HPV基因诊HPV基因诊断临床推广PPT课件

子宫颈癌与人乳头瘤病毒子宫颈癌与人乳头瘤病毒1一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展二、 HPV的生物学研究三、宫颈癌的早期筛查四、 HPV检测后处理五、宫颈病变的治疗2一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展3宫颈癌最常见的妇科恶性肿瘤w 据世界范围内统计，每年大约有 50万左右的宫颈癌新发病例，占所有癌症新发病例的 5%，其中 80%的病例发生在发展中国家。我国每年宫颈癌新发病例约 13.15万，占世界宫颈癌新发病例总数的28.8% ， 发病率 仅次于乳腺癌位居第二 。w 随着筛查制度的建立，世界宫颈癌的发病率和死亡率已经大幅下降。我国由 70年代的 10.28/10万下降到 90年代的 3.25/10万，但在高发病区，死亡率仍高居不下。地区 死亡率 (/10万）世界 8.00中国 3.25北京 2.54上海 3.8山西阳城 36.004患病年龄更趋于年轻化（发病年龄提前到 45岁），发病史缩短。如吉林省在 80年代统计宫颈癌患者中小于 35岁的妇女占 4.8，而 2000年已经占到 34.1 患病年龄更趋于年轻化5v 行为危险因素：如性生活过早、多孕多产、 多个性伴侣、 社会经济地位低下和营养不良等；v 生物学因素：如细菌、病毒和衣原体等各种微生物的感染。v 目前仅有少量研究表明宫颈癌可能存在着家族聚集现象。子宫颈癌的危险因素6二、 HPV的生物学研究7*早在十九世纪四十年代，一位意大利医生 Regoni Stern最早提出结婚与否与宫颈癌的发生可能有关；*60 70年代，人们的主要研究对象是 HSV,HCMV等病原体；*1974年 zur Hausen首次提出 HPV感染与宫颈肿瘤有密切关系；*1977年 Laverty在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在人乳头状瘤病毒（ Human papillomavirus， HPV）颗粒；*1995年 IARC专题讨论会： 高危型 HPV持续 感染是宫颈癌的主要病因 。- 99.7的宫颈癌患者都能发现高危型 HPV感染 。宫颈癌的生物学病因研究进展 8型别： 已发现 100多种不同的亚型（如果 DNA序列同源性小于 90，则定为新的亚型）。其中超过 35种可以感染人类的生殖器官，约 30种与肿瘤有关。1） 低危型 ：宫颈上皮内低度病变，引起外生殖器湿疣等良性性病（ HPV 6、 11、 42） ；2） 高危型 ： 宫颈上皮内高度病变，与宫颈癌的发生有关 （ HPV 16、 18、 31、 33、 35、 39 、 45、 51、 52、 53、 56、 58、 59、 66及 68）；3） 中间型： 不确定型 。分布 ： 有些亚型和地区、宫颈癌的病理类型有关。HPV45在非洲西部很常见， HPV39和 59在美洲中部和南部常见， HPV52， 58在中国常见。在宫颈鳞状上皮细胞癌中以 HPV16（占 51），在腺癌和腺鳞癌中 HPV18分别占 56和 39。型别与分布9表 HPV型别与宫颈病变常见 HPV型别 宫颈病变6， 11 湿疣， CIN I16 CIN,18 CIN30， 40， 58， 69 CIN31， 33， 35， 39 CIN45， 51， 52， 56 CIN I42， 43， 44 CIN I53 正常宫颈上皮54 尖锐湿疣55 鲍温样丘疹病59 VIN61， 62， 64， 67 VaIN66 鳞癌70 外阴乳头状瘤10HPV在欧洲的常见分型和感染率w 最常见的低危型（HPV6、 11）w 最常见的高危型（HPV16、 18、 31、33、 45、 58 ）HPV16HPV18HPV45HPV31HPV33 Other宫颈癌患者中高危型 HPV感染率 (欧州 2000年资料 )11深圳不同 HPV亚型的检出频率统计 （ WHO 项目） 注： 1.本表统计样本数为 1153例，其中阳性样本数为 119例；由于检测样本中存在复合感染，故亚型的检出频率（该亚型的检出次数 / 所有亚型的检出次数） 100，所有亚型检出次数为 226。2. 本表统计数据由 WHO深圳项目 提供， HPV分型基因检测试剂由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。12人乳头瘤病毒（ Human Papillomaviruses, HPV）w 双链 DNA无包膜病毒环状 DNA，约 8Kb；病毒颗粒直径为 50 55nm；依靠宿主细胞进行复制、转录和翻译。HPV病毒电镜图13HPV基因结构 w 按功能可分为早期区 (E区 )、晚期区(L区 )和非编码区 （ LCR）三个区域。E区分为 E1 E7开放阅读框架，主要编码与病毒复制、转录、调控和细胞转化有关的蛋白（ HPV无 E3）。