GB 29685-2013 食品安全国家标准 动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素多残留的测定 气相色谱—质谱法

  G 中华人民共和国 国 家标准  9685 2013 食品安全国家标准  动物性食品中林可霉素 、克林霉素 和大观霉素多残留 的测定  气相色谱 质谱法  in 013布  2014施  中华人民共和国农业部  中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会  发布  I 目   次  目   次  . I 前   言  . 物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素多残留的测定  气相色谱 .  .  2 规范性引用文件  .  3 原理  .  4 试剂和材料  .  5 仪器和设备  .  6 试料的制备与保存  .  料 的制备  .  料的保存  .  7 测定步骤  .  准曲线的制备  .  取  .  化  .  定  .  白实验  .  8 结果计算与表述  .  9 检测方法灵敏度、准确度、精密度  .  敏度  .  确度  .  密度  .  附录  A .     言  本标准的附录 A 为资料性附录。  本标准系国内首次发布的国家标准。    动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素多残留 的测定  气相色谱 质谱法  本标准规定了动物性食品中林可霉素、克林霉素和大观霉素残留 量 检测的制样和气相色谱  本标准适用于 猪 、牛和鸡的肌肉和 肾脏 以及牛奶和 鸡蛋中 林可霉素、克林霉素和大观霉素单个或多个药物残留量 的 检测。  2 规范性引用文件  下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其 随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或 修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。   准化工作导则  第 1 部分：标准的结构和编写规则   6682 分析实验室用水规格和试验方法  3 原理  试料 中残留的林可霉素、克林霉素和大观霉素， 用磷酸缓冲液提取， 3三氯乙酸沉淀蛋白，离子对原理反相 净化， N,甲基硅烷基）三氟乙酰胺 衍生， 气相色谱 标法定量 。  4 试剂和材料  以下所用的试剂，除特别注明外均为 分 析 纯试剂，水为符合  6682 规定的一级水。  酸 林可霉素 标准品 ： 含量 99 ； 盐酸 克林霉素 和盐酸 大观霉素标准品 ： 含量 95 。  N,甲基硅烷基）三氟乙酰胺  乙酸 ：优级纯。  甲醇 ：色谱纯。  乙睛 ：色谱纯。  正己烷 ：色谱纯。  磷酸二氢钾 ：优级纯。  磷酸 ：优级纯。    氢氧化钾 ：优级纯。  三氯乙酸 ：优级纯。  十二烷基磺酸钠 ：色谱纯。  相萃取 柱 ： 60  或 相当者 。  提取液  ： 取磷酸二氢钾 g， 用 水溶解并稀释至 1 000 用 磷酸调节   3三氯乙酸溶液 ： 取三氯乙酸 3.0 g，用水溶解并 稀释 至 100  2 氢氧化钾溶液 ： 取氢氧化钾 11.6 g， 用 水溶解并 稀释 至 100  十二烷基磺酸钠溶液 ： 取十二烷基磺酸钠 g，用水溶解 并稀释 至 50  十二烷基磺酸钠缓冲液 ： 取十二烷基磺酸钠 g， 用水溶解，加 乙酸 1 用水稀释 至 500  1 mg/可霉素、克林霉素 和 大观霉素 标准贮备液 ： 精密 称取林可霉素、克林霉素 和 大观霉素标准品 各 10 别 于 10 瓶中，用甲醇溶解 并 稀释至刻度 ， 配 制成 浓度为 1 mg/ 林可霉素、克林霉素 和 大观霉素 标准 贮备液。 2 8 避光保存，有效期 6 个月。  100 g/ 精密量取 1 mg/林霉素和大观霉素标准贮备液 各 1.0 别于 10 瓶中， 用甲醇稀释 至刻度，配制 成 浓度为 100 g/ 林可霉素、克林霉素 和 大观霉素 标准工作液 。 2 8 避光保存 ，有效期 1 周。  5 仪器和设备  相色谱 配  。  析天平 ： 感量 1 g。  平 ： 感量 g。  冻高速离心机  热恒温水浴锅  涡混合器  质机  四氟乙烯离心管 ： 50  6 试料的制备与保存  料 的制备  、牛 和 鸡的肌肉、肝脏和肾脏 组织  取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎 ， 并使 均 质。   取均质后的供试样品，作为供试试料 。   取 均质后的空白样品，作为空白试料。   取 均质后的 空白样品 ， 添加适宜浓度 的 标准 工作 液 ， 作为空白添加试料。  奶 和 鸡蛋    取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶 和 鸡蛋，混合 ， 并使 均 质 。   取均质后的供试样品，作为供试试料 。   取 均质后的空白样品，作为空白试料。   取 均质后的空白样品 ， 添加适宜浓度 的 标准 工作 液 ， 作为空白添加试料。  料 的保存  组织 试料 以下 保存 。鸡蛋 和 牛奶 试料 2 8 以下 保存 。  