GB 15998-1995 百日咳诊断标准及处理原则

5998一1995前言百日咳是百日咳杆菌引起的呼吸道传染病，传染性强，在婴幼儿中有很高的病死率。临床表现以阵发性痉挛性咳嗽和痉咳终止时出现鸡鸣样吸气吼声为特征，多见于儿童，病程可达2标准在制定过程中，参考了1989年卫生部制定的中华人民共和国传染病防治法及中华人民共和国传染病防治法实施办法中的诊断标准，尽量结合我国百日咳的流行病学，临床实践与各地情况，以便易于实施和应用。本标准附录标准附录标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准起草单位:中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所、北京市地坛医院、首都儿科研究所。本标准主要起草人:张荣珍、杨立信、王树山。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。中华人民共和国国家标准百日咳诊断标准及处理原则5998一1995of 标准适用于各级、各类医疗、卫生、保健机构和人员对百日咳病人的诊断、报告和处理。2诊断原则应根据流行病学资料及临床表现做出临床诊断，确诊需要百日咳杆菌培养阳性或者检测抗百日咳菌特异性抗体。该地区有百日咳流行。咳嗽后伴有呕吐，严重者有结膜下出血或舌系带溃疡者。无典型痉咳。排除其他原因者。3. 巴细胞占50%以上。附录A,附录B,四项中任何一项，临床诊断病例疑似病例加3. 3. 1,3. 3,d，或至痉挛性咳嗽出现后隔离30 d。接触者观察21 d,国家技术监督局1995一12一15批准1996一07一01实施易感儿童实行百白破三联混合制剂接种，是预防本病的重要措施。国内外的研究表明，百日咳菌苗的预防效果是肯定的。按我国现行的免疫程序，儿童出生后第3个月开始初免，全程免疫3针，保护率可达90%B 15998一1995附录A(标准的附录)百日咳病原学诊断方法l. 1标本的采集在病人咳嗽时，将包一姜(氏培养平板打开放在病人口前10 接收集病人咳出的飞沫。然后盖好平皿盖送检。平皿暴露时间以15l. 1. 2鼻咽试子由于百日咳多发于儿童，所以采样时，病儿的头部斜依于母亲的胸怀，母亲以双手固定病儿的头部，医师以右手执棉拭子，左手按病人的头顶部，使顶端稍向下弯的棉拭子自前鼻孔进入，沿下鼻道的底部向后缓缓深人，由于鼻道呈弧形，不可用力过猛，以免发生外伤出血。待棉拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，将棉拭子稍留片刻，以待反射性咳嗽，然后轻轻旋转一周，缓缓取出棉拭子。2接种和菌种检定体长。0 l. 养3-4 白色，表面光滑，中央突起，边缘整齐，具有珍珠般的光泽，菌落周围有弥散性溶血环。发酵任何碳水化合物，不液化明胶，不产生硫化氢，不形成还原硝酸盐，不利用构椽酸盐，氧化酶阴性，70%以上菌株触酶阳性。不产生尿素酶和苯丙氨酸脱氨酶。百日咳杆菌新分离菌株有英膜，毒力强，菌落光滑，称为1相菌。百日咳杆菌有6种凝集因子，1,2,3因子是主要的，籍此又可将工相菌分为三种血清型:。血清型具相对稳定性，但可发生变异。血清型不仅在自然感染，在人工传代培养过程中也可发生变异。只家兔或豚鼠可同时试验数个菌株。2将培养4048 血包一姜二氏培养基上的菌苔，混悬于缓冲盐水或生理盐水中。定浓度。 10a/ 2. 5试验前一天将健康家兔或豚鼠先行脱毛。6注射前用75%酒精消毒，再用小试管蘸色素印在脊柱两侧、每只家兔可试验4个菌株。 1 针时要在皮内稍稍扭转以免菌液流出。72 量坏死的大小。如两只家兔有一只注射4射部5998一1995位出现坏死即为阳性。接法)此来浸染固定在玻片上的未知细菌，若为相应细菌，则两者结合面留在玻片上，不被缓冲液所冲掉。在荧光显微镜下有荧光出现。2.，荧光抗体用前按说明书要求以3磷酸盐缓冲盐水进行稀释，4冰箱保存备用。3磷酸盐缓冲盐水氯化钠8.5 07 39 00 82 油缓冲液(90 mL 2磷酸盐缓冲液)，镜油可用液体石蜡代替。3方法小约1 火焰固定，用蜡笔将标本圈起。湿盒，放37滴管吸取3-5 依次浸人盛有磷酸盐缓冲液三个缸中浸泡，每缸3-5 不时振荡。载、镜检。3. 5为使结果正确，还需作以下对照:a)标本阴性对照:标本不加荧光抗体只加磷酸盐缓冲盐水。b)阳性对照:荧光抗体加在已知阳性菌株标本上。c)封闭试验:将标本先加未标记的同样抗血清作用30 分洗涤后再加标记抗体染色，若是阳性标本，应无特异荧光。d)标本加正常未免疫的标记抗体，结果应无特异荧光。+:菌体显著膨大，黑心清楚，荧光明亮。+:菌体膨大，黑心清楚，荧光明亮。+:菌体稍膨大，形态清晰，有黑心，荧光较弱。+:菌体不膨大，形态不清楚，荧光微弱。一:细菌无荧光。菌荧光在“+”以上，在片上可看到分散或成堆出现形态典型的细菌。阳性对照“+”，阴性对照为阴性。5998一1995附录B(提示的附录)百日咳血清学诊断方法量法)血球及其他颗粒性抗原，加入含有特异性抗体的血清，在有适当的电解质存在时，经一定时间作用后，可出现肉眼可见的凝集团块，利用这种现象进行已知抗原定量测定相应抗体或已知抗体测定抗原等方法就是定量凝集试验。2 800,液浓度定为2 X 10/离出血清后进行测定。 0 1. 3试验方法取待检血清0. 1 4 释成5倍，然后依次倍比稀释即为1:10,1:20,1:40,1 : 80,1 : 16。等，每管0. 25 加入2 X 10/管。分摇匀置35日取出后，室温放置1次试验时要设阴性对照管，即百日咳菌液加生理盐水，设阳性对照管，用一排试管，采用百日咳工相标准血清，按已知效价进行稀释，然后每管加入百日咳菌液和试验组相同条件观察结果。管内液体混浊，少量凝集块沉于管底。+:管内液体半澄清，部分凝块沉于管底。+:管内液体不完全澄清，凝集块全部沉于管底。+:管内液体完全澄清，凝集块全部沉于管底。若恢复期抗体滴度比急性期增高4倍以上对确诊病例很有意义。凝板法)2 液浓度为385%生理盐水。 5998一19958排X 2. 1取标准血清0. 1 释成100倍。2在1孔不加盐水，第2孔至第1。孔分别加入。水，第12孔也加入。2. 3用微量加样器向第1孔及第2孔各加。稀释的标准血清。2. 4用多孔道加样器从第2孔开始倍比稀释至第10孔2. 5将稀释好的血清每孔加入每毫升含3体的菌液。2. 2. 6用微量振荡器振荡3-5 2. 7将血凝板放入下面垫