血管性痴呆与MTHFR基因多态性及血浆Hcy浓度的相关研究

学校代码学号或申请号10459201322453720密级公开专业硕士学位论文血管性痴呆与MTHFR基因多态性及血浆Hcy浓度的相关研究作者姓导师姓名：弓园芳名：陈淅泠教授专业学位名称：神经病学培养院完成时系：郑州大学第二临床学院间：2016年05月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterCorrelationofHomocysteineConcentrationandMTHFRGenePolymorphismwithVascularDementiaByYuanfangGongSupervisor:Prof.XilingChenDepartmentofNeurologyTheSecondClinicalCollegeofZhengzhouUniversityMay,2016血管性痴呆与MTHFR基因多态性及血浆Hcy浓度的相关研究研究生弓园芳导师陈淅泠郑州大学第二临床学院神经病学河南郑州450014摘要背景和目的血管性痴呆（Vasculardementia,VaD）是由各种脑血管病引起的，伴有持久的认知损害及智能障碍的一种综合征，呈慢性进展，是阿尔茨海默病（Alzheimersdisease,AD）后第二个最常见的痴呆类型，我国VaD患病率为1.1%3.0%。VaD不但增加患者死亡风险的发生，而且降低患者的生活质量，增加卫生经济的付出，给家庭和社会带来沉重的负担，因此近年来VaD逐渐成为学者们研究的热点。VaD的危险因素和脑卒中相关，即年龄、性别、种族、吸烟、动脉粥样硬化性血管疾病、高血压、糖尿病、心房颤动和高胆固醇血症等。VaD的发生不仅和脑血管疾病直接相关，也可受遗传和环境因素的影响。临床研究及流行病学调查发现高同型半胱氨酸血症（hyperhomocysteinemia,HHcy）可能是促使动脉粥样硬化性血管病发生的一个新的独立危险因素，脑血管疾病的预后和其有关，影响患者的认知能力，进而发展为VaD。N5,N10-亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR）是同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）代谢过程中的限速酶，其C677T位点突变引起酶活性降低，Hcy代谢通路受阻，产生高Hcy血症，但目前对VaD的发病相关因素尚未完全阐明。本文旨在对VaD和血浆Hcy及MTHFR基因C677T位点突变进行相关的分析探究，以阐明VaD的病因及发病相关影响因素，为VaD的预防及治疗提供依据。I方法研究对象为73例VaD患者和75例非痴呆脑梗死患者，应用酶循环法测定Hcy浓度，应用免疫分析法检测维生素B12和叶酸水平，采用PCR-芯片杂交法测定MTHFR的基因类型，使用简易精神状态检查量表（mini-mentalstateexamination,MMSE）对73例VaD患者进行痴呆严重程度的评定。结果1.VaD组MTHFR基因纯合子突变（TT）和杂合子突变（CT）发生率（76.71）显著高于非痴呆脑梗死组（69.33,P0.05），VaD组T等位基因频率（60.27）也显著高于非痴呆脑梗死组（45.33,P0.05）。2.VaD组血浆Hcy水平显著高于非痴呆脑梗死组（P0.001），叶酸水平显著低于非痴呆脑梗死组（P0.001），维生素B12水平显著低于非痴呆脑梗死组（P0.05）。3.VaD患者中度及重度痴呆两组与轻度痴呆组比较，血浆Hcy水平均显著升高（P0.05）；重度痴呆组患者血浆Hcy水平与中度痴呆组比较，也显著升高（P0.05）；经相关性分析VaD组患者血浆Hcy水平与MMSE评分呈负相关（r-0.475,P0.05）。4.两组MTHFR基因TT型血浆Hcy浓度显著高于CT型及CC型（P0.001）；两组CT型血浆Hcy浓度与CC型相比亦有显著性差异（PCT型CC型（均P0.001）。结论血浆Hcy水平升高是VaD的危险因素之一；Hcy水平与叶酸、维生素B12呈负相关，叶酸、维生素B12的降低可能是导致血浆Hcy增高的一个重要因素；MTHFR基因突变可能致使血浆Hcy水平升高；血浆Hcy水平升高是VaD痴呆严重程度的影响因素之一。