中药及其制剂的含量测定方法

中药及其制剂的含量测定方法 徐隽佳 药学 0202 3021901009 目的 确定某种成分的含量高低是否符合规定以判定药物的 优劣 ,确保临床用药的安全有效 有重要的作用 . 特点 只能对某一个或几个成分进行测定 受到对照品的限制 测定药味选择 君药 毒性药 贵重药 测定成分的选定 有效成分（首选） 毒性成分：保证中药制剂的安全性 有效成分不确定的：可测定指标性成分 测定浸出物 以某一物理常数为测定指 标 测定总成分：总黄酮 ,总生物碱 ,总有机酸 . 原则：测定成分应尽量与中医 理论一致 ,与药理作用和主治 功能一致 样品的预处理 粉碎 提取 分离净化 常用定量方法 化学分析法 ： 重量法 、 容量法 分光光度法 ： 可见 -紫外分光光度法 薄层扫描法 (TLCS）： 薄层吸收扫描法 ， 薄层荧光扫描法 高效液相色谱法 气相色谱法 荧光分析法 应用 ：某些含量较高的成分、矿物药制剂中 的 无机成分 优点 ：仪器简单，结果准确 缺点 ：灵敏度低、专属性不高 重量法分类 挥发法：有挥发性或能定量转化为挥发性物 质的组分的含量 萃取法：被测组分在互不相容的两相中溶解 度不同 （例） 沉淀法：将被测组分定量转化为难溶化合物 昆明山海棠片的含量测定 取本品 60片 除去糖衣 精密称定 研细 精密称取适 量（约相当于 25片） 置 200ml锥形瓶中 加适量硅藻土 混匀 加乙醇 70ml 加热回流 40min 放冷 滤过 滤渣再加乙醇加热回流滤过 合并滤液 置水浴上蒸干 残渣加盐酸溶液（ 1 100） 30ml置水浴上搅拌使溶解 放冷 滤过 残渣再用盐酸同法提取 3次 合并滤液 于分液漏斗中 加氨试液使溶液成碱性 用乙醚振摇提 取 4次 合并乙醚液 用水振摇洗涤 2次 乙醚液用滤纸滤过 滤液置已称定重量的蒸发皿中 低温水浴蒸去乙醚 残渣加少量乙醇蒸干 置 100 干燥至恒重 称定重量 (不 得少于 1.0mg/片 ) 特点：灵敏度高，精度高，操作简便 要求：在紫外（ 200-400nm） 或可见光区（ 400-760nm） 有吸收 应用：用于最大吸收波长较高，吸收较强的 组分 一般测定前样品须经过提取、纯化等步骤以免除干扰 吸收系数法 （举例 ) 单波长光度法 对照品比较法 标准曲线法 双波长法 计算分光光度法 系数倍率法 无需对照品 ，方法简 便 至少做 5点， A在 0.3-0.7间 为宜 左金丸中小檗碱含量的测定 A*D 含量（ mg/ml)= W*100*L *100% (E1%1cm)r 样品经连续回流 提取，柱色谱 净化后，用吸 收系数法测定 照分光光度法，在 345nm处测定吸收度按盐酸小檗碱 （ C20H17NO4HCl） 的吸收度（ E1%1cm） 为 728计算 以薄层色谱法为基础发展起来的薄层色谱组分原位分析方 法及薄层色谱的记录方法 用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中吸收紫外 光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行 扫描 . 即固定波长，斑点移动，测定 A-l或 F-l曲线 将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查 或含量测定 光源 1 2 斩光器 光电检测器 光电 检测器 薄层板 双波长薄层扫描仪 常选择斑点中化合物 的 吸收峰 波长作为测 定波长 选择化合物吸收的基线部 分（即化合物无吸收的部 分）作为参比波长 用一定波长的光束对薄层板进 行扫描，记录其吸光度随展开 距离的变化，即得薄层扫描曲 线 2 1吸光度 KX 1.