希森美康血球分析仪kx-21标准操作规程

血常规检验 一、 【检验方法】： KX21 血细胞分析仪 二、 【原理及意义】： （一）Hb 1、原理： 红细胞被溶血素溶解，释放出血红蛋白，血红蛋白被 SLS 的亲水性的烷基部分所改变， 由亚铁血红蛋白形态转变为高铁血红蛋白形态，形成 SLS-Hb 的正铁血红蛋白化合物，在 555nm 处有吸收峰，通过仪器内部的比色系统比色，可以测定 Hb 的浓度。该方法利用了氧 化血红蛋白法和氰化血红蛋白法的优点。一方面，SLS-Hb 法具有和氧化血红蛋白法一样的 检测快速、无毒性成分的优点；另一方面也具有氰化血红蛋白法检测结果精确、重复性好 的特点。 （二）RBC、MCV 、MCH、MCHC 、HCT、RDW-CV、RDW-SD 1、原理： 血液被稀释液稀释后，细胞一个一个通过狭缝，狭缝内外是有直流电的电解质环境，当 细胞通过时会引起瞬时的电位变化，形成电脉冲，电脉冲的个数反应细胞的个数，大小反 应细胞的大小。细胞体积在一定范围内划为红细胞；在某个范围划为血小板。同时通过仪 器内部的数据分析系统换算出 MCV、MCH、MCHC 、 Hct 和统计学处理得出 RDW- CV、RDW-SD 分析数据。 （三）WBC 计数、及其分类 1、原理（电阻检测法）： 仪器吸取样本，用一定量的试剂和稀释液稀释后，在溶解剂(STROMATOLYZER-3WP )用下 消除红细胞基质，让白细胞一个个依次通过计数池的微孔，利用细胞通过微孔时瞬间的电 阻变化产生脉冲电流而计数。脉冲信号经放大、甄别后，微机处理数据得到其体积分布直 方图。 淋巴细胞群为：35-90fl 中间细胞群为：90-160fl 粒细胞 群 为：160-300fl 三、 【试剂品牌】： 1、稀释液： CELLPACK(PK-30L) 氯化钠 6.38g/L 硼酸 1.0g/L 四硼酸钠 0.2g/L EDTA-2K 0.2g/L 2、Hb 溶血素：SULFOLYSER (SLS-200A) 月桂洗硫酸钠 1.7g/L 3、白细胞溶解剂：STROMATOLYZER-3WP 4、清洗液：CELLCLEAN STACCLEANER-SYS 次氯酸盐 5% 5、抗凝剂： K EDTA2H O（1.5-2.2mg 每毫升血液）22 四、 【仪器】： KX21N 血细胞分析仪 五、 【操作步骤】： 开机： 1. 插上电源，打开 KX21 血细胞分析仪电源开关 2. 仪器进入自动检测系统，自动检测各系统参数，同时测定本底参数。 3. 当仪器显示窗口出现“Ready No:1“，说明仪器处于待测标本状态，可以正常测定血 常规标本。 4. 打开电脑和打印机，连接数据接口。 关机： 1. 仪器使用完毕，按“Shut Down”键。 2. 将仪器测试针插入专用清洗液中，按开始键，当停止吸液时移去清洗液。自动血细胞计 数仪进入自动冲洗状态，当自动血细胞仪显示窗口出现“Turn Power OFF”时可以安全 关机，关闭仪器开关，关闭电脑。 文件编号：jsb050601 第 页 共 10 页 康瑞达医学科技有限公司 技术部 第 2 版 第 2 次修改 主题：血常规 颁布日期： 2005 年 03 月 01 日 主任： 质控负责人 ： 血细胞分析仪的保养（每周一次） 1. 按“Select”键，用上下移动键选择 Maintenance 项，按“ENTER”键。 2. 再键“上下”移动键选择“Rinsing”项，按“ ENTER”键。 3. 在 “RBC”和“WBC ”计数池中各加 1 毫升专用清洁液，按“1”键 4. 仪器自动清洁保养，全过程约需 5 分钟。 5. 仪器表面需经常擦洗，保持仪器整体清洁。 每日质控 在每天样本检测前，取质控品及临检中心质控品进行检测，并做好登记。