细胞生物学实验心得

细胞生物学实验心得一、关于动植物细胞染色体标本的制备（一）取材 有丝分裂： 植物根尖、茎尖；动物骨髓细胞、羽髓细胞、培养的血细胞等 减数分裂： 植物花粉、动物精巢等 （二）材料固定目的：（ 1）迅速杀死细胞，防治细胞自溶、腐败；（ 2）使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。（ 3）利于染色。常用固定液 ：卡诺氏固定液，用于固定染色体标本的配方为 Carnoy （甲醇：冰醋酸 1： 1）使用方法 ： 15 20倍于固定材料的固定液固定数小时至过夜（三）材料保存 固定好的组织可长期保存于 70酒精中（四）染色 组织压片染色体制备常用染液 ：醋酸洋红染液、改良苯酚（石碳酸）品红染液、龙胆紫染液 细胞悬液滴片常用染液 ：吉姆萨（ Giemsa）染液 组织整染技巧 ：切碎染染液配制注意1、注意配方。 龙胆紫用 2的醋酸配制和用水配制使用效果不同，前者较好2、注意染液成熟。 醋酸洋红染液、改良苯酚（石碳酸）品红染液、吉姆萨（ Giemsa）染液配好后均需成熟一段时间，当时染色效果不好染液使用注意 龙胆紫 染染色体时染色时间要短（不超过 1分钟），并且最好加水分色 吉姆萨染液 只能用于干燥的滴片标本，染色时加液要多或扣染，染色结束冲洗时要带染液一起冲洗（五）压片技巧 三步曲：切、 敲 、压二、关于 细胞膜选择通透性的实验 常做实验： 植物细胞质壁分离实验、死活细胞染色鉴定实验 常用材料： 紫皮洋葱、水绵 其它可用材料 ?带叶肉细胞的叶下表皮、0.03%中性红水溶液中泡过的洋葱内表皮 常用试剂 ： 30蔗糖、 0.4台盼蓝染液 水绵（一种藻类）涉及问题1、选择性透性是活细胞的特性2、造成质壁分离的机制？3、质壁分离实验可用葡萄糖或氯化钠做吗？4、与质壁分离程度有关的主要因素？不透膜的溶质分子数三、关于细胞计数 （一）细胞计数板的结构 第一种： 5大方格，中间大方格组成为1625（ 16个中方格，每个中方格内 25个小方格） 400 第二种： 5大方格，中间大方格组成为2516（ 25个中方格，每个中方格内 16个小方格） 400（二）计数板上标识数目含义 1/400mm2：中间大方格共有 400个小方格，每小格面积为 1/400mm2 0.1mm：计数板底部到盖玻片的高度（三）计数板使用方法清洁盖片加样计数清洁： 先用水，再用药棉蘸取 75%酒精加样： 液滴接触盖玻片的边缘，使悬液通过毛细作用渗入计数室计数范围压线细胞计数原则（四）细胞悬液密度计算 计两大格的计算方式：细胞密度（个 /ml）（ 2大格细胞总数 /2） 104 稀释倍数 16格 25格的血球计数板计算公式 ：细胞数 ml=4中格内细胞个数和 /416104稀释倍数 25格 x16格的血球计数板计算公式：细胞数 ml=5中格内细胞个数和 /525104稀释倍数四、关于细胞涂片制备 材料： 单细胞悬液 涂片易出现问题 ：太厚或太薄不便观察；动物细胞带水太多缓慢干燥引起失水 解决方法 ：用样减少；用固定液；用抗凝剂后离心血涂片染色用的瑞氏（ Wright）染液染色方法 先用蜡笔对选定的区域划线 （用作堤防，阻止染液扩散）； 然后滴加适量染液覆盖选定区域，染 1分钟（液面应 浮现一层金黄色金属物质 ，表示染液起了染色作用）； 再滴加等量蒸馏水或 pH6.4的磷酸盐缓冲液稀释染液，轻摇混匀，染色 5min； 不要倒掉染液，流水或滴加蒸馏水直接洗去浮液 五、关于淀粉染色 染液： 碘 -碘化钾染液。配法：取碘化钾 3克，溶于 100毫升蒸馏水，加热使之溶解 ,然后加 入