GB 29695-2013 食品安全国家标准 水产品中阿维菌素和伊维菌素多残留的测定 高效液相色谱法

G 中华人民共和国国家标准 9695 2013 食品安全国家标准 水产品中阿维菌素和伊维菌素 多 残留 的测定 高效液相色谱法 in 电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准） 2013布 2014施 中华人民共和国农业部 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 产品中阿维菌素和伊维菌素多残留的测定 高效液相色谱法 . 1 范围 . 2 规范性引用文件 . 3 原理 . 4 试剂与材料 . 5 仪器 . 6 试料的制备与保存 . 料的制备 . 料的保存 . 7 测定步骤 . 准曲线的制备 . 取 . 化 . 生化 . 定 . 白实验 . 8 结果计算 . 9 方法的灵敏度、准确度和精密度 . 敏度 . 确度 . 密度 . 附录 A . 言 本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准系国内首次发布的国家标准。 水产品中阿维菌素和伊维菌素多残留的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了水产品中阿维菌素和伊维菌素残留量的 制样和 高效液相色谱测定方法。 本标准适用于鱼的可食 性组织 中阿维菌素和伊维菌素残留量的 检测 。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件 ，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 准化工作 导则 第 1部分：标准的结构和编写规则 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试料中残留的阿维菌素和伊维菌素， 用乙腈提取，正己烷除脂，碱性氧化铝柱净化， 效液相色谱 测定，外标法定量。 4 试剂 与材料 以下所用的试剂，除特别注 明外均为 分析 纯试剂；水为符合 6682规定 的一级水。 阿维菌素标准品 ： 94 。 伊维菌素标准品 ： 92。 乙腈 ：色谱纯。 甲醇 ：色谱纯。 正己烷 三氟乙酸酐 冰乙酸： 优级纯。 无水硫酸钠： 650 烘 4 h，干燥器中冷却备用。 碱性氧化铝固相萃取柱： 1 g/3 相当者。 生化试剂 A： 取 乙腈 1 混匀 ，现配现用。 生化试剂 B：取三氟乙酸酐 1 乙腈 2 混匀 ，现配现用。 酸 溶液 ： 取冰乙酸 0.4 用 水 溶解并 稀释至 100 00 g/合 标准 贮备 液： 精密 称取阿维菌素和伊维菌素标准品各 10 100 用甲醇溶解并 稀释至刻度 ， 配制成浓度为 100 g/维菌素和伊维菌素 混合 标准 贮备 液。 以下保存，有效期 6个月。 0 g/精密量 取 100 g/合 标准贮备 液 10 于 100 用甲醇稀释 至刻度 ，配制成浓度为 10 g/2 8 保存，有效期 3个月。 5 仪器 高效液相色谱仪： 配荧光检测器。 分析天平： 感量 1 g。 天平： 感量 g。 旋涡混合器 超声波清洗器 离心机 氮吹仪 旋转蒸发仪 固相萃取装置 塞玻璃离心管 ： 5 水硫酸钠柱： 玻璃层析柱（ 10 50 2号砂芯）中装填 5 形瓶 ： 50 塞聚丙烯离心管： 50 膜 ： m。 6 试料的制备与保存 料的制备 取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎 ， 并使 均 质。 取均质后的供试样品，作为供试试料 。 取均质后的空白样品，作为空白试料 。 取 均质后的空白样品 ， 添加适宜浓度 的 标准 工作液 ， 作为空白添加试料。 料的保存 以下 保存。 7 测定步骤 准 曲线的制备 精密量 取 1 g/维菌素和伊维菌素 混合标准工作液 适量， 用 甲醇 稀释 ， 配制成浓度为 1 和 2 g/系列标准溶液， 各 取 0.1 5 心管中，于 45 55 水 浴氮气吹干 ，按衍生化步骤处理 。 供 高效液相色谱测定 。 以 测 得 峰面积为纵坐标，对应的标准溶液 浓度为横坐标，绘制标准曲线。 求回归方程和相关系数。 取 称取 试料 （ 5g， 于 50 丙烯 离心管中，加 乙腈 15 涡混合 1 声 30 000 r/心 5 取上清液于另一 50 丙烯离心管中 。 残渣中加入乙腈 10 重复提取一次，合并两次提取液。在提取液中加正己烷 10 充分涡旋混合 1 4 000 r/心 5 弃上层正己烷层。提取液中再加正己烷 10 复提取一次，弃正己烷层， 备用。 化 取 备用液 ， 依次过 用乙腈 10 化的无水硫酸钠柱和碱性氧化铝固相萃取柱，收集滤液。待滤液流至将尽，用乙腈 10 洗离心管，转至无水硫酸钠柱和碱性氧化铝固相萃取柱，吹干，合并滤液于 茄 形瓶中， 于 40 50 旋转蒸发至干。用乙腈 3 2 次溶解残余物，并转至 5 塞玻璃离心管中 ， 45 55 水 浴氮气吹干。 生化 于上述 5 心管中加衍生化试剂 L，盖紧塞子，旋涡混合 30 s，再加衍生化试剂 B 150 L，盖紧塞子，旋涡混合 30 s， 密封 避光 ， 室温下衍生 15 甲醇 750 L，旋涡混合 30 s， 过 滤 ，供高效液相色谱 测定 。 定 谱条件 色谱柱： 250 .6 粒径 5 m） ， 或相当者； 流速： 1.5 mL/ 进样量： 20 L； 柱温： 35 ； 检测器：激发波长 365 射波长 475 洗脱 梯度见表 1： 表 1 洗脱梯度表 时间 醇 % 乙腈 % 酸 % 0 39 55 6 13 39 55 6 15 45 55 0 25 39 55 6 定 法 取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算 。 标准溶液及试样溶液中 阿维菌素和伊维菌素 响应值应在仪器检测的线性范围之内。 在上述色谱条件下， 标准 溶液 和空白添加 试样 溶液 的高效液相色谱图 见附录 A。 白实验 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。 8 结果计算 试料 中阿维菌素 或 伊维菌素的残 留量 （ g/ 按 下 式计算 式中： X 供试 试料 中 相应的 阿维菌素或伊维菌素残留量， g/ C 试样 溶液中 相应的 阿维菌素或伊维菌素的 浓度 ， ng/ V 试样溶液总 体积 ， m 供试试料质量 ， g。 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定后的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 方法的灵敏度、准确度和精密度 敏度 本方法检 测 限 为 2 g/定量限为 4 g/ 确度 本方法在 4 20 g/平上的 回收率 为 70% 120%。 密度 本方法的批内相对标准偏差 15