生物标志物样本保存-bd采血管

2016 BD. BD, the BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. BD 基因组学分析前处理系列解决方案1 2016 BD. BD, the BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2BD: 引领世界健康 成立于 1897年，至今已有 119年历史 经营产品超过 1万种， 2015年营业额为 103易美元 在 50个国家拥有分支机构，员工总数为 45000人 BD在保护患者和医护人员安全，强化医学研究和临床实验室建设领域居于世界领先行列BD MedicalBD Life Science 2016 BD. BD, the BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 3BD Life Science 从细胞生物学到基因组 学 F. S. Dickinson M. W. Becton美 国 BD公司是由 M. W. Becton和 F. S. Dickinson于 1897年在纽约创立的， 总部设在新泽西州 v 1966年 BD首次被美国 财富 杂志评选为美国 500强企业。v 多次被 财富 杂志评为美国最受推崇公司。v BD 2014年度的全球销售额超过 84.46亿美元，是医疗行业最具增长潜力公司之一。 2016 BD. BD, the BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. BD Life Science 从细胞生物学到基因组学Genomics PlatformFACSPrecise AssayCliC 2016 BD. BD, the BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 5血液中的有效生物分子如何保存？运输？保持生物活性？ 2016 BD. BD, the BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. Part 2 分子 诊断第一步：生物标志物 保存6蛋白质组学类产品BD P800: 特异 稳定胰高血糖素样肽（ GLP-1），肠抑胃肽（ GIP），胰高血糖素（ Glucagon），胃促生长素（ Ghrelin）BD P100: 广谱 蛋白质 保存分子 诊断类产品PAXgene 全血 RNA管 : 全 血 RNAVacutainer CPT ： 单个 核淋巴细胞分离管PPT 血浆准备管 ： 血浆 中病原体核酸（ RNA， DNA） - HIV,HBV,HCV全血中的 RNA血液中 mRNA在体外的变化在体外， RNA会发生哪些变化？事件 : 采血后的几分钟内， RNA转录水平急剧降低。处理过程中的变异因素会导致试验结果不稳定。解决方式 : PAXgene 全血 RNA 系统最小化前处理变异因素且建立了新的RNA处理标准流程。9EDTA 抗凝管中 RNA降解严重0.02.04.06.00 2 4 6 8Days StorageTotal RNA g / ml bloodDonor ADonor BDonor CDonor DEDTA 全血 : 室温保存此外，体外处理过程会诱导某些基因发生非特异性转录Donor A0.0E+004.0E+058.0E+051.2E+060 2 4 6 8days storagecopies IFN per ug RNAwhole blood-70oC bloodDonor B0.0E+004.0E+058.0E+051.2E+060 2 4 6 8days storagecopies IFN per ug RNAwhole blood-70oC bloodDonor D0.0E+004.0E+058.0E+051.2E+060 2 4 6 8days storagecopies IFN per ug RNAwhole blood - 70oC bloodDonor C0.0E+004.0E+058.0E+050 2 4 6 8days storagecopies IFN per ug RNAwhole blood - 70oCblood如何在全血中保存 RNA.核酸提取与纯化领域的领导者.样本采集领域的领导者PreAnalytiX GmbH: BD/QIAGEN 整合的分子诊断前处理解决方案收集，标准化，纯化全血中的 RNA*PAXgene Blood miRNA enrichment purification kit available as RUOPAXgene Bone Marow RNA System available as RUOt04 hr8 hr24 hr3 days5 daysPAXgene Blood RNA SystemEDTA Whole BloodRainen et al. Clin.Chem. 2002, 48(11):1883-90PAXgene 全血 RNA管稳定全血中的基因转录谱Relative Gene Expression of 25 Genes in EDTA Whole Blood Stored at Room Temperature for Five DaysOne blood collection tube, many RNA purification optionsLOW THROUGHPUT MEDIUM THROUGHPUTHIGH THROUGHPUT一支采血管，多种 RNA 纯化方案血液样本的运输和长期保存无论是否 经历了几天的长途运输，或者冷冻 至 8年 之久 ，血液 样本 RNA的检测结果依然不受影响PAXgene全血RNA管运输或者储存血液样本18-25C 3天2-8C 5天-20至 -70C 冻存条件下 存储 8年手工或者自动纯化RNA高质量的RNA全血中的蛋白质 50 种分析前变异因素 病人信息 静脉穿刺 放血 采集装置 采血管 / 玻璃或塑料材质 分离胶或非分离胶 抑制剂或者其他添加剂 储存 冻存时间 /温度 , RT 放置时间 冻存溶解循环 血液衍生物和处理 血浆 抗凝剂 (EDTA, 枸橼酸，肝素 ) 血清 凝血机制 ? 凝血激活 ? 处理的细节 : 时间 , 温度等 . 血液与细胞分离 ? 离心速度 /时间 分装 & 处理参数Alex J. Rai, et. al., “HUPO Plasma Proteome Project Specimen Collection and Handling: Towards the Standardization of Parameters for Plasma Proteome Samples”, PROTEOMICS 2005, 5血浆样本的优势l 容易获取l 制备时间比血清短 (只需血清制备时间的 1/2)内部变异因素比血清少 *l 广谱多样的蛋白质 /肽： 广谱蛋白分离范围，从 100,000 kD 从肽类激素（极短的半衰期）至 血清白蛋白 (T1/2 21d) 包含了每一个细胞里面特异 的因子 含有高比例的糖蛋白*Ref: Pearson B., Schram J., “Array analyses of human whole blood changes in serum and plasma fractions”, Publication Pending (2005) BD P100 血浆蛋白保存管提取并保存人类血浆 蛋白 蛋白质组学 临床生物标志物分析研究P100 Performance - SELDI Analysis1380 (M/z)SELDI Gel Plots Normalized Peak Intensity:Ref: Jizu Yi, et. al., “Observation of intrinsic protease-mediated protein degradation in collected plasma samples”, US HUPO Conference (2004)BDTM P800 代谢肽段生物标志物胰高血糖素样肽（ GLP-1）肠抑胃肽（ GIP）胰高血糖素（ Glucagon）胃促生长素（ Ghrelin）* For Research Use Only Not for Use in Diagnostic ProceduresP800TM中 GLP-1可以保持长时稳定BD Vacutainer CPT 单个核细胞准备管传统的外周血单个核淋巴细胞分离技术 ：FICOLLHypaque法常规外周血采集血液抗凝处理将血液用缓冲液稀释后小心地分层堆积到介质上对此制备液进行离心处理，以将单个核细胞分离到介质之上从液体界面小心地吸取采集这些细胞。分离胶屏障血浆淋巴细胞和单核细胞密度梯度分离液 (ficoll)红细胞和中性粒细胞 BD Vacutainer CPT 结构 及原理 2016 BD. BD, the BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 28 2016 BD. BD, the BD Logo and