专题1基因工程和专题2细胞工程课件

“ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX “ 专题专题 1基因工程基因工程 ” 和 “ 专题专题 2细胞工细胞工 程程 ” 高中生物选修三复习 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 1.主要内容归纳 2.重难点突破 3.达标训练 内 容 纲 要 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 专题专题 1 基基 因因 工工 程程 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 1.基因工程的理论基础和概念的理解 2.明确基因工程所需三种基本工具的作用 4.简述基因工程的基本操作程序 3.理解基因工程的原理和技术 5.能列举出基因工程在植物、动物、医疗领域的具体应用及取 得的丰硕成果 6.简述其基本原理及基本途径 学 习 目 标 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 本 章 知 识 网 络 基因工程 理论基础和概念 基 本 工 具 基因的剪刀 限制性核酸内切酶 基因的针线 DNA 连接酶 基因的运载工具 运载体 1.获取目的基因 2.构建基因表达载体 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测与鉴定 基 本 操 作 程 序 基因工程的应用（略） 蛋白质工程（略 ) “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 1.时间： 2.理论基础： （ 1） _是生物遗传物质的发现。 （ 2） _结构的确立。 20世纪 70年代 （ 3） _传递方式的认定。 3.技术上的保障： 限制性核酸内切酶、 _和 _ 载体的发现与应用 DNA DNA双螺旋 遗传信息 DNA连接酶 质粒 （一） 基因工程的理论基础和技术 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 基因工程又叫基因拼接技术或 DNA重 组技术。该技术是在生物体外，通过对 DNA分子进行人工 “ 剪切 ” 和 “ 拼接 ” ， 对生物的基因进行改造和重新组合，然后 导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基 因在受体细胞内表达，产生出人类所需要 的基因产物。 （二）基因工程的概念 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 基因工程的别名基因工程的别名 操作环境操作环境 操作对象操作对象 操作水平操作水平 基本过程基本过程 实质（原理）实质（原理） 结果结果 基因拼接技术或 DNA重组技术 生物体外生物体外 基因基因 DNA分子水平分子水平 人类需要的基因产物人类需要的基因产物 剪切剪切 拼接拼接 导入导入 表达表达 基基 因因 重重 组组 甲供体：提供目的基因 乙（受体 ：表达目的基因），即基因未变，合成 蛋白质未变，只是合成场所的转移 导入 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 1.限制性核酸内切酶 “ 分子手术刀 ” (1)来源 : (2)化学本质： (3)作用 (4)作用特点： (5)切割方式 （三 ） 基因工程的操作工具 催化作用 ,所以可重复利用 可用于 DNA的切割获取目的基因和载体的切割 错位切：产生两个相同的黏性末端 平切：形成平末端 主要是从原核生物中分离纯化出来的 蛋白质 特异性 ,即限制酶可识别特定的脱氧核 苷酸序列 ,切割特定位点 主要切割外源 DNA ，而对自身的 DNA 不起作用，达到保 护自身的目的 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 什么叫黏性末端？什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的被限制酶切开的 DNA两条单链的两条单链的 切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间 正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 举例 ：大肠杆菌的一种限制酶（ EcoR) 能识别 GAATTC序列，并在 G和 A 之间切开形成黏性末端， Sma 能识别 CCCGGG序列，并在 C和 G之间切 割形成平末端 。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制要想获得某个特定性状的基因必须要用限制 酶切几个切口？可产生几个黏性末端？酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。要切两个切口，产生四个黏性末端。 如果把两种来源不同的如果把两种来源不同的 DNA用同一种限制酶来用同一种限制酶来 切割，会怎样呢？切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的会产生相同的黏性末端，然后让两者的 黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的 DNA分子了。分子了。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 注意 ： 切割的化学键为磷酸二酯键。 在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶 , 目的是产生相同的黏性末端。 将一个基因从 DNA分子上切割下来 ,需要 2个限制 酶 ,同时产生 4个黏性末端。 不同 DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末 端都相同 ,同一个 DNA分子用不同的限制酶产生的 黏性末端一般不相同。