关键词血管性痴呆；基因多态性；同型半胱氨酸；叶酸；维生素B12IICorrelationofHomocysteineConcentrationandMTHFRGenePolymorphismwithVascularDementiaPostgraduate:YuanfangGongSupervisor:Prof.XilingChenDepartmentofNeurologyTheSecondClinicalCollegeofZhengZhouUniversityZhengzhou,Henan,450014AbstractBackgroundandobjectiveVascularDementia(VaD)isachronicprogressivediseasewithcognitiveimpairmentandpersistentmentalretardation,whichcausedbyavarietyofcerebrovasculardiseases.ItisthesecondmostcommontypeofdementiaafterAlzheimersdisease(AD).InChina,theprevalencerateofVaDisfrom1.1%to3.0%.VaDincreasestheriskofdeath,reducesthequalityoflife,increasesthecostofeconomy,whichbringshugeburdentothefamilyandsociety.Soinrecentyears,vasculardementiaisbecomingahotresearchforscholars.VaDandstrokehavesomerelatedriskfactors,asage,sex,race,smoking,atheroscleroticvasculardiseases,hypertension,diabetes,chronicatrialfibrillation,ypercholesterolemia,ect.TheoccurrenceofVaDisnotonlydirectlyrelatedtocerebrovasculardisease,butalsoisinfluencedbygeneticandenvironmentalfactors.Clinicalinvestigationsandepidemiologicalstudiesfoundthathyperhomocysteinemia(HHcy)couldprompteatheroscleroticdiseases,anditcouldbeanewindependentriskfactorforcerebrovasculardiseases,andberelatedtothecognitiveabilityofpatients.N5,N10-IIImethylenetetrahydrofolatereductase(MTHFR)istherate-limitingenzymeofHcymetabolizeandtheC677TmutationcancauseHHcy.ButthecausesofVaDhavenotbeenfullyelucidated.ThisarticleisaimedtoinvestigatethecorrelationbetweenVaD,plasmaHcy,andtheimpactofMTHFRC677TpointmutationonHcyconcentration,inordertoidentifythecausesofrelevantfactorsofVaD,andprovideevidencesforthepreventionandtreatmentofVaD.Methods73patientswithVaDand75patientswithnondementedcerebralinfarctionwererecruitedinthisstudy.ThecirculatingenzymaticmethodwasusedtotesttheHcyconcentrationinplasma.ThefolicacidandvitaminB12levelsweremeasuredbyimmunoassaymethod.ThemethodofPCR-chiphybridizationwasusedtoanalysisthepolymorphismofMTHFRgene.AndthescoresofMMSEwereusedtoassessthedegreeofdementiawiththepatientsofVaD.Results1.Thefrequency(76.71%)ofMTHFRgenehomozygousmutation(TT)andheterozygousmutation(CT)inVaDgroupwassignificantlyhigherthannon-dementiacerebralinfarctiongroup(69.33%,P0.05),andTallelefrequency(60.27%)wassignificantlyhigherthannon-dementiacerebralinfarctiongroup(45.33%,P0.05).2.TheHcylevelinplasmaofVaDgroupwassignificantlyhigherthannon-dementiacerebralinfarctiongroup(P0.001),thefolatelevelwassignificantlylowerthannon-dementiacerebralinfarctiongroup(P0.001),andthevitaminB12levelofVaDgroupwassignificantlylowerthannon-dementiacerebralinfarctiongroup(P0.05).3.TheHcylevelsinplasmaofpatientsfrommoderatedementiagroupandseveredementiagroupweresignificantlyelevatedthanmilddementiagroup(P0.05);theHcylevelinplasmaofpatientswithseveredementiagroupwassignificantlyhigher,comparedwithmoderatedementiagroup(P0.05);bythecorrelationanalysisofHcylevelsinplasmaandtheMMSEscoresofVaDpatientsshowednegativelycorrelated(r=-0.475,P0.05).4.TheHcylevelinplasmaofindividualsiontwogroupswithMTHFRgeneTTIVgenotypewassignificantlyhigherthanCTandCCgenotype(bothP0.001);theHcyleveslinplasmaofindividualswithCTgenotypecomparedwithCCgenotypeweresignificantlydifferent(PCTCC(allP0.001).ConclusionsThehighHcylevelinplasmaisoneoftheriskfactorsforVaD.ThecorrelationbetweenplasmaHcylevelandfolicacid,vitaminB12wasnegatived.ThedeficiencyoffolicacidandvitaminB12mayleadtohigherHcylevelinplasma.MTHFRgenemutationmaycausehigherHcylevelinplasma.ThehighHcylevelinplasmaisoneofthefactorsfortheseverityofVaD.KeywordsVasculardementia;Genepolymorphism;Homocysteine;Folate;VitaminB12V目录论文部分前言.1研究对象与检测方法.4结果.9讨论.12结论.21参考文献.22附图.26综述部分血浆同型半胱氨酸及MTHFR基因多态性与血管性痴呆的研究进展.27参考文献.38附录部分个人简历.41致谢.42VI英文缩写ADCBSCADASILCDRECGluHHcyHcyHISLDLMIDMetMTHFRMMSEMoCAMSNOPLPSAMSAHVaD中英文缩略词表英文全称AlzheimersdiseaseCystathionine-synthascerebralautosomaldominantarteriopathywithsubcorticalinfarctsandleukoencepha-lopathyClinicalDementiaRatingendothelialcellglutamicacidhyperhomocysteinemiahomocysteineHachinskiischemicscalelowdensitylipoproteinMulti-infarctdementiaMethioninemethylenetetrahydrofolatereductasemini-mentalstateexaminationMontrealcognitiveassessmentMethioninesynthasenitricoxidepyridoxalphosphateS-adenosinemethionineS-adenosylhomocysteinevasculardementiaVII中文全称阿尔茨海默病胱硫醚-合成酶常染色体显性遗传病合并皮质下梗死和白质脑病临床痴呆评定量表血管内皮细胞谷氨酸高同型半胱氨酸血症同型半胱氨酸Hachinski缺血指数低密度脂蛋白多发梗塞性痴呆蛋氨酸N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶简易精神状态检查量表蒙特利尔认知评估量表蛋氨酸合酶一氧化氮吡哆醛磷酸盐S-腺苷甲硫氨酸S-腺苷同型半胱氨酸血管性痴呆血管性痴呆与MTHFR基因多态性及血浆Hcy浓度的相关研究研究生弓园芳导师陈淅泠郑州大学第二临床学院神经病学河南郑州450014前言血管性痴呆（vasculardementia,VaD）是一种认知功能缺损综合征，通常由出血、缺血、或急慢性脑缺氧等脑血管疾病因素所导致的脑组织损伤，引起脑组织的血液循环障碍及脑功能减退。VaD的发病率仅次于阿尔茨海默病（Alzheimersdisease,AD），是出现较多的一种痴呆类型，其发病率在中国、日本等东亚国家中与AD相当1。VaD患者多呈慢性、持续性、进行性发生的智能损害，临床可表现为记忆下降、认知障碍和行为异常等，常伴有认知力、记忆力、情绪和行为等一系列的症状和体征，而且时间长达数月或半年以上2。VaD大多数发生在脑卒中后3个月内，表现为忽然或者逐渐发生的认知功能障碍、个性和情绪改变、假性延髓麻痹等，到后期则表现出全面性痴呆，记忆力、自知力、计算力、定向力和思维能力等均发生损害，人格改变尤为突出3。VaD可以分为5种临床类型：多发梗塞性痴呆(Multi-infarctdementia,MID)、大面积梗塞性痴呆、关键部位的单发梗塞性痴呆、出血性痴呆(痴呆原因为脑出血)和皮质下动脉硬化性脑病(通称Binswanger病)4。VaD多见于60岁伴动脉硬化的老年人，男性多于女性。随着年龄的增长，VaD的发病率呈指数上升趋势。最近几年，伴随老龄人口数量和预期寿命的增加，年龄相关疾病的患病率逐渐上升，尤其在我国VaD患者数量的不断增加，给家庭及社会造成了沉重的负担。已有相关研究证明，VaD是到目前为止发现的唯一一种可防治的痴呆类型，如果在疾病早期给予干预治疗也许具有一定可逆性5。对VaD的研究在过去的十年中1虽然已取得很大进展，但是一些争议仍有待解决，如VaD发病机制尚不完全明确，且缺乏有效治疗手段，故探寻与VaD发病的相关危险因素，用于研究行之有效的早期诊断、早期治疗的措施已成为当务之急。当前的研究成果证实，VaD与脑血管病的发生、发展有十分密切的关系，其危险因素包括糖尿病、高血压、高脂血症、高同型半胱氨酸血症、动脉粥样硬化等。另外，VaD与性别、种族、遗传、年龄以及其他能够导致脑细胞缺血缺氧（颈动脉斑块、贫血、睡眠呼吸暂停低通气综合征等）的因素也关联密切6。国外相关调查发现7，脑卒中后的患者约15%30%在3个月内发展为痴呆。近年来的若干个研究表明8-10，高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)对脑血管疾病来说是一个独立危险因素，而且对VaD来说更是一个新的独立危险因子，它与VaD的发生、发展关联紧密。同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）是人体内一种不能直接生成的含硫氨基酸，主要代谢器官为肾脏和肝脏，是蛋氨酸（Methionine,Met）循环重要的中间代谢产物。Met可以提供甲基用于体内多种具有生物活性的物质合成，包括DNA、RNA、脂类和蛋白质。体内的Hcy可通过三条途径进行代谢：转硫作用、再次甲基化作用以及由细胞内直接转移至细胞外。HHcy的形成与营养因素如叶酸、维生素B12、维生素B6等的缺乏以及Hcy生成及代谢障碍有关，均可致使血浆Hcy水平升高。Boxer11等研究表明认知功能由Hcy所导致的损害在一定程度上是可逆的，如果降低痴呆患者的Hcy水平，在一定程度上将有利于缓解其痴呆程度的加重。