GB 15985-1995 丝虫病诊断标准及处理原则

中华人民共和国国家标准丝虫病诊断标准及处理原则5985一1995of 华人民共和国传染病防治法及中华人民共和国传染病防治法实施办法制定本标准1主题内容与适用范围本标准规定了丝虫病(班氏丝虫病和马来丝虫病)各期，即微丝拗血症、急性丝虫病和慢性丝虫病的诊断标准、治疗方法及防治原则。本标准适用于疫区专业机构开展丝虫病防治工作和各级卫生防疫、医疗保健机构对丝虫病患者的诊治2诊断原则根据流行季节丝虫病流行区居住史、临床表现以及病原学检查、血清免疫学检查等予以诊断。夜间采血检查微丝坳阳性。确诊病例:有反复发作的非细菌感染性肢体(或阴囊、女性乳房)淋巴结炎/淋巴管炎(或精索炎、辜丸炎、附皋炎)，局部疼痛、触痛、肿胀、温热感，或有丹毒样皮炎，症状持续超过3天，伴有发热、头痛、不适等全身症状。注:3夜间采血检查微丝坳阳性。备3. 2. 1,3. 2. 似病例加3. 2. 1较长期流行区居住史。皮肿、鞘膜积液、乳糜尿以及阴囊或女性乳房肿大(马来丝虫病慢性体征局限于肢体淋巴水肿、象皮肿，且肿胀处限于膝、肘关节远端)。家技术监督局1995一12996一07一01实施5985一19953,5在尿、淋巴液、鞘膜积液(或其他抽出液)内查见微丝勤，在淋巴管、似病例:,确诊病例:疑似病例加3. 3. 5或3. 3. 3或3. 3. 胺嚓)总剂量4. 2g 7天疗法(总量70即每次。天3次，连服7天(成人量，儿童用量应递减，孕妇、哺乳期妇女及有严重疾患者应缓治或免予治疗，下同)为一疗程，需复治2隔半月以上。量33一 40mg/即。续4天或。5g，每天2次连续2天，复治2隔半月以上。对微丝坳密度较高者，首次治疗宜用海群生0天微量递增疗法(即第14天，每天12. 55天258天5010天补足1. 人群微丝拗率在lo y. 20%的地区，于血检普查后，采用全民普服。群生药盐6个月(海群生总量约9g)，对检出的微丝坳血症者再用海群生3g 5天疗法，即每次。. 3g，每天2次，5天为一疗程。治疗2隔半月以上。地区，于血检整群抽样调查后，全民普服。群生药盐6个月。下地区，采取普查，对微丝蝴血症者用海群生3g 5天疗法治疗2隔半月以上。地区，采取普查，对微丝10血症者用海群生总剂量24个疗程，间隔半月以上。群生药盐4人群微丝坳率在5%以下地区，采取普查，对微丝拗血症者用海群生2隔半月以上。季节为宜。见附录C)除蚊媒单生地。窗、纱门等防蚊设备和应用驱蚊剂。结合疟疾防治开展杀虫剂室内灭蚊。5985一1995安 病(补充件)血液检查l,血腆法血片制作:于晚9时至翌晨2时，以酒精棉球消毒耳垂(或指端)待干，用三棱针快速深刺，轻出血液，取血3大滴，约等于60于已编号的清洁载玻片上，涂成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形或长方形厚血膜(约长31. 5平放于有盖的玻片盒内，以防落灰或虫吃。日，将经自然干燥的血片放入清水中溶血5血膜呈乳白色，取出晾干，甲醇固定，染色。大规模普查可用硼砂美蓝染色，鉴定虫种及保存宜用吉氏液或苏木素染色。美蓝2g,硼砂3g,置研钵内，边研边加水，待溶解后冲洗入瓶中，加蒸馏水成原液，过滤后放置备用。染色时取原液5m!加清水配成5%稀释液，染3血膜呈天蓝色，然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。液由吉氏粉0. 5g，中性甘油25置染粉于研钵内，加少量甘油充分研磨，边研边加，至甘油加完为止，然后倾入100甲醉小量多次洗涤甘油染液倾入瓶内，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55为原液，放耸愈久染色效果愈佳，临用时稀释。将溶血后已干的血片用甲醇固定约后滴加10%染液(原液加清水稀释配成)染45蒸馏水轻轻冲洗。1. 液由明钒20g,蒸馏水; 木素结晶1油25成。