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 2.DNA连接酶 “ 分子缝合针 ” 常用类型 E coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接黏性末端或平末端 （ 后者效率低，需更多 的连接酶， DNA浓度更高） 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 作用实质：使两个 DNA的单链末端之间形成磷酸二酯键 而连接成一个 DNA “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 2、 “ 分子缝合针 ” DNA 连接酶 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙连接酶可把黏性末端之间的缝隙 “ 缝合缝合 ” 起来，形成起来，形成 _ 作用：作用： 磷酸二酯键 DNA连接酶能封连接酶能封 闭闭 DNA双螺旋骨架双螺旋骨架 上的切口，不能封上的切口，不能封 闭缺口闭缺口 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 例 限制性内切酶 的识别序列和切点是 G GATCC ， 限制性内切酶 的识别序列和切点是 GATC 。 在质粒上有酶 的一个切点，在目的基因的 两侧各有 1个酶 的切点。 请画出质粒被限制酶 切割后所形成的黏性末端。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 例 限制性内切酶 的识别序列和切点是 GGATCC ， 限制性内切酶 的识别序列和切点是 GATC 。 在质粒上有酶 的一个切点，在目的基因 的两侧各有 1个酶 的切点。 请画出目的基因两侧被限制酶 切割后所形成的黏 性末端。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 例 限制性内切酶 的识别序列和切点是 GGATCC ， 限制性内切酶 的识别序列和切点是 GATC 。 在质粒上有酶 的一个切点，在目的基因 的两侧各有 1个酶 的切点。 能。上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端 相同，所以能连接起来。 在 DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形 成的黏性末端能否连接起来？为什么？ “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX DNA连接酶与 DNA聚合酶的比较 DNA 连接酶 DNA 聚合酶 作用实质 都是催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键 是否需模板 不需要 需要 连接 DNA链 双链 单链 作用过程 在两个 DNA片段 之 间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存 在的核酸片段的 3 端的 羟基上 ,形成磷酸二酯键 作用结果 将两个 DNA片段连接成重组 DNA分子 合成新的 DNA分子 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 3.基因进入受体细胞的载体 “ 分子运输车 ” (1)类型 (2)功能： (3)应具备条件 最常用载体 :质粒 其他载体 : 噬菌体的衍生物、动植物病毒等 提醒 质粒本质是 DNA,不是细胞器 ; 特点 :小型环状。 将目的基因导入受体细胞。 能在宿主细胞内稳定保存并大量复制； 有一个至多个限制酶的切割位点 ,以便于与外源 基因连接； 有特殊的遗传标记基因 ,供重组 DNA的检测和鉴定 。 能够自主复制并稳定地保存。 对受体细胞无害。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 质粒：质粒： 质粒是染色体外能够进行自主复制的质粒是染色体外能够进行自主复制的 遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌 细胞中核区外的细胞中核区外的 DNA分子。现在习惯上用分子。现在习惯上用 来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中核来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中核 以外的以外的 DNA分子。分子。 质粒是基因工程最常用的运载体。质粒是基因工程最常用的运载体。 绝大多数细菌质粒都是闭合环状绝大多数细菌质粒都是闭合环状 DNA 分子。有的一个细菌中有一个，有的一个分子。有的一个细菌中有一个，有的一个 细菌中有多个。细菌中有多个。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 大肠杆菌质粒的分子结构示意图： DNA 大肠杆菌细胞质粒 目的基因插入位点 复制原点 氨苄青霉素 抗性基因 “标记基因标记基因 ” 质粒一般有几个到几百个基因，控制细菌的 抗药性 、 固氮 、 抗生素生成 等性状 . 有切割位点 能复制并带着插入的 目的基因一起复制 有标记基因的 存在，将来可 用含青霉素的 培养基鉴别。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 例题： 3.下列关于 DNA连接酶作用的叙述，正确的是（ ） A.将单个核苷酸加到某 DNA片段末端，形成磷酸 二酯键 B.将断开的两个 DNA片段的骨架连接起来，重新 形成磷酸二酯键 C.连接两条 DNA链上碱基之间的氢键 D.只能将双链 DNA片段互补的黏性末端之间连接 起来，而不能将双链 DNA片段平末端之间进行 连接 B “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX （四）基因工程的基本操作程序 1.