若检测结果均在 范围内，则可进行样本检测，若有失控出现，则需重新定标。 六、 【参考范围】： 1(1)白细胞(WBC)计数： 成人(4 10)10 9/L 儿童(5 -12) 10 9/L 新生儿(15-20) 10 9/L (2)白细胞分类(成人)：中性粒细胞 50-70% 淋巴细胞 20-40% 嗜酸性粒细胞 0.5-5% 嗜碱性粒细胞 0-1% 单核细胞 3-8% 2 红细胞(RBC)：男(4-5.5) 10 12/L 女(3.5-5) 10 12/L 新生儿(6-7) 10 12/L 3血红蛋白(HGB)：男 120-160g/L 女 110-150g/L 新生儿 170-200g/L 4血小板(PLT)：(100-300) 10 9/L 5血球压积(HCT)：男 0.42-0.49 L/L 女 0.37-0.43 L/L 6平均红细胞体积(MCV)：82-95fl 每升血液中血细胞比容（L/L）10 15 MCV（fl）= 每升血液中红细胞总数 7平均红细胞血红蛋白含量(MCH)：27-31pg 每升血液中血红蛋白浓度（g/L） MCH （g/L）= 每升血液中红细胞总数 8平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)：320-360g/L 9RDW-CV、RDW-SD： RDW-CV：11.6%-14.0%； RDW-SD：39.0-46.0fL。 10PDW（15.05-18.1）% MPV(9.4-12.5)fl； P-LCR(13-43)。 七、 【临床意义】： 1白细胞 （1） 白细胞计数 生理性增加 新生儿、运动、饭后、冷水浴后、疼痛、月经期、受寒、妊娠、分娩、 阵发性心动过速、阳光或紫外光照射、抽搐、恶心、呕吐、麻醉等。 病理性增加 类白血病、白血病、急性化脓性细菌感染、急性溶血、急性失血、单核 细胞增多症、淋巴细胞增多症、真性红细胞增多症、腮腺炎、病毒性肝炎、淋巴瘤、组 织坏死、手术后、肿瘤转移、药物中毒、代谢性酸中毒、过敏等。 每升血液中血红蛋白浓度（g/L）MCHC （g/L） = 升血液中血细胞比容（L/L） 文件编号：jsb050601 第 页 共 10 页 康瑞达医学科技有限公司 技术部 第 2 版 第 2 次修改 主题：血常规 颁布日期： 2005 年 03 月 01 日 主任： 质控负责人 ： 减少 伤寒、副伤寒、斑疹伤寒、兔热病、布鲁杆菌热、流感、麻疹、风疹、革登热、 传染性肝炎（亦可增多） 、疟疾、过敏性休克、系统性红斑狼疮、粟粒性结核、败血症、 重症细菌感染、恶液质、放射治疗、肿瘤化疗。恶性贫血、非白细胞性贫血、再生障碍 性贫血、脾功能亢进、戈谢病、Felty 综合症、Che diak-Higashi 综合症、阵发性睡眠 性血红蛋白尿症等。 （2） 白细胞分类计数：见下表 各种白细胞增多、减少的临床意义 细胞类别 增多 减少 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞 类白血病、白血病、化脓性细胞感 染、溶血性贫血、急性出血、急性 溶血、手术后、恶性肿瘤、组织损 伤、皮肤病、真性红细胞增多症、 脾切除术后。 参见嗜酸性粒细胞计数 慢粒、何杰金病、癌转移、铅和铋 中毒等。 百日咳、传染性单核细胞增多症、 淋巴细胞性白血病、传染淋巴细胞 增多症、病毒性肝炎、弓形虫病 单核细胞性白血病、系统性红斑狼 疮、亚急性细菌性心内膜炎、活动 性结核、急性感染恢复期、原虫感 染 伤寒、副伤寒、流感、麻疹、再生 障碍性贫血、黑热病、病毒感染、 原虫感染、病毒性肝炎、脾功能亢 进、贫血、原 发 性 中 性 粒 细 胞 减 少 症 、 肝 硬 化 急性感染、粟粒性结核、晚期肿瘤、 艾滋病、伴 T 淋巴细胞减少的免性 缺陷 使用皮质类固醇激素、再生障碍性 贫血、多毛细胞白血病. 