校正前的标准曲线 2.校正后的标准曲线 吸光度与物质浓度服从 Kubelka-Munk方程 K为单位薄层厚度的吸光系数 KX称吸收参数（向当于斑点单 位面积中物质的含量） X为薄层厚度 根据散射参数 SX的值将 A-KX曲 线校正后即可用于定量 SX的值于薄层板固定相的 性质、粒度和分布有关 在一定范围内， 峰面积与斑点中 的物质的量（或 点样量）成直线 关系 薄层荧光扫描法 适用范围 本身具有荧光或经过适当处理后可产生 荧光的物质的测定 . 光源 用氙灯或汞灯，采用直线式扫描 . 专属性强，灵敏度高 灵敏度比吸收法高 1 3个 数量级，最低可测到 1050pg样品，但适用范围较 窄 .对于能产生荧光的物质，可直接采用荧光扫描 法测定 .对于有紫外吸收，而不能产生荧光的物质 ，需采用荧光淬灭法测定 . 定量依据 当溶液浓度很稀时 (ECL0.05)， 荧光物质的荧光强度 F与激 发光光强 I0 及物质浓度 C之间存在如下关系 K-荧光效率有关为常数， E为吸收系数， L为薄层厚度 .F- -斑点荧光强度的积分值 (色谱峰峰面积 ), C-组分浓度 . 注 ： Kubelka Munk理论不适用于薄层荧光扫描，无需进行 曲线校直 . F=2.3KI0ECL=KC 即在点样量很小时，斑点中组分的浓度与其荧光强度 成线性关系 TLCS定量分析方法 外标法 内标法 标准曲线法 外标法 (外标一点法 ,外标两点法 ) 最常用 简便，但点样必须准确 . 薄层板间差异较大，应采用 随 行标准法（ 即供试品与标准溶液或对照液交叉点在同一板上 ） . 外标一点法 工作曲线通过原点，只需点一种浓度的标准品溶 液，与供试液同板展开，对比，测定组分含量 . 定量依据 C =F1 A C-组分的重量或浓度 ; A-组分的峰面积 F1-直线的斜率或比例常数 外标二点法 工作曲线不通过原点时，需用外标二点法定 量 . 至少需点二种不同浓度的标准溶液 (或 一种浓度两种点样量 )，才能决定一直线 . 计算 C=F1A+F2 F2-纵坐标的截距，其值由仪器自动算出 . 内标法 (内标一点法 ,内标二点法 ) 定义 ：选一个纯物质作为内标物，并准确称取 一定量内标物加至供试液及标准液中， 计算供试品溶液中某组分含量的定量方法 . 优点 ：定量准确度与点样量无关 . 缺点 ：内标物不易寻找 , 操作麻烦 .较少应用 内标物要求： Rf合适， 与被测组分及样品中其他组分完全分离， 纯度高 高效液相色谱法 反相色谱法 特点 流动相极性大于固定相极性的分配色谱法。 常用固定相 非极性固定相：十八烷基硅烷键合硅胶 (ODS或 C18)， 辛基键合硅胶（ C8） 等 常用流动相 甲醇 -水或乙腈 -水。 出峰先后 极性强的组分因 K值较小先流出色谱柱， 极性小的组分后流出。流动相中有机溶剂的比例增加 ，极性减小，洗脱力增强 中药制剂多采用反相高效液相色谱法 反相离子对色谱 色谱柱 C18或 C8 流动相 含 310mmol/L离子对试剂的反相流动相 . 被分离组分及 离子对试剂的疏水性越大 ,所需有机溶剂比例越高 . 离子对选择 碱类分离 常用烷基磺酸 (盐 )，如己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十 二烷基磺酸钠等 . 酸类分离 常用烷基季铵盐 ，如磷酸四丁基铵等 流动相 pH 使被测组分完全解离并最大限度地形成离子对 在色谱柱允许 pH适用范围内 把离子对试剂加入极性流动相中，被 分离的 样