基因工程图解 :抗虫棉的培育过程 可转移至受体细 胞，并且整合到 受体细胞染色体 的 DNA上 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX （四）基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取 (2)基因表达载体的构建 最核心步骤 (3)将目的基因导入受体细胞 (4)目的基因的检测与鉴定 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 从基因文库 (基因组文库或 cDNA文库 )中获取 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 小 大 基因中启动子 无 有 基因中内含子 无 有 基因多少 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 物种之间的 基因交流 可以 部分基因可以 说明 基因文库的组建过程就包含基因工程的基本操作步骤。从基因文库中获取目的基因的优 点是操作简便 ,缺点是工作量大 ,具有一定的 盲目性 2.基 本 操 作 程 序 从基因文库中获取 利用 PCR技术扩增 利用化学方法人工合成 (1)目的基因的获取 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 人工合成目的基因 :常用的方法有化学合成法和 反转录法。 化学合成法 :蛋白质 氨基酸序列 RNA 碱基序列 DNA碱基序列 用 4种脱氧核 苷酸人工合成目的基因 反转录法 :分离出供体细胞 mRNA 单链 DNA 合成目的基因（具体过程如下） 分析 推测 推测 逆转录酶 DNA聚合酶 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX cDNA 合 成 过 程 第一步，反转录酶以 RNA为模板合成一条与 RNA互补的 DNA单链，形成 RNA-DNA杂交分子。 第二步，核酸酶 H使 RNA-DNA杂交分子中的 RNA链降解， 使之变成单链的 DNA。 第三步，以单链 DNA为模板，在 DNA聚合酶的作用下合 成另一条互补的 DNA链，形成双链 DNA分子。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 利 用 PCR 技 术 扩 增 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX PCR技术技术 聚合酶链式反应聚合酶链式反应 原理原理 ： 前提：前提： 条件：条件： PCR扩增仪 DNA双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物热稳定 DNA聚合酶 (Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制和缓冲液 方式：以 _方式扩增，即 _（ n为扩增循 环的次数） 指数 2n 结果 ： 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，根 据这一序列合成引物。 引物：一小段单链 DNA或 RNA， 一般 20 30个碱 基，能与 DNA母链的一段碱基序列互补配对。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX PCR扩增技术与 DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相 同 点 原理 DNA复制 (碱基互补配对 ) 原料 四种游离的脱氧核苷酸 条件 模板、 ATP、酶、原料、引物 不 同 点 解旋 方式 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 场所 体外复制 (PCR扩增仪 ) 主要在细胞核内 酶 热稳定的 DNA聚合酶 (Taq酶 ) 细胞内含有的 DNA聚合酶 结果 在短时间内形成大量的 DNA片段 形成整个 DNA分子 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX (2)基因表达载体的构建 最核心步骤 基因表达载体的组成 :启动子、目的基因 、终止子以及标记基因等。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 注意： 与载体相比较 ,增加的启动子、目的基因和 终止子三个基因片段 ,其功能各不相同。 启动子 (DNA片段 ) 起始密码子 (RNA);终止子 (DNA片段 ) 终止密码子 (RNA)。 基因表达载体的构建方法 提醒 该过程把三种工具 (只有两种工具酶 )全用 上了 ,是最核心、最关键的一步 ,在体外进行。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX (3)将目的基因导入受体细胞 细胞 类型 常用 方法 受体 细胞 转化过程 植物 细胞 农杆菌 转化法 体细胞 将目的基因插入 Ti质粒的 T-DNA上 转入农杆菌 导入植物细胞 整合 到受体细胞的 DNA上 动物 细胞 显微注 射技术 受精卵 将含有目的基因的表达载体提纯 取卵 获得受精卵 显微注射 早 期胚胎培养 胚胎移植 发育成为 具有新性状的动物 微生 物细 胞 Ca2+处 理增大 细胞壁 通透性 原核 细胞 或酵 母菌 用 Ca2+处理细胞 感受态细胞 重组 表达载体 DNA分子与感受态细胞混合 感受态细胞吸收 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 基因工程唯一不涉及到碱基互补 配对的操作 步骤 。 微生物做受体细胞主要是个体微小 ,代谢旺盛 , 繁殖速度快 ,获得目的基因产物多。 植物细胞还可用基因枪法和花粉管通道法。 (4)目的基因的检测与鉴定 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 目的基因的检测与鉴定 检测 步骤 目的 方法 原理 工具 现象 1 DNA分子 杂交技术 碱基互 补配对 放射性同位素作 标记的含目的基 因的 DNA片段 杂交带 2 检测目的基因 是否转录出了 mRNA DNA分子 杂交技术 碱基互 补配对 放射性同位素作 标记的含目的基 因的 DNA片段 杂交带 3 检测目的基因 是否翻译成蛋 白质 抗原 -抗 体杂交 抗体的 专一性 特定抗体 杂交带 (阳 性反应 ) 检测转基因生物的 染色体 DNA上是否 插入了目的基因 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 例题： 1.下列有关基因工程技术的叙述 ,正确的是（ ） A.