HPV检测技术及临床应用

HPV检测技术及临床应用 内容 uHPV检测技术的诞生背景 uHPV检测临床应用的进展 uHPV检测主要的技术及特点 u硕世 21HPV分型定量检测的优势 HPV与宫颈癌关系的确立 Professor Harald zur Hausen Nobel Prize for Medicine 2008 1976年： Harald zur Hausen在宫颈癌及疣 体患者中发现了 HPV DNA； 1984年： Harald zur Hausen从宫颈癌患者 中克隆了 HPV16型和 18型病毒。 “The first one who demonstrated HPV-DNA sequences in cervical cancer biopsies and cervical cancer cell lines.” Year 1975 1980 1985 1989 1993 1997 2001 2005 2010 5-存活率 68.1% 67.9% 66.4% 71.0% 70.9% 71.6% 70.4% 68.0% 67.9% Cytology Reduced Cervical Cancer Incidence but Unmet Need Still Exists /archive/csr/1975_2010/results_merged/sect_05_cervix_uteri.pdf: SEER 9 Incidence 12:880890 plus supplementary tables. 2. Wright TC et al. Int J Cancer. 2013 Oct 7. doi: 10.1002/ijc.28514. Epub ahead of print 单独使用细胞学的局限性 细 胞学假阴性率高 女性确 诊为 浸 润 癌（ ICC）的 筛查 史 原因 Kaiser1 Swedish audit2 近期没有 筛查 464 (56%) 789 (64%) 细 胞学漏 检 263 (32%) 300 (24%) 异常 细 胞学随 访时 漏 检 106 (13%) 91 (7%) 1. Leyden WA, et al. J Natl Cancer Inst 2005; 97:675683; 2. Andrae B, et al. J Natl Cancer Inst 2008; 100:622629. 细 胞学 临 床敏感性明 显 更低于 HPV DNA检测 Whitlock EP, et al. Ann Intern Med. 2011; 155:687697, W2145. Studies performed in developed countries in women 30 years and older. 平均增加了 35.7% Bigras (N=13,842) Cardenas (N=1,850) Coste (N=3,080) Kulasingam (N=774) Mayrand (N=9,977) Petry (N=7,908) 0 20 40 60 80 100 细胞学 HPV DNA 检测 CIN2 的检测敏感性 (%) 细 胞学缺乏精确性 细 胞学的判 读 重复性差 NILM ASCUS LSIL HSIL NILM 78% 19% 3% 65岁 近 10 年有 连续 3次阴性 细 胞学 结 果或 连续 2 次阴 性 联 合 筛查结 果且末次 筛查 在近 5 年内的 65 岁 女性 ,停止 筛查 。 HPV检测联合细胞学筛查（ 30岁及以上） ASCCP， American Society for Colposcopy and Cervical Pathology：美国阴道镜和宫颈病理学会 CSCCP， China Society for Colposcopy and Cervical Pathology：中国阴道镜和宫颈病理学会 LSIL， Low-grade Squamous Intraepithelial Lesion)：低度鳞状上皮内病变 Saslow D et al, Journal of Lower Genital Tract Disease, 2012 HPV检测 +细胞学 细胞学 LSILHPV+ 206:46.e1-.e11 1、磁珠提取 mRNA 2、 TMA，转录介导的扩增 3、杂交保护及化学发光检测（ DKA） T(胸腺嘧啶）构成的核苷酸链固定 于磁珠上 寡核苷酸序列捕获目标 RNA APTIMA HPV检测（ TMA技术，定性检测） 精准医学： HPV检测的应用进展 凯杰 HC2 罗氏 cobas HPV 豪洛捷 Aptima HPV 硕世 21HPV 分型 &定量 杂交捕获技术 检测 13 种高危 HPV 不分型 半定量 荧光 PCR技术 检测 14种高危 HPV 16/18分型 定性 转录介导扩增 （ TMA） 检测 14种高危 HPV 16,18/45分型 定性 荧光 PCR技术 检测 18种高中危 +3 种低危型 21种 HPV分型 &标 准化定量 不分型 分型 & 定性 定量 内容 uHPV检测技术的诞生背景 uHPV检测临床应用的进展 uHPV检测主要的技术及进展 u硕世 21HPV分型定量检测的优势 硕世 21HPV分型定量检测系统简介 采用独有专利的 “ 宫颈脱落细胞取样处理标准化 ” 技术和先进的多重荧光 PCR定量技术，可在 2.5小时内快速、准确地区分样本中的 21种 HPV亚型，包 括 13种高危型 HPV16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59 、 68， 5种中危型 HPV26、 53、 66、 73、 82和 3种低危型 HPV6、 11、 81； 并同步对 21种 HPV各亚型进行标准化定量。 