烤烟黄叶突变体及DH系的农艺性状与品质分析 毕业论文.doc

本科毕业论文（设计）论文题目：烤烟黄叶突变体及dh系的农艺性状与品质分析学 院： 农 学 院 专 业： 农学（烟化方向） 班 级： 2010级 学 号： 1009010079 学生姓名： 指导教师： 2014年5月贵州大学本科毕业论文（设计）诚信责任书本人郑重声明：本人所呈交的毕业论文（设计），是在导师的指导下独立进行研究所完成。毕业论文（设计）中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。特此声明。论文（设计）作者签名： 日 期： 目录摘要1abstract2前言4一、材料与方法61.1 农艺性状测定61.1.1试验材料61.1.2 实验方法61.2 光和色素含量的测定71.2.1 试验材料71.2.2 试剂及仪器71.2.3 试验方法71.3 化学成分的测定81.3.1 试验材料81.3.2 试验方法8二、结果与分析112.1烤烟黄叶突变体及其dh系的农艺性状分析112.2 不同时期光合色素含量变化与分析152.3 化学成分的变化192.3.1含氮化合物的变化192.3.2 磷含量变化222.3.3 钾含量变化222.3.4 总糖含量变化23三、小结与讨论233.1 黄叶突变体及其dh系生长特性233.2 烟草叶色突变性状与光合色素含量变化分析243.3 烟叶化学成分含量变化与烟叶品质分析253.3.1 氮含量与烟叶质量253.3.2 蛋白质含量与烟叶质量253.3.3 烟碱含量与烟叶质量263.3.4 磷含量与烟叶质量263.3.5 钾含量与烟叶质量263.3.6 总糖含量与烟叶质量26参考文献28致谢29第 30 页贵州大学本科毕业论文（设计）烤烟黄叶突变体及dh系的农艺性状与品质分析摘要本试验以烤烟品种g28nc2326杂交f1代植株的花药离体培养获得的烟草黄叶突变体以及该突变体与k326经多次回交转育获得的黄叶k326、k326 黄叶突变体的花药培养所获得的2个dh系（h1、h8）为材料，以正常绿叶品种k326为对照，研究了它们的主要农艺性状、色素含量、化学成分含量变化，主要结果如下：黄叶突变体出苗时叶色呈黄色，从出苗到现蕾期叶色由黄色逐渐转变为黄绿，植株长相完全正常，农艺性状稳定，群体整齐一致。黄叶突变体、黄叶k326、h8株高、叶长、叶宽、叶数均高于对照品种，长势强于对照。黄叶突变体及其dh系光合色素含量极显著低于对照，叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的下降幅度差异不大。其中在团棵期、旺长期、现蕾期黄叶突变体、黄叶k326、h1和h8与对照的色素含量差异较大，成熟期差异最小。分析了各时期的化学成分(氮、烟碱、蛋白质，钾、磷、总糖)含量变化，结果表明，从团棵期到成熟期，整体上看黄叶突变体、h1和h8的氮含量较对照高，团棵期时各材料氮含量均显著高于对照。在调制后的烟叶中，各材料的蛋白质含量差异不大，且均为团棵期一半左右。从团棵期到现蕾期烟碱含量均呈上升趋势，在成熟期时达最高，各材料与对照的烟碱含量差异不大。从团棵期到成熟期p含量均呈下降趋势。各材料从团棵期到成熟期钾含量均呈下降趋势，在各生育时期钾含量差异不是很大。各材料在团棵期、旺长期的总糖含量差异不大，现蕾期各材料总糖含量显著下降，达最小值，并且h1和h8较对照高，黄叶k326、黄叶突变体与对照差异不大，成熟期时各材料总糖含量显著增加，达最大值，黄叶突变体总糖含量较对照低，黄叶k326、h1、h8略高于对照。关键词：黄叶突变体；dh系；农艺性状；化学成分；烟叶品质分析；叶绿素yellow leaves of flue-cured tobacco mutants and dh lines are agronomic traits and quality analysisabstractin this experiment, flue-cured tobacco varieties g28 nc2326 f1 hybrid plants yellow leaves of tobacco anther culture obtained mutants, and the mutant k326 repeated backcrossing get yellow leaves k326, k326 yellow leaf mutant 2 dh lines (h1, h8) anther culture was obtained materials to normal as the control k326 leafy varieties studied their main agronomic traits, pigment content, chemical composition content changes, the main results are as follows:yellow leaves yellow leaves when mutant emergence from emergence to budding leaves gradually change from yellow to green, the plant looks completely normal, stable agronomic traits, groups neat line. mutant yellow leaves, yellow leaves k326, h8 plant height, leaf length, leaf width, leaf number was higher than the control variety, growing stronger than the controls.yellow leaves and photosynthetic pigments dh mutant lines were significantly lower than the control levels of chlorophyll a, chlorophyll b and carotenoids decrease is insignificant. which in the rosette stage, vigorous, budding mutant yellow leaves, yellow leaves k326, h1 and h8 pigment content and control the differences, the smallest difference in maturity.analysis of the chemical composition (nitrogen, nicotine, protein, potassium, phosphorus, total sugar) content of each period, the results show that from the rosette stage to maturity, the whole mutant yellow leaves, h1 and h8 nitrogen content higher than the control, while the rosette stage nitrogen content of each material were significantly higher than the control. in tobacco modulated, the protein content of each material little difference, and are about half the rosette stage. from the rosette stage to budding nicotine showed an upward trend, reaching a maximum at the time of maturity, the nicotine content of each material differences between the control is unlikely. from the rosette stage to maturity p content decreased. each material from the rosette stage to maturity were decreased potassium content, potassium content in various growth stages difference is not great. each material in the rosette stage, wang differences in long-term total sugar content is not significantly decreased budding total sugar content of each material, reaching a minimum value, and higher than the control h1 and h8, yellow leaves yellow leaves k326 mutant and control differences small, when the total sugar content of each material maturity increased significantly, reaching the maximum, yellow leaves mutant low total sugar content than the control, yellow leaves k326, h1, h8 slightly higher than controls.key words: yellow leaf mutant;dh lines;agronomic traits;chemical composition ;leaf quality analysis; chlorophyll.前言叶绿素突变作为一种明显的性状突变, 易识别，并且分布广泛, 几乎在所有作物上都能发生 。在高等植物中，植株缺绿突变是比较常见的。由于突变基因往往是直接或间接影响叶绿素的合成或降解，改变叶绿素含量，所以该类突变体也称为叶绿素缺乏突变体(chlorophyll deficient mutation)。叶绿素合成缺陷突变体可通过人工诱导(物理和化学诱变)或在自然环境等条件下产生，也能从转基因技术构建tdna插入的植物突变体库中获得（林钰琼 2003）。叶绿素缺乏突变体表现出的叶色表型是多种多样的。根据叶色表型一般将其分为5大主要类型：(1)白化（albina)；(2)黄化(xantha)；(3)浅绿(viridis)；(4)条纹(striate)；(5)斑点(tigrina)。walles（