HIV实验室检测ppt课件

1 HIV实验室检测 2 HIV病原学及流行病学特点 HIV实验室检测方法 罗氏第四代 HIV检测试剂特点 目录 3 HIV病原学 HIV人类免疫缺陷病毒，由包膜及 核心组成，为 RNA病毒 HIV核心部分包括两条单股 RNA链 ，核心结构蛋白及复制所需酶类（ 蛋白酶、逆转录酶、整合酶） HIV病毒逆转录酶无校对功能，故 病毒变异性强，导致检测结果假阴 性 4 HIV病原学 病毒识别易感细胞膜表面受体，在逆 转录酶作用下由 RNA逆转录为 DNA 经 DNA转录及翻译后形成蛋白外壳 ，将病毒 RNA包裹其中，生成新的 HIV 主要侵入 T淋巴细胞及神经细胞， 导致细胞免疫功能缺陷，增加机会 性感染 5 HIV流行病学 全国呈低流行态势，部 分地区疫情严重 HIV主要分为两种 HIV- 1和 HIV-2两型； HIV-1类为全球主要流 行类型，分为 M、 O、 N三个亚型组 6 HIV传播途径 1、传染源：病人及无症状携带者 血液、精子、子宫和阴道分泌物、唾液、眼泪和乳汁等传播 2、传播途径 性传播：同行、异性、双性性接触 母婴传播：经胎盘、分娩及哺乳时传播 血液制品传播 ：共用针具静脉注射毒品， 介入性医疗操作，纹身，耳洞等 7 HIV感染自然史 急性期 艾滋病期无症状期 初次感染 HIV 2-4周，传 染性最强 主要以发热、关节痛、淋 巴结肿大为特征 可检出 HIV及 p24抗原， CD4+/CD8+倒置 可持续 6-8年， HIV在感染 者体内不断复制，具有传 染性 可检测 HIV及抗体， CD4+ T淋巴续保逐渐下降 HIV感染最终阶段， HIV血 浆病毒载量明显升高， CD4+T淋巴细胞 200个 /ul 主要表现为各种机会性感 染及肿瘤 8 血清学检测血清学检测 备注备注 HIV抗体抗体 筛查试验：筛查试验： ELISA, CIA, ECLIA 确证试验：确证试验： WB, RIBA 仅测抗体仅测抗体 HIV p24抗原抗原 早期灵敏度更高早期灵敏度更高 HIV抗原抗原 +抗体抗体 HIV Ag/Ab combi PT: ELISA, ECLIA, CIA 核酸检测核酸检测 备注备注 HIV RNA 定性定性 辅助确证试验辅助确证试验 Taqman荧光实时荧光实时 PCR试剂试剂 HIV RNA 定量定量 辅助确证试验，监测治疗效辅助确证试验，监测治疗效 果与疾病进展果与疾病进展 靶核酸扩增试剂靶核酸扩增试剂 淋巴细胞检淋巴细胞检 测测 备注备注 CD4+和和 CD8+ HIV感染分期，抗病毒治疗指针感染分期，抗病毒治疗指针 CD4+/CD8+比值下降比值下降 HIV实验室指标 初筛试验 +确证试验 9 HIV检测流程 全国艾滋病检测技术规范 -2015年修订版检测流程 初筛试验 筛查 复检 10 HIV检测流程 全国艾滋病检测技术规范 -2015年修订版检测流程 确证试验 确证 仅能检测 HIV-1，不能检测 HIV-2和 HIV Ag，灵 敏度有限，窗口期长，易错过早期感染样本 试剂成本高，操作繁琐，结果判定主观 11 HIV检测流程 初始反应必须使用抗原和抗体联合检测 的第四代免疫学方法，这类方法可以同 时检测 HIV-1抗体、 HIV-2抗体和 HIV p24抗原，检测出 HIV-1、 HIV-2感染和 急性 HIV-1感染，初始检测无反应性则无 需进行进一步检测 初始反应阳性标本需经过 FDA批准的抗 体鉴别试剂进行 HIV-1和 HIV-2抗体鉴别 试验，结果以 HIV-1抗体阳性、 HIV-2抗 体阳性、 HIV抗体阳性或无法鉴别来解释 初始检测有反应，抗体鉴别检测无反应 性或不明确标本须经 HIV-1核酸检测， HIV-1 NAT有反应性而抗体鉴别无反应 性为急性 HIV-1感染； HIV-1 NAT有反 应性而抗体鉴别试验不明确为 HIV-1感染 ； HIV-1 NAT无反应性而抗体鉴别不明 确为假阳性结果 联合试验 鉴别试验 核酸试验 美国 CDC推荐 HIV检测流程 2014修订版 12 HIV检测 HIV感染后首先 检测到 HIV RNA 第四代 HIV检测 试剂检测到 HIV p24抗原，为抗 原抗体联合检测 第三代及其以前 的试剂均为只检 测 HIV抗体 HIV-1/2/O抗体 