创新与突破 1：分管分型 HPV16 HPV18 HPV31 HPV59 HPV66 HPV53 HPV33 HPV58 HPV45 HPV56 HPV52 HPV35 HPV68 HPV51 HPV39 HPV82 HPV26 HPV73 HPV6 HPV11 HPV81 定量参 考基因 检测 传统分型技术（膜杂交 /液体芯片杂交 ） 创新分型技术（硕世分管分型） PCR扩增 +膜 /液态芯片杂交，时间长 PCR扩增同步分型，时间短 PCR扩增产物 开盖 进行杂交，易污染 实时荧光 PCR闭管 扩增分型，不易污染 所有靶标在同一管中扩增，易竞争抑制 每管仅扩增 3种型别，分型准确 分管区分 21种 HPV基因亚型 中国医科大学附属盛京院研究数据 硕世 HPV检测与型别鉴定的金标准测序法比较，准确性 99.6% 硕世 HPV检测（ BMRT）的筛查性能：北京大学深圳医 院临床研究数据 Chen Q, Du H, Zhang R, et al. Genetics and molecular research: GMR, 2016, 15(2). 自采样的检测，硕世 21HPV分型定量检测（ BMRT）敏感性高于 cobas HPV检测 全面检测 CFDA要求检测的 18种高危型 2015年 CFDA颁布最新 HPV试剂指导原则 /WS01/CL0087/136485.html 原文： 依据 WHO国际癌症研究机构 （ IARC）及其他国际组织的研究成 果，本指导原则建议将 HPV16、 18 、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、 68等 13种基因型列为 高危型别 ， 26、 53、 66、 73、 82等 5种基因型列为中等风险型别 。 两种方法 HPV检测型别的比较 HPV型别 硕世 21HPV分型定量 检测 亚能 23HPV分型检 测 高危型 HPV 16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、 68 16、 18、 31、 33、 35、 39、 45、 51、 52、 56、 58、 59、 68 中危型 HPV 26、 53、 66、 73、 82 53、 66 低危型 HPV HPV 6、 11、 81 6、 11、 42、 43、 44 、 83、 MM4 硕世 21HPV分型定量检测 18高中危型与 CFDA最新要求完全一致 准确区分中国人群常见致病型别 国家 排序 HPV型别 病例数 HPV型别分布（ %） 95% 置信区间 中国 1 16 5324 38.5 (37.2-39.8) 2 52 5245 18 (17.0-19.1) 3 58 5245 16 (15.1-17.1) 4 33 5324 7.4 (6.8-8.2) 5 18 5324 7.2 (6.5-7.9) 6 31 5324 5.1 (4.6-5.8) 7 51 5245 4.1 (3.6-4.6) 8 53 4949 3.2 (2.8-3.7) 9 68 5089 2.8 (2.3-3.2) 10 59 5245 2.8 (2.4-3.3) *全球 HPV信息中心（ ICO）最新发布，链接网址： /index.php WHO/ICO HPV相关统计 : 宫颈癌前病变排名前 10位 HPV型别的分布 * 北京大学深圳医院临床数据 研究检出频率位于前四位的亚型是 HPV 16、 52、 58、 33 *研究选用的 HPV检测方法为：硕世 21HPV分型定量检测 Prof. Wu s Data 准确分型，风险分层 2% 0% 癌前病变风险 阴道镜阈值 10% 30% 21种 HPV亚型 13种高危型 HPV 中国人群最常见 癌前病变高危险型 HPV16型 HPV52型 HPV58型 HPV33型 HPV18型 一般高危型 HPV31、 35、 39、 45、 51、56、 59、 68型 5种中危型 HPV HPV26、 53、 66、 73、 82型 3种低危型 HPV HPV6、 11、 81型 Nicolas Wentzensen， 2015 创新与突破 2：标准化定量 宫颈脱落细胞 HPV病毒 宫颈脱落细胞 样本 HPV检测定量的挑战 采样差异会导致样本中细胞数量不一，无法统一标准 ，进而无法实现定量 标准化定量（硕世专利） 通过定量检测宫颈脱落细胞内的单拷贝基因的数量测 算宫颈脱落细胞的数量，并报告同等细胞数量中 HPV 病毒载量（ copies/cells），实现标准化定量 专利号： ZL 201110087602.1 硕世硕世 21HPV分型定量检测是首个、唯一采用标准化定量的分型定量检测是首个、唯一采用标准化定量的 HPV分型检测分型检测 中国医科大学附属盛京院研究数据 313例 HPV16阳性病例，随着病变等级提高载量也相应增加 Sun Z et al. Bmc Cancer, 2015. 北京大学深圳医院临床验证数据 硕世 21HPV分型定量检测： 不同程度宫颈病变病灶中 HPV亚型病毒载量 HPV 16 HPV 52 HPV 58 Prof. Wu s Data 北京大学深圳医院临床验证数据 硕世 21HPV分型定量检测： 不同程度病