重组 DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶 和载体 B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸 序列 C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌 繁殖快 D.只要目的基因进入受体细胞就能实现表达 C “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 2.利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所 需要的产品。下列选项中能说明目的基因完成了 在受体细胞中表达的是 （ ） A棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 B大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其 mRNA C山羊乳腺细胞中检测到人生长激素 DNA序列 D酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白 D “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 课 后 作 业 见附件 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 专题专题 2 细细 胞胞 工工 程程 植 物 细 胞 工 程 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 1、理解植物细胞的全能性 2、了解植物细胞脱分化和再分化的结果 3、掌握植物组织培养的特点 4、理解植物体细胞杂交和植物细胞培养的 联系 5、掌握微型繁殖和植物组织培养的联系 6、掌握作物脱毒、人工种子的制备过程和 意义 学 习 目 标 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 植 物 细 胞 工 程 概念 原理：生物学原理和分子生物学原理水平：细胞整体水平或细胞器水平 目的：改变细胞内的遗传物质，获得细胞产品 细胞的全能性：概念、原因、大小 植物组织培养 过程：外植体 愈伤组织 胚状体 植物体 脱分化：形成愈伤组织 再分化：植物细胞选择性表达，形成胚状体 特点：子代与亲代性状高度遗传 去细胞壁：纤维素酶、果胶酶 诱导剂： PEG 融合完成的标志：新细胞壁的形成 过程：原生质体融合 +组织培养 植物体细胞 杂交 知 识 网 络 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 一 植物组织培养及细胞全能性 1.操作流程及培养条件 (1)操作流程 (2)培养条件：营养物质 (水、无机盐、蔗糖、氨 基酸和有机酸等 )、激素 (如细胞分裂素、生长素 等 )及其他条件 (无菌、适宜的温度和 pH等 )。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 注意 幼嫩的组织脱分化较为容易 ,如茎尖、 根尖、形成层细胞易脱分化 ,而植物的茎、叶和成 熟的组织则较难。 对外植体要进行消毒处理 ,而对各种器械要彻底 灭菌。 植物组织培养中用到的有机碳源一般为蔗糖 ,用 葡萄糖也可以 ,但后者的成本高。 诱导愈伤组织再分化形成胚状体或丛芽及生根 的过程中 ,要进行换瓶处理 ,以改变培养基中的激 素配比及浓度。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 2.脱分化和再分化的比较 比较内容 脱分化 再分化 过程 外植体 愈伤组织 愈伤组织 幼苗 形成体特点 排列疏松、高度液泡化的薄壁细胞 有根、芽 需要条件 a.离体 b.适宜的营养 c.生长素 /细胞分裂 素的比例适中 d.一般不需光 a.离体 b.适宜的营养 c.生长素 /细 胞分裂素的比 例高或低诱导 生根或生芽 d.光照 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 3.原理：全能性 (1)含义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整 个体的潜能。 (2)物质基础：生物的每一个细胞都包含有该物种 所特有的全套遗传物质 ,都有发育成完整个体所必 需的全部基因。 (3)在生物体内细胞并没有表现出全能性的原因 基因在特定的时间和空间条件下选择性表达 ,细胞 分化为不同的组织、器官。 (4)全能性的实例 花药的离体培养、植物的组织培养、克隆技术等 。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 二 植物组织培养技术的应用 1.植物繁殖的新途径 (1)微型繁殖：不仅可以保持优良品种的遗传特性 , 还可以高效快速地实现种苗的大量繁殖。 (2)作物脱毒：生产上许多无性繁殖作物均受到病 毒的侵染 ,从而导致品种严重退化、产量降低和品 质变差。利用植物分生组织 (如茎尖、根尖 )进行 培养 ,可以使新长成的植株脱除病毒。 (3)人工种子：植物组织培养得到的胚状体、不定 芽、顶芽或腋芽 ,包上人工种皮就可以形成人工种 子。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 2.作物新品种的培育 (1)单倍体育种：花药离体培养过程就是植物组织 培养过程。 单倍体育种的优点是后代不发生性状分离 ,都是纯 合子 ,能够稳定遗传 ,明显缩短了育种年限。 (2)突变体的利用：在植物组织培养过程中 ,由于 培养细胞一直处于不断的分生状态 ,因此容易受到 培养条件和外界压力 (如射线、化学物质等 )的影 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 响而发生突变。从这些产生突变的个体中可以筛 选出对人们有用的突变体 ,进而培育成新品种。 (3)细胞产物的工厂化生产：可以利用植物组织培 养技术大量生产某些细胞产物 ,如蛋白质、药物、香料等 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 例题 某优良品种水稻的基因型为 AaBb，其花药通过组 织培养形成了试管苗。下列对这一培养过程的叙 述，错误的是 （ ） A.花粉形成试管苗要经过脱分化和再分化的过程 B.