2 红细胞(RBC)： 生理性减少 见于妊娠中后期、6 个月至 2 岁的婴儿等。 病理性减少 造血原料不足、造血功能障碍、红细胞破坏过多或失血所引起的各种贫 血。 相对性增多 主要因血浆容量减少所致，见于脱水、呕吐、腹泻、多尿、多汗、大面 积烧伤、吸烟、高血压、肥胖等。 代偿性增多 主要见于缺氧、新生儿、高原环境、CO 中毒、严重肺气肿、肺源性心脏 病、先天性心脏病、心衰等。 绝对性增多 克隆性真性红细胞增多；非隆性红细胞增多，与促红细胞生成素产生过 多有关，见于肾癌、肝细胞癌、雄激素分泌细胞肿瘤、肾囊肿、肾盂积水、肾移植、小 脑血管瘤、子宫肌瘤。 3、血红蛋白(Hb)： 生理性增加：新生儿、高原居住者。 病理性增加：真性红细胞增多症、代偿性红细胞增多症（如先天性青紫性心脏病、慢 性肺性疾病、脱水） 。 减少：各种贫血、白血病、产后、手术后、大量失血。 4红细胞比积(HCT) ：与红细胞计数、血红蛋白测定的意义类同。 5血小板(PLT)： （1） 生理性 正常人血小板在一天内可有 6%-10%变化；表现为早晨低，午后较高； 春季低，冬季略高；平原较低，高原较高；静脉血比毛细血管血高 10%；月经前低，后 升高；妊娠中晚期升高，分娩后减低；运动后升高，休息后恢复。 （2） 病理性 减少：除创伤之外，血小板减少是引起出血的常见原因。常见疾病有：、血小板生成 障碍，如急性白血病、再生障碍性贫血；、血小板破坏过多，如 ITP、脾功能亢进， 系统性红斑狼疮；、血小板消耗过多，如 DIC、血栓性血小板减少性紫癜。 增多（血小板大于 400109/L）：、骨髓增生性疾病：慢性粒细胞白血病，真性红细 胞增多症；、原发性血小板增多症；、急性大出血，急性溶血，急性化脓性感染； 、脾切除手术后。 6MCV、MCH、MCHC 文件编号：jsb050601 第 页 共 10 页 康瑞达医学科技有限公司 技术部 第 2 版 第 2 次修改 主题：血常规 颁布日期： 2005 年 03 月 01 日 主任： 质控负责人 ： 主要用于贫血的形态学分类，见下表: 贫血的形态学分类 MCV（fL） MCH（pg） MCHC（g/L） 大红细胞性贫血 正红细胞性贫血 单纯小细胞性贫血 小细胞低色素性贫血 100-160 80-100 72-80 50-80 35-50 27-35 21-26 12-30 310-370 310-370 300-370 240-300 7RDW-CV、RDW-SD： (1)用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察，缺铁性贫血时 RDW 增大，经治疗后可恢复正常。 (2)用于小细胞低色素性贫血的鉴别，缺铁性贫血时 RDW 增大，而轻型珠蛋白生 成障 碍性贫血时 RDW 正常。 (3)RDW 与 MCV 结合可将贫血分为 6 种。小细胞均一性：MCV 下降，RDW 正常，如轻型 珠蛋白生成障碍性贫血。 小细胞不均一性：MCV 下降，RDW 增大，如缺铁性贫血。 正常细胞均一性：MCV、RDW 均正常，如某些慢性疾病。 正常细胞不均一性：MCV 正 常，RDW 增大，如早期缺铁性贫血。大细胞均一性：MCV 增大，RDW 正常，如再生障 碍性贫血。大细胞不均一性：MCV、RDW 均增大，如巨幼细胞性贫血。 8MPV、PDW、P-LCR： MPV 其临床意义要结合 PLT 的变化才有价值。、鉴别血小板减少的原因：当骨髓 造血功能损伤致血小板减少时，MPV 减少；当血小板在周围血液中破坏增多时，导致血 小板减少，MPV 增大；血小板分布异常致血小板减少时，MPC 正常。