N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR）是Hcy与叶酸代谢过程中的关键酶，催化5,10-亚甲基四氢叶酸脱去甲基而还原为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸。5-甲基四氢叶酸为体内DNA、RNA、蛋白质的甲基化及嘌呤、嘧啶的合成间接提供甲基供体，与此同时稳定体内正常的Hcy水平，故Hcy的代谢需要MTHFR的参与。若体内MTHFR缺乏或者活性降低，可导致血浆Hcy升高，形成HHcy。人类MTHFR基因位于第一号染色体1p36.3的位置，有12个外显子，cDNA全长2.2kb，mRNA全长7,150bp，编码由656个氨基酸残基组成的蛋白。Hinf位点限制性内切酶片段长度多态性即cDNA序列上第677位核苷酸CT突变，因此产生一个Hinf限制性内切酶识别的特定序列，即T等位基因，此突变可以使编码的氨基酸由缬氨酸替代丙氨酸，增加了MTHFR的遇热敏感性，其酶的活性也较前显著下降，减少5-甲基四氢叶酸的生成，阻碍Hcy的再次甲基化，从而导致高水平的血浆Hcy12。2本研究旨在探究VaD患者血浆Hcy、叶酸、维生素B12水平与MTHFR基因多态性的相关性，为VaD发病的相关因素及发病机制提供有力的依据，以希望能达到早期发现、早期诊断的目的，并在临床实践中采取积极有效的治疗措施。3研究对象与检测方法2.1研究对象收集郑州大学第二附属医院老年医学病区2013年9月至2015年5月住院的73例血管性痴呆患者为VaD组，其中男40例，女33例，年龄分布6590岁，平均年龄（76.847.148）岁；收集同期来我院就诊的75例非痴呆脑梗死患者为非痴呆脑梗死组，其中男45例，女30例，年龄分布6287岁，平均年龄（76.526.929）岁。两组患者在性别、年龄、教育程度、吸烟、饮酒、肥胖等基本情况方面相比较，均无统计学差异（P0.05），具有可比性。根据简易精神状态检查量表(mini-mentalstateexamination,MMSE)的评分将VaD组患者分为轻度、中度、重度痴呆3组，轻度痴呆组(20分MMSE评分25分)30例，中度痴呆组(10分MMSE评分20分)28例，重度痴呆组(MMSE评分10分)15例。2.2选取标准所有入选患者均应符合1995年全国第四届脑血管病学术会议所拟定的脑梗死诊断要点，经头颅CT和（或）MRI检查除外脑栓塞，脑卒中时间长于3个月，且非痴呆脑梗死组患者不存在明显的认知功能障碍。VaD组纳入标准包括：患者在脑卒中之前无认知功能障碍，目前病情稳定；具有急性或亚急性发病的神经系统症状和体征；符合美国国立神经系统疾病与脑卒中研究所（NINDS/AIREN）制定的VaD诊断标准；符合美国精神病学会精神障碍诊断和统计手册第4版（DiagnosticStatisticalManualofMentaldisorders，FourthEdition,DSM-IV）的痴呆诊断标准13；MMSE评分24分，HIS评分7分，临床痴呆评定量表（ClinicalDementiaRating,CDR）评分1分；CT和（或）MRI证实脑内多灶性皮层或皮层下缺血性改变；获得患者及家属的知情同意，并签署知情同意书。42.3排除标准排除其他痴呆类型，如AD、路易体痴呆、帕金森痴呆等；排除意识障碍，严重视、听力障碍，重度失语者；排除自身免疫性疾病、甲状腺功能异常、心源性脑栓塞、肝肾功能障碍、严重感染、恶性肿瘤、风湿性疾病、恶性贫血、严重消化道疾病等；并在近3个月内没有服用抗癫痫药、多巴胺类、环孢素、避孕药、叶酸、维生素B12、维生素B6等药物。2.4主要仪器及试剂2.4.1主要仪器设备1.7600-020全自动生化分析仪2.UniCelDxl800免疫分析仪3.BaiOe-Hyb全自动杂交仪4.BaiOBE-2.0生物芯片识读仪(BSE01011)5.BaiO基因芯片图像分析软件V2.06.MTHFR基因型分析软件(BSE040101)7.台式高速低温离心机2.4.2主要试剂1.同型半胱氨酸测定试剂盒2.维生素B12试剂盒3.叶酸试剂盒4.