试管苗有四种基因型，其体细胞含有一个染色 体组 C.通过该过程培养出的试管苗还不能直接用于生产 D.这些试管苗自交，后代性状不发生分离 D “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 三 植物体细胞杂交 1.技术流程 2.疑难解读 (1)植物体细胞杂交的障碍 植物细胞都有细胞壁。根据酶的专一性原理 ,用 纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。 原生质体融合。人工诱导方法包括物理法 ,如离 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 心、振动、电激 ;化学法 ,如聚乙二醇 (PEG)等。 (2)杂种细胞的类型 有三种： AA、 BB、 AB,符合要求的只有 AB,需要进 行筛选。 (3)杂种细胞 AB形成的标志：新的细胞壁的生成。 (4)杂种植株遗传物质的变化：细胞融合属于染色 体变异 ,杂种植株的染色体数通常是两亲本细胞染 色体数目之和 ,形成异源多倍体。 (5)植物体细胞杂交的原理：原生质体融合的过程 利用了细胞膜的流动性 ,杂种细胞发育成杂种植株 利用了细胞的全能性。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 3.该技术的目的 植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株 ,而不是 形成杂种细胞就结束。杂种植株特征：具备两种 植物的遗传特征 ,原因是杂种植株中含有两种植物 的遗传物质。 4.该技术在育种上应用时最大的优点 克服远缘杂交不亲和的障碍。 5.未解决的问题 目前还不能让杂种植物完全按人们的需要去表达 亲代的优良性状 ,如番茄 马铃薯。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 下列关于细胞工程的叙述 错误的是 ( ) A.电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞 融合 B.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单 个细胞均需酶处理 C.小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的 B淋巴细胞 融合可制备单克隆抗体 D.某种植物甲乙两品种的体细胞杂种与甲乙两品 种杂交后代的染色体数目相同 D “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 专题专题 2 细细 胞胞 工工 程程 动 物 细 胞 工 程 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 一 动物细胞培养技术 二 动物细胞融合与单克隆抗体 三 动物体细胞核移植技术与克隆动物 学 习 目 标 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 动 物 细 胞 工 程 知 识 网 络 动物细胞培养技术 动物细胞培养的操作流程 培养条件 原理 单克隆抗体的操作流程动物细胞融合与 单克隆抗体 动物体细胞核移植 技术与克隆动物 动物细胞融合操作流程 动物体细胞核移植技术操作流程 原理：动物细胞核的全能性 卵母细胞选择时期及原因 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 1.动物细胞培养的操作流程 2.知识梳理 (1)培养条件 无菌、无毒的环境 无菌处理、加抗生素杀 菌、定期更换培养液。 一 动物细胞培养技术 动物机 体相关 组织 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 营养 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐和微量 元素 +血清或血浆等天然成分 温度和 pH(36.50.5) 和 (7.2 7.4) 气体环境 95% 空气 +5%CO2 注意 CO2作用 调节培养基 pH 空气中 O2作用 细胞有氧呼吸 所用装置 CO 2培养箱 (2)原理：细胞增殖 (3)动物细胞培养时 ,一般选取幼龄动物的组织、 器官 ,其细胞的分化程序较低 ,增殖能力强 ,有丝分 裂旺盛 ,容易培养。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX (4)在动物细胞培养过程中 ,一般情况下 10代以前 的细胞核型不变 ,10代以后有些细胞核型发生改 变 ,50代以后的细胞可能发生癌变。 (5)胰蛋白酶在动物细胞培养过程中的作用包括将 组织分散成单个细胞 ,以及将贴壁细胞从瓶壁上分 离下来 ,这样做的目的是避免动物细胞的接触抑制 现象。 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 例题 1.关于动物细胞培养的有关叙述，正确的是 ( ) A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡 过程中 B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、 无机盐、生长素和动物血清等 C.动物细胞培养的目的只是获得大量的细胞分泌 蛋白 D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶 处理 D “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 二 动物细胞融合与单克隆抗体 1.单克隆抗体的操作流程 “ 名师公益课堂 ” 主讲标题 XXXXXX 2.知识梳理 (1)诱导融合的 2种细胞名称及作用 免疫过的 B淋巴细胞 (浆细胞 ) 产生抗体 ; 骨髓瘤细胞 无限增殖。 (2)诱导融合与原生质融合的不同方法 动物细胞诱导融合的特有方法 灭活病毒诱导。 (3)2次筛选的目的及方法 在特定的选择性培养基上 ,未融合的亲本细胞 (浆细胞和骨髓瘤细胞 )和融合的具有同种核的细 胞 (BB融合细胞、瘤瘤融合细胞 )都会死亡 ,只有融 合的杂种 细胞 (杂交瘤细胞 )才能生长。这种杂种 “