、MPV 增大可作 为骨髓造血功能恢复的较早期指征：骨髓造血功能衰竭时，MPV 与 PLT 同时持续下降； 造血功能抑制越严重，MPV 越小；当造血功能恢复时，MPV 增大常先于 PLT 升高。、 其它：MPV 增大见于骨髓纤维化、ITP、血栓性疾病及血栓前状态、脾切除、慢粒、巨 大血小板综合症、镰刀细胞性贫血；MPV 减小见于脾亢、化疗后、AA、巨幼细胞性贫血 等。 PDW 是反映血小板体积大小的异质性参数，增大见于急淋化疗后、巨幼细胞性贫血、 脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、血栓性疾病等；可用于鉴别原发性血小板增多症和 反应性血小板增多症，前者 PDW 增加，后者 PDW 正常。 P-LCR 代表血小板计数中体积 12fL 的血小板的比值或数量，有助于识别堆集血小 板、大血小板和细胞碎片，并可监测骨髓的造血功能。 八、 【标本采集】： 随机采 取 病 人 静 脉 血 ， 用 40g/L EDTA-K2 抗 凝 (50ul 抗 凝 1ml 血 ， 相 当 于 2mgEDTAK2/1ml 血 )。 九、 【注意事项】： 1、血细胞计数应用 EDTA-K2为抗凝剂，用量为 EDTA-K2*2H2O1.52.0mg 可抗凝 1ml 血， 不能用肝素或枸橼酸钠等抗凝剂。 2、采集后在室温中贮存不应超出 6h；如需制用血涂片应在 2h 内完成。 3、测定前抗凝血应充混匀，任何小凝块或血小板聚集均会影响血细胞计数。 4、注意病理因素对血液分析仪使用的影响，特别是各系统的报警提示。如是否有大血 小板对血小板计数的影响；有无有核红细胞对白细胞计数的影响等等。 5、如有冷凝集现象，将血置 37水浴箱 10min 后立即测试。 十、 【质量控制】： 1每日工作开始应先做 sysmex 质控或临床检验中心的全血质控品， 。 2出现失控，应校正后并重做质控，直至符合质控要求。 3按要求做好仪器校正和仪器对比工作。 4做好质控、失控和校正登记。 十一、 【报告复查】：对以下情况的样本进行复查(仪器及手工)； (1) 白细胞低于 3.0109/L； (2) 红细胞数与血红蛋白明显不符； (3) 血小板低于 50109/L； (4) 白细胞分类时，中间细胞15%，以及机器未能分出的样本需手工分类。 文件编号：jsb050601 第 页 共 10 页 康瑞达医学科技有限公司 技术部 第 2 版 第 2 次修改 主题：血常规 颁布日期： 2005 年 03 月 01 日 主任： 质控负责人 ： 白细胞计数: 原理：血液经稀酸溶液稀释后，红细胞被破坏，放入血细胞计数池内，置显微镜下计数， 求得每微升中的白细胞数。 试剂： 冰醋酸 10ml 蒸馏水 加至 500ml 10g/L 美蓝 3 滴 器材：20 微升吸管，血细胞计数板，显微镜。 操作：加计数试剂 0.38ml 于小试管内，取血 20 微升吹入试剂，混匀。静置 1-2 分钟。低倍 计数，计数 4 角得 4 大方格，计数总数乘以 50 即为白细胞/微升。 血小板计数: 原理： 血液用血小板计数试剂稀释后，在显微镜下计数。 试剂 1. 草酸铵稀释液 草酸铵 1.0g，乙二胺四乙酸二钠 0.014g,40%甲醛溶液 0.1ml 加水至 100ml，加亚甲蓝少许，过滤后置冰箱备用。 2. 许汝和稀释液 尿素 9g，乙二胺四乙酸二钠 0.5g，巴比妥钠 0.3g，加蒸馏水水至 100ml，过滤后置冰箱备用。 3. Barr 稀释液 白皂素 0.25g，枸橼酸钠 3.5g，煌焦油蓝 0.1g，40%甲醛溶液 1.0ml，加水 至 100ml，过滤后置冰箱备用。 操作 1. 选上述任一试剂（本科室用 2 液） ，每管加 0.38ml，加入全血 20 微升，充分混匀