7 测定步骤  质匹配 标准曲线的制备  分别 精密量取 100 g/可霉素、克林霉素和大观霉素标准 工作 液适量，用甲醇稀释 ，配制 成浓度为 50、 100、 200、 400、 800、 1 600 和 3 200 g/L 的系列 混合 标准 溶 液，各 取 分别溶解经 提取、净化及吹干 的 空白试料 残余物，充分混匀， 室温吹干，加 N,甲基硅烷基）三氟乙酰胺 500 L 和乙腈 100 L，涡旋混合 1 封， 于 75 恒 温箱 衍生反应 1 h， 于 室温 氮气吹干，加正己烷 0.5 解残余物 ，涡旋 混匀 ，供气相色谱 定 。 以 测 得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。  取  肉 和 肾脏 组织  称取试料 （ 5g， 于 50 四氟乙烯离心管中，加提取液 10 荡 5 5 000 r/0  上清液 于另一离心管中 ， 残渣中加 提取液 10 重复提取一次 ， 合并 两次 上清液，加 3三氯乙酸溶液 5 混匀， 8 000 r/心 10  上清液 ， 用 2  氢氧化钾溶液调 十二烷基磺酸钠溶液 2 涡混匀 ， 静置 15 用。  奶 和 鸡蛋 组织  称取 试料（ 5g， 于 50 四氟乙烯离心管中，加 提取液 10 振荡 5 5 000 r/0  上清液 于另一离心管中 ， 残渣中加 提取液 10 重复提取一次 ， 合并 两次 上清液，加 正己烷 5 混匀， 5 000 r/心 15 取下层液， 用 2  氢氧化钾溶液调  十二烷基磺酸钠溶液 2 涡混匀 ， 静置 15 用。  化  依次用甲醇 3  3  十二烷 基 磺酸钠缓冲液 3 化 ，取备用液过柱，用水 淋洗两次， 每次 3  甲醇 4 脱，收集洗脱液， 于 40 水浴 氮气吹 至近干 ，室温 吹干 ， 加 N,甲基硅烷基）三氟乙酰胺 500 L 和乙腈 100 L，涡旋混合 1 封， 于 75 恒 温箱 衍生反  应 1 h，室温氮气吹干， 用 正己烷 0.5 解残余物 ，涡旋混 匀 ，供气相色谱 定 。  定  谱条件  色谱柱：毛细管色谱柱 5%苯基甲基聚硅氧烷）， （ 30 m  或相当者 ；  进样口温度： 280 ；  进样方式：  不分流 ；  进样体积： 1 L；  模式：  恒流 ；  载气：氦气（  ；  柱流速： 1 mL/ 柱温升温程序 ：  表 1 柱温升温程序  起始温度    终止温度    升温速率   /持时间  时间  50 150 150 300  20 0  质谱条件  离子源温度： 200  接口温度： 280  质谱采集（ 林可霉素和克林霉素扫描离子： 126（定量离子）， 127， 73 大观霉素扫描离子： 145（定量离子）， 171， 187， 201 定法  性测定  通过样品色谱图的保留时间与标准品的保留时间、 各色谱峰的特征离子与相应浓度标准品各色谱峰的特征离子相对照定性。样品与标准品的保留时间的相对偏差不大于 5；样品特征离子的相对丰度 与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 2 的规定，则可判断样品中存在相应的被测物 。  表 2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差  相对离子丰度  50% 20%至 50% 10%至 20% 10% 允许的相对偏差  10% 15% 20% 50% 将供试试样和标准溶液的定量离子面积之比作单点校正定量。  量测定  取试样溶液和 标准溶液 ，按外 标法 ，以峰面积 定量，标准 溶 液及试样 溶 液中 林可霉素、克林霉素和大观霉素 响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱 林可霉素、克林霉素和大观  霉素 标准溶液和 空白 添加 试样溶液 中特征离子质量色谱图 见附录 A。  白实验  除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。  8 结果计算与表述  单点校准：  或基质匹配标准曲线校准：由 b，  求得 a和 b，则  试料中 林可霉素、克林霉素和大观霉素 的残留 量 （ g/， 按下式计算：   式中：  X 供试试料 中 相应的 林可霉素、克林霉素或大观霉素 的残留量 ， g/     标准溶液中 相应的 林可霉素、克林霉素或大观霉素 浓度 ， g /L；                   C 供试试料 溶液中 相应的 林可霉素、克林霉素或大观霉素 浓度 ， g /L；                            标准溶液中 相应的 林可霉素、克林霉素或大观霉素 的衍生物的峰面积；  A 供试试料溶液中 相应的 林可霉素、克林霉素或大观霉素 的衍生物的峰面积；                             V 溶解 残余物 体积 ，               m 供试试料质量 ， g。      注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。  9 检测方法灵敏度、准确度、精密度  敏度  本方法 的检测限， 林可霉素 和 克林霉素 为 15 g/观霉素为 25 g/ 本方法 林可霉素 和 克林霉素在肌肉、牛奶 和 鸡蛋中 的定量限为 20 g/肾脏中定量限为 50 g/大观霉素 的定量限 为 50 g/ 确度  本方法 克林霉素 在 20 200 g/可霉素 在 20 3 000 g/ 大观霉素 在 50 4 000 g/加浓度 水平上 回收率 为 70% 110%。                         &nb