血液基因组DNA提取试剂盒(BST01051）5.MTHFR(C677T)基因检测试剂盒6.BaiO杂交显色试剂盒日本日立公司美国贝克曼库尔特有限公司上海百傲科技有限公司上海百傲科技有限公司上海百傲科技有限公司上海百傲科技有限公司德国Hereeus公司上海德赛诊断系统公司美国贝克曼库尔特有限公司美国贝克曼库尔特有限公司上海百傲科技有限公司上海百傲科技有限公司上海百傲科技有限公司2.5检测指标及原理2.5.1抽取血样所有研究对象均于次日清晨空腹抽取静脉血，抽血前过夜禁食水空腹8小时以上，早晨8:00前抽取肘静脉血10ml，置入EDTA抗凝管摇匀，静置30分钟5后，在高速低温离心机内4条件下以3000转/分钟离心10分钟；血细胞于-20保存，提取DNA测定MTHFR基因型，血浆-70保存，检测Hcy、维生素B12和叶酸水平。2.5.2血浆Hcy浓度的测定测试者于近3个月内未服用影响Hcy浓度的药物（如苯妥英钠、卡马西平等可使Hcy升高，二甲双胍通过降低叶酸及维生素B12水平升高Hcy浓度；磺脲类药物可降低Hcy水平14）。本试验采用日立7600-020全自动生化分析仪及上海德赛诊断系统公司生产的Hcy测定试剂盒，采用酶循环法检测。检验原理：氧化型Hcy被转化成游离Hcy，再与共价底物S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosinemethionine,SAM）通过Hcy甲基转移酶的催化生成S-腺苷同型半胱氨酸（S-adenosylhomocysteine,SAH）和Met，SAH被S-腺苷同型半胱氨酸酶水解生成腺苷和Hcy，Hcy循环参加反应，检测信号放大，腺苷则立刻水解为氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的催化下，使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）转变为NAD+，NADH的变化与样本中Hcy浓度成正比，因此检测血NADH则可知Hcy的浓度。2005年ChaoDou等15建立酶循环法，其灵敏度、特异度较高，且干扰因素少、操作方便、费用低廉、结果准确可靠，广泛推广于临床。按照美国心脏病协会营养委员会公布的高Hcy血症的诊断标准16，正常血浆Hcy水平是515mol/L，若高于15mol/L可诊断为高Hcy血症。2.5.3叶酸、维生素B12水平测定测试者于近3个月内未服用影响叶酸及B族维生素的药物，抽取患者空腹肘前静脉血，分离血清后采用美国贝克曼库尔特uniceldxi800免疫分析仪及其试剂盒（叶酸和维生素B12试剂盒），由我院检验科医师应用免疫分析测定法检测血清叶酸和维生素B12水平。2.5.4MTHFR基因型检测2.5.4.1PCR-芯片杂交法检测MTHFR基因型原理首先通过细胞裂解法将基因组DNA从外周血细胞中提取出来，然后将MTHFR基因特异性引物经PCR扩增，固定在醛基基片上的MTHFR基因检测6探针与带有生物素标记的扩增产物进行特异性杂交反应，通过酶促进行显色反应，使之呈现出颜色，最后扫描该芯片，得到样本DNA和MTHFR（C677T）基因位点的突变型和野生型探针进行杂交所形成的图像，经软件分析，得出待检样本的MTHFR基因型。2.5.4.2PCR-芯片杂交法检测MTHFR基因型步骤提取样本DNA依照血液基因组DNA提取试剂盒(BST01051）的使用说明书提取和纯化DNA。PH为7.6的TE缓冲液可作为稀释剂来稀释DNA，使其浓度保持在10-60ng/l。样本DNA在-20的条件下可贮存1个月，反复冻融次数小于3次。准备PCR扩增液取出试剂在室温解冻后低速离心，将MTHFR扩增液每管22l分置两管并做标记。加反应液A（Taq酶，UNG酶）0.1l于各个扩增管中，再加入提取的DNA溶液2ul混匀。PCR扩增各管置于PCR扩增仪中进行扩增，按照相应的条件进行，2-8条件下保存扩增产物。杂交显色BaiO杂交显色试剂盒中反应液B（TE缓冲液，0.001标志寡核苷酸，0.1%TMS）低速离心后加10l于杂交缓冲液瓶中。低速离心1支抗体后加入稀释液混匀。将做好标记的MTHFR基因芯片放入BaiOe-Hyb全自动杂交仪并设置相应程序。各个试剂按要求分装置离心管中并置于试剂架相应位置，加入杂交液后置于杂交仪中，运行程序。待反应结束后取出芯片，放在生物芯片识读仪中，BaiO基因芯片图像分析软件(BaioArrayDoctor)V2.0进行图像扫描和数据分析并输出检测结果。检测结果包括三种基因型：677CC，677CT和677TT（详见附图）。2.5.4.3PCR-芯片杂交法检测MTHFR基因型特点PCR-芯片杂交法具有技术操作简单，自动化程度高，序列数量大，检测效率高，应用范围广，成本相对低等特点，故在临床上广泛应用。