将入一不盖紧的容器内，置于空气流通处，经2周至1个月使其充分氧化，过滤后加人封备用。血片溶血固定步骤同前。用上述染液染10- 200. 05%1 %稀盐酸脱色片刻，流水冲洗至血膜呈蓝色。1. 3血片镜检:将染色的血片在低倍显微镜下顺序逐个视野检查微丝坳并计数，根据微丝拗的大小、体态、折光性、有无鞘膜、表皮是否光滑及内部结构等特征，予以识别。在高倍镜下观察微丝蝴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、肛孔、尾核等结构。必要时需要用油镜作进一步鉴别。1. 宽比)体核尾核244均260)5. 30柔和，弯曲自然，无小弯较短(1:1)230(平均220)弯上有小弯较长(2:1)2微丝勤浓集法静脉血1血时间同1),置于盛有0. 48拘椽酸钠的离心管内，混匀后加蒸馏水8复摇匀，待红细胞溶解后经每分钟3 000转离心3去上液，加。. 05 氢氧化钠8住管口，用力振荡数次，放置5 - l 纤维蛋白凝块迅速溶5985一1995解，再离心，吸除上清液，将沉渣涂片，待干、染色、镜检已编号的直径25径5膜下垫一张同样大小经生理盐水润湿的滤纸。用注射器取静脉血1血时间同1)，加5%拘椽酸钠。入1000聚氧乙烯脂肪醇硫酸钠或可用2%吐温酸氢钠或10写聚氧乙烯脂肪醇硫酸钠(溶液9匀后，去针头，直接插入过滤器，缓慢推动注射器，使已溶血的血液通过滤膜，以l 启过滤器，取出薄膜，自然晾干后，置热苏木素中染色5洗，待干，镜检。膜积液、膜积液(或其他抽出液):直接涂片或用生理盐水稀释10倍离心后检查沉渣。液体蛋白含觉高而呈胶状易凝者，加抗凝剂后检查。2乳糜尿(或乳糜积液):取乳糜尿4乙醚2合振摇，使乳糜中脂肪充分溶解，弃去上层脂肪，加水稀释10倍后离心检查。巴结内成虫:将手术取出的结节，用大头针固定于木板或软木板上，分离结节周围组织，仔细将病变的淋巴管壁切开，分离内容物，取出干酪样脓样物检查。如于结节出现2周以后切除、解剖，则管内脓样物可能已纤维化。脓样物内含大量巨噬细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞及夏雷晶体。将干酪样物或纤维组织移至玻片上，加数滴生理盐水，然后用解剖针将外层组织分离，即可见被包围的成虫。时间较久者发生粘连，虫体成碎段，不易将虫体与组织分离，则可用一针将包围的组织固定，另一针将虫体沿其长轴向一端轻移，或将组织移至盛有生理盐水的培养皿中，使虫体半浮，较易分离。但如结节形成较久，则不易取得完整的成虫。成虫或虫段可保存于甘油酒精(70%酒精95油5供鉴定。下可疑的淋巴结、淋巴管结节或其他组织，用10%中性甲醛固定1至70%酒精中作病理切片。在切片中除可发现丝虫成虫外，尚可见到嗜酸粒细胞、网状内皮细胞、淋巴细胞、浆细胞、纤维母细胞、异物巨细胞、肉芽肿、假结核、纤维组织增生、淋巴管周围炎、管腔内肉芽组织增生形成栓塞或息肉状阻塞管腔等病理变化。在切片中所见结构清楚的雌虫体内的微丝坳体核清晰，所在淋巴管壁有少量浆细胞、淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润，而无纤维素沉积或肉芽肿形成者，则成虫可能为活虫。如虫体周围有较多的嗜酸粒细胞和散在的组织，虫体被炎细胞包绕形成肉芽肿，纤维化后形成纤维化结节，或结节内虫体已钙化，则均为死虫。如出现中性粒细胞浸润、渗出，内膜内皮细胞肿大、增生，则为继发性细菌感染。附录充件)马来丝虫感染期幼虫腹腔感染长爪沙鼠。6个月后，从感染鼠腹腔收集雌性成虫。用生理盐水洗涤2次，蒸馏水漂洗1次，包埋于3%基纤维素中，用冷冻切片机制成厚4 5一切片含4贴附于洁净的载玻片上，用丙酮固定，干燥保存于一20备用。2马来微丝坳断片抗原:从感染马来丝虫的长爪沙鼠腹腔液中收集马来微丝坳，用生理盐水)洗净。其悬液置冰格过夜，次日离心浓集，以甲醇固定，然后进行反复超声断碎，超声粉碎机输出功率不小于25W(每次30s，间隔303至微丝拗断片为长20100断片/滴)在洁净的载玻片七，经50左右热烘固定32血样:血清或滤纸血。