HIV-1/2/O抗体 +HIV p24抗原 13 3rd 代抗体检测 核酸检测方法 4th 代抗原抗体检测 周 年 2 43 5 6 7 8 9 101 2 43 5 60 17 8 9 p24 抗原检测 p24 抗原检测 从初始感染后的时间 无症状期急性期 第一个血清转换窗口期 核酸检测方法 第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 罗氏 HIV试剂 艾滋病期 缩短检测窗口 期，早期诊断 2nd 代抗体检测 14 Seroconversio n panel Elecsys HIV combi PT Elecsy s HIV combi ADVIA Centaur HIV Ag/Ab combo ARCHITEC T HIV Ag/Ab combo VIRONOST IKA HIV Univ-Form II plus O Zhuhai Livzon anti-HIV Serodia HIV1/2 PRB 930 0 4 4 0 8 8 8 PRB 958 8 NA NA 8 NA NA NA Nabi 0759 0 0 0 0 NA 4 8 Nabi 1436 0 0 NA 0 9 9 9 Nabi 4009 0 NA 0 0 3 NA NA Nabi 9003 6 6 NA 6 10 6 10 Nabi 25165 0 0 0 0 NA 4 4 第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 罗氏 HIV试剂 缩短检测窗口 期，早期诊断 Elecsys HIV Combi PT阳转时间较 PCR 方法平均晚 2天 ，早于或等于其它方法 与三种第三代检测方法相比， Elecsys Combi PT 是 1.2 days ，优于 Elecsys HIV combi (2.0 days), Zhuhai Livzon anti-HIV(6.2 days) and Serodia HIV1/2 (7.8 days). 与 ADVIA Centaur相比 , the Elecsys HIV combi PTs 的检出时间是 0 days ， ADVIA Centarurs (1.0 days). 与 VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus O相比， Elecsys HIV combi PTs 是 1.5 days ， VIRONOSTIKA HIV Univ-Form II plus Os (7.5 days). 15 罗氏 HIV试剂 第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 缩短检测窗口 期，早期诊断 5.478 days(Roche, data on file) 16 罗氏 HIV试剂 第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT = 诊断相关蛋白 p24 gp120 gp41/gp36 p17（基质蛋白） RT(逆转录酶 ) RNA P24 抗原是 HIV病毒的核 心蛋白 HIV-Ag的检测 HIV-Ab的检测 膜蛋白 17 罗氏 HIV试剂 第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 包含包含 检测物检测物 功能功能 抗原检测抗原检测 p24 module 1 p24 Ag 早期检测早期检测 HIV感染及终末期感染感染及终末期感染 p24 module 2 p24 Ag 检测检测 O亚型以及亚型以及 HIV-2 抗体检测抗体检测 gp41 module 1 HIV-1 IgM and IgG 确保确保 HIV-1的检测高灵敏的检测高灵敏 gp36 module 1 HIV-2 IgM and IgG 确保确保 HIV-2的检测高灵敏的检测高灵敏 HIV-1 RT HIV-1 IgG 确保检测所有确保检测所有 HIV亚型的安全性亚型的安全性 HIV-2 RT HIV-2 IgG 检测所有检测所有 HIV亚型的安全性亚型的安全性 gp41 module 