L区分 L1和 L2，分别编码主要衣壳蛋白和次要衣壳蛋白。LCR是 E区与 L区间 -6.4 1.0Kb的 DNA片段，可负责转录和复制的调控14HPV的致癌机理w HPV以 游离态 感染上皮细胞后，可以持续存在于染色体外，不引起任何病变，或引起良性病变和低度病变，如尖锐湿疣或轻度不典型增生等。而 癌变则与病毒 DNA整合入宿主染色体密切相关 。w 高危型 HPV DNA链通常在 E1或 E2的开放读码框内断裂，使 HPV DNA整合入染色体脆弱区。 E6和 E7具有促进和维持整合状态的功能。w HPV E6蛋白间接抑制 p53活性 ，阻碍细胞对 DNA损伤的反应。（负向调节细胞的生长和分化）w HPV E7蛋白与 pRb结合后使其功能失活 ，改变细胞周期的正常调控。15HPV感染途径及危险因素感染途径：主要为性传播和直接皮肤接触特别案例：母亲分娩过程中传播至婴儿的口腔危险因素：1、年龄因素： 30岁以后 HPV感染率下降，但危险性提高。2、性行为的影响：初次性交年龄越小，性伴侣数量越多，感染率越高；3、避孕方法：尚无一致意见；4、免疫抑制状态使 HPV感染的危险性增加：如 HIV感染后、肾移植等。16HPV基因分型快速诊断原理应用膜杂交技术建立的敏感、特异、简便的检测方法，可同时对 23种 HPV亚型 (18种高危型及 5种低危型 )进行检测。17HPV基因分型快速诊断试剂 操作流程采集样本提取 DNAPCR扩增杂交 显色18结果判断检测结果： HPV16、 HPV43检测结果： HPV33、 HPV3519HPV与 TCT的差异HPV TCT两种检测的差异 病原学检测 细胞学检测两种检测对宫颈癌筛查的提示 全程提示 即时提示临床意义提示有患癌的可能，确定已经发生细胞形态改变者的病因判断是否进入亚临床期或临床期准确率 阴性预测值 99% 70%以上20（ 一）宫颈病变的筛查1、 HPV检测的最大优势之一在于发现高危型 HPV阳性而细胞学涂片正常的妇女，因为这一人群中 10会在四年内发展成 CIN 。2、筛查并浓缩高风险人群，便于进行有效监控，早期发现宫颈癌。3、 HPV检测的阴性预测值为 99，可将筛查间隔延长至 3年一次，大大地降低了检查成本。敏感性： 88 100特异性： 98阴性预测值：几乎 100HPV检测的临床意义21（二） ASCUS和低度病变的分流1、 HPV检测通过排除可疑的或低度病变，从而提高诊断的可信度，降低漏诊的风险。2、 把具有潜在宫颈癌风险的妇女从低风险的妇女中区分出来，指导阴道镜的合理使用。3、比起复查细胞学， HPV检测提供了更快捷的结果，从而很有信心地把 HPV阴性的妇女重新放回常规筛查人群中。 22（三） HPV检查提供了 CIN治疗后随诊手段1、可预测病变恶化或术后复发的风险，有效指导术后追踪。2、 术后 6个月、 12个月检测 HPV阴性，提示病灶切除干净， 可最大限度减少病人的焦虑。3、若术后 HPV检测阳性，提示有残留病灶及有复发的可能。CIN患者： 成功治疗率达 90 95，复发率 10；但比正常人发生浸润癌的几率仍高 4 5倍；危险期： 8年左右；23三、宫颈癌的早期筛查24正常妇女HPV暴露主要是性传播感染几率： 40HPV年龄 30岁平均 824个月CIN I（组织学）CIN II/III（组织学）无细胞学改变 /HPV消除子宫颈浸润癌机体免疫机制辅助致癌因素图 HPV感染与宫颈病变的自然过程潜伏感染期 亚临床感染期 临床症状期 HPV相关肿瘤期8 10年筛查是早诊早治关键 25筛查间隔时间（年）1 2 3 3 5 5 10 10阳性病变风险系数1 2 2.5 3 4 9备注： 1 3年筛查间隔比较安全，随着筛查间隔的增加，风险大幅度增加。表：筛查间隔时间与阳性病变风险系数表26筛查对象 ： 三年以上性行为或 21岁以上有性行为的妇女。起始年龄 ： 经济发达地区： 25 30岁，经济欠发达地区： 35 40岁，高危人群起始年龄应相应提前。终止年龄 ： 65岁以上危险性极低 。筛查间隔 ：每年一次，若连续两次 HPV和细胞学筛查均为正常，可 延长筛查间隔时间至 5 8年。中国癌症研究基金会（ CCRF）宫颈癌筛查及早诊早治指南27w 临床检查： 如肉眼观察、阴道镜等操作简便，但准确率和特异性有待提高 （ 50-70）w 细胞学检测 ： 观察宫颈上皮细胞的变异，常见方法有：巴氏涂 片、 LCT、 TCT等（ 70%以上 ）1）长期宫颈糜烂可导致宫颈上皮细胞形态变异，但非 HPV引起的细胞形态异常与宫颈癌病变没有直接联系。2）在感染早期，细胞往往不会出现形态变化，但 此时 HPV对细胞内遗传物质的损伤可能已经产生。 w 病毒学检测： HPV DNA检测（ PCR方法），常见方法有：基因芯片分型检测、 HC-2、荧光 PCR等特异性强、灵敏度高，操作简便快捷 (98%)中国癌症研究基金会（ CCRF）宫颈癌筛查及早诊早治指南28中国癌症研究基金会（ CCRF）宫颈癌筛查及早诊早治指南 检查后随访对象 ：细胞学低度病变、 CIN I以上者、 “特殊职业 ”妇