集受检者的静脉血或末梢血，离心后收集血清。在低温下运送,4保存，- 20定量新华滤纸从受检者的耳垂或指尖取血，使血滴直径为1. 2量约201t(约相当血清10川)，编号、晾干后放入有干燥剂的塑料袋内低温保存。4203操作方法:受检血清用0,0. 0或1:20(每一1或。. 2。从冰箱取出抗原片，待复温后，湿育30次5后冷风吹干，滴加用上湿育，洗涤，以0. 01%伊文思蓝作背景染色2上洗涤，吹干。再加缓冲甘油(0)后筱以盖玻片在荧光显微镜下检查。对阳性反应的血样需连续作倍比稀释检测，直至阴性反应为正最后呈阳性反应的稀释度即为阳性终点滴度4反应标准虫体切面的荧光强度及荧光着色范围区分为4个等级:“一”虫体切面呈桔红色，无明显的黄绿色荧光;“十”一般亮度的黄绿色荧光，显色范围较局限;“+”中等亮度的劳绿色荧光，显色较广泛;“+十”明亮的黄绿色荧光，显色广泛。一般以1:20血样滴度时荧光反应强度呈十”及其以上者，判为阳性4. 2微丝蝴断片抗原，以微丝蝴断片的荧光强度及着色范围区分成4个等级:“一”微丝蝴断端呈模糊的淡黄绿色或红色:“+”断端呈黄绿色荧光，形似哑铃，反衬红色明显;“十+”+十+，断端和膜均呈明亮的黄绿色荧光。一般以1:10血样滴度时出现“+”及其以_二的荧光反应，判为阳性来丝虫成虫可溶性抗原，从感染马来丝虫长爪沙鼠的腹腔收集马来丝虫成虫。理盐水洗涤和蒸馏水漂洗后，置丙酮脱脂干燥，然后加。柳汞生理盐水研磨成匀浆虫体经生，冻融3天(每天2次)后件44天，超声粉碎后低温高速(7 心30清液即可溶性抗原。用分光光度仪测定235和280D)1)计算抗原蛋白量:X (mg/(:一X 0. 4一(6,0. 碳酸盐缓冲液将抗原按适宜的工作浓度(2)稀释、包被聚苯乙烯反应板，每孔加。. 34 2 温)洗涤3次，每次5干。受检血清(或滤纸千血滴)用稀释成1:200，每孔加。3样本加3孔，湿育2h，同上洗涤，甩干每孔加人。的辣根过氧化物酶标记羊抗人,同上湿育，洗涤，甩干。然后加底物溶液邻苯二胺40檬酸一磷酸盐缓冲液50馏水50氧化氢(H,O,)40后每孔加2硫酸(75径在分光光度仪上测量492每板均设阳性参考血清、阴性参考血清和空白对照孔。测得样品 (B 15985一19952. 2改良的间接适宜工作浓度用6的。. 05碳酸盐缓冲液稀释抗原，包被40孔聚苯乙烯反应板，每孔加。. 1过夜。次日倾去抗原液，用2 洗涤3次，每次5千。受检血样用稀释成1:200，每孔加。样本加2孔，置湿盒，37上洗涤，甩干。每孔加。稀释的辣根过氧化物酶标记羊抗人上湿育，洗涤，甩干。然后加底物溶液0. 1上湿育后加2硫酸(25专用酶标检测仪(以定492(或490)板设阳性参考血清，阴性参考血清和样品的以同板的阳性参考血清正样品 (以上健康人的血清，求其以常为。当样品以样品)和阴性参考血清)的比值P/N)2者为阳性。 2磷酸盐缓冲液a. 2 15.6 ml,b. 12H,0 35. 823mL,770缓冲甘油5份甘油(一级)和1份。. 0)混匀后冰箱保存(无气泡)。碳酸盐缓冲液 15. 9 2. 93 00 温 . 2 12H,O 2. 9 0. 2 . 5 r.,用前加蒸馏水至1 000 磷酸盐一柠檬酸缓冲液底物溶液0. 1. 041 g/L) 25. 7 2 ) 24.3 氧化氢( 40 15985一1995附录考件)体、阴囊、女性乳房)应用消炎镇痛药，急性症状缓解后停药对下肢急性淋巴结、淋巴管炎(流火)患者，如能于发作预兆期服消炎镇痛药，可明显减轻急性症状或制止发作。合并细菌感染者需给予抗菌治疗。皮肿烘绑疗法:对患肢采用辐射热或微波透热烘疗后用弹性绷带包扎。每天1次，前者每次1h,2。次为一疗程，休息半个月，进行下一疗程;后者每次305次为一疗程，休息2个月，进行下一疗程。在烘疗和休息期间，白天均需用弹性绷带持续包扎患肢，治疗2有足癣的患者