2 HIV-1 subtype O 确保检测确保检测 O亚型的灵敏度亚型的灵敏度 gp36 module 2 HIV-2 IgG 确保检测确保检测 HIV-2的备份的备份 缓冲液缓冲液 添加抗干扰物质添加抗干扰物质 避免干扰避免干扰 可识别 所有亚型 18 罗氏 HIV试剂 可识别 所有亚型第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 619 8 472 19 罗氏 HIV试剂 第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 9 min 9 min 9 min 预处理 裂解出 p24抗原 Ag-Ab 复合物 磁珠 加入 共 27min孵育 ,测量池检测夹心法形成免疫复合物 20 罗氏 HIV试剂 第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 早期感染 血清转换期的检测 不同时期 HIV感染病人的检测 高灵敏度 不同亚型的检测 21 Elecsys HIV combi PT ARCHITE CT HIV Ag/Ab combo ADVIA Centaur HIV Ag/Ab combo Elecsys HIV combi Zhuhai Lizhu anti-HIV EIA VIRONOS TIKA HIV Univ- Form II plus O Total number 4,465 2,751 1,039 675 675 703 IR (1 s/co) 51 50 5 1 0 2 Confirmed positive 45 44 0 0 0 2 Number of false positives* 6 6 5 1 0 0 Specificity (IR, 1 s/co) 99.86% 99.78% 99.52% 99.85% 100.00% 100.00% 95% confidence limit (IR, 1 s/co) 99.71 99.95 99.52 99.92 98.88 99.84 99.18 100.00 99.45 100.00 99.48 100.00 罗氏 HIV试剂 第四代 HIV抗原抗体联合检测法 Elecsys HIV combi PT 高特异性 22 罗氏 HIV试剂 排除类风湿因子、自身抗体、 单克隆丙种球蛋白、 EB病毒抗 体、巨细胞病毒抗体、单纯疱 疹病毒抗体、流感疫苗等非特 异性干扰、抗干扰能力强 高特异性 23 Case分享 REN XX Men 29 Y Days since first bleed HIV Combi PT (COI) HIV Combi (COI) ELISA (S/CO) HIV RNA （高精分析（高精分析 ） WB 01 02011/08/0 1 / 4.41/4.05 (POS) 0.04(NEG) / P24 (不确定不确定 ) 02 134 2011/12/1 2 / 4.49(POS) 0.01(NEG) HIV RNA(NEG) P24 (不确定不确定 ) 罗氏 HIV Combi 试剂 2次均出现阳性结果， P24抗原也均出现条带，但 HIV-RNA分析病毒为阴性，最终报告为阴性，该患者实为淋巴瘤，分析 时注意干扰因素 淋巴瘤患者、孕妇、肿瘤病人、透析患者 4种病人都可能出现 HIV初筛阳 性，需特别对待 华西案例分析 CASE 1 24 Case分享 华西案例分析 CASE 2 WUXX Men 30 Y Days since first bleed HIV Combi PT (COI) HIV Combi (COI) ELISA (S/CO) HIV RNA （高精分析（高精分析 ） WB 01 0 2012/02/1 0 51.15 (POS) 2.59 (POS) 0.04 (NEG) / P24 (不确定不确定 ) 02 105 2012/05/2 5 302.7(POS ) / 11.09 (POS) 1.8X105 (POS) p24,p31 ， p51, p66, gp120， gp160 该患者第 1次检测罗氏 HIV Combi PT和 HIV Combi均为阳性