72.6统计分析应用SPSS17.0软件进行数据处理，计量资料采用均数标准差（xs）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，计数资料组间比较采用c2检验，相关性研究采用Pearson直线相关性分析。显著水平以P0.05有统计学意义。8结果3.1VaD组与非痴呆脑梗死组MTHFR基因型及等位基因频率分布MTHFR基因型有3种，即纯合子(CC)型，杂合子(CT)型，纯合子(TT)型。VaD组和非痴呆脑梗死组基因分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律（P0.05），具有群代表性。由表1可见VaD组MTHFR基因纯合子突变(TT)和杂合子突变(CT)发生率(76.71%)明显高于非痴呆脑梗死组(69.33%，P0.05)，VaD组T等位基因频率(60.27%)也高于非痴呆脑梗死组(45.33%，P0.05）。提示MTHFRC677T位突变和VaD的发生可能具有相关性。表1VaD组与非痴呆脑梗死组MTHFR基因型及等位基因频率分布基因型频率（n，%）等位基因频率（n，%）组别例数（n）VaD组非痴呆脑梗死组7375CC17(23.29)23(30.67)CT24(32.87)36(48.00)TT32(43.84)16(21.33)C58(39.73)82(54.67)T88(60.27)68(45.33)c2值P值7.250.0256.6260.0073.2VaD组与非痴呆脑梗死组血浆Hcy、叶酸和维生素B12水平表2可见VaD组血浆Hcy水平显著高于非痴呆脑梗死组（P0.001），叶酸水平显著低于非痴呆脑梗死组（P0.001），维生素B12水平显著低于非痴呆脑梗死组（P0.05），差异均具有统计学意义。提示血浆Hcy水平的升高可能是VaD发生的一个危险因素，叶酸及维生素B12对VaD具有一定的保护作用。9表2VaD组与非痴呆脑梗死组血浆Hcy、叶酸和维生素12水平比较（xs）组别例数（n）Hcy（mol/L）叶酸（ng/ml）维生素B12（pg/ml）VaD组非痴呆脑梗死组t值P值737519.554.9715.324.865.020.0015.982.148.162.93-5.2320.001298.4594.69375.76122.47-2.6530.053.3VaD组痴呆程度与血浆Hcy水平的关系表3可见随着血浆Hcy水平的升高，MMSE分值逐渐下降，痴呆程度加重。与轻度痴呆组比较，中度及重度痴呆两组患者血浆Hcy水平均显著升高，差异有统计学意义（P0.05），重度痴呆组患者血浆Hcy水平与中度痴呆组比较也升高显著，差异有统计学意义（P0.05）；经相关性分析，VaD组患者血浆Hcy水平与MMSE评分呈负相关(r=-0.475，P0.05)，与患者的痴呆程度呈正相关。提示血浆Hcy水平的升高可能会导致患者痴呆程度的加重，促进VaD病情进展。表3VaD组痴呆程度与血浆Hcy水平的关系(xs)痴呆程度轻度例数（n）30Hcy（mol/L）16.313.54MMSE评分23.050.79中度2818.314.0818.112.79重度1522.575.79#7.333.74注：与轻度痴呆组比较，P0.05；P0.01；与中度痴呆组比较，#P0.05。3.4MTHFR不同基因型对血浆Hcy水平的影响（mol/L，xs）表4可见两组MTHFR基因TT型血浆Hcy浓度显著高于CT及CC型（P0.001）；两组CT型血浆Hcy浓度与CC型相比亦有显著性差异（P0.001），两组不同基因型Hcy浓度比较为TT型CT型CC型（均P0.001）。提示MTHFR(C677T)基因突变可能导致血浆Hcy水平升高。10表4MTHFR不同基因型血浆Hcy水平的比较（mol/L，xs）组别例数（n）CC血浆Hcy（mol/L）CTTTP值VaD组非痴呆脑梗死组737518.746.7111.333.4117.252.9515.804.0420.353.9519.714.190.0010.001注：与同组CC型比较，P0.001。11讨论4.1血管性痴呆4.1.1血管性痴呆的分类VaD是一种认知功能缺损综合征，通常由出血、缺血或急慢性脑缺氧等脑血管病因素所导致的脑组织损伤，引起脑组织的血液循环障碍及脑功能减退，发病率仅次于AD，是出现较多的一种痴呆类型，严重影响人们的生活品质。VaD与其他类型的痴呆相比，如果在早期进行干预或者治疗，可能具有更好的预后。VaD按神经病理分类如下：多发梗塞性痴呆，由于脑血管动脉硬化，脑细胞血液供求受影响，反