别结果准确无误，药典 一般不单独用本法进行鉴别，常与其他理化方法联合进行鉴别。如： 中国药典（ 2010年版）二部苯酚鉴别项下规定：取本品 0.1g，加水 10ml溶解后，照下述方法试验。（ 1）取溶液 5ml，加 三氯化铁试液 1滴，即显蓝紫色。（ 2）取溶液 5ml， 加溴试液，即生成瞬即溶解的白色沉淀， 但溴试液过量时，即生成持久的沉淀。（ 3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集 240图）一致。图 4-2 苯酚的红外光吸收谱图薄层色谱法（ TLC） 是将细粉状的吸附剂或载体涂布于一块具有光洁表面的玻璃板、塑料片或铝基片上，形成以均匀薄层（厚度 0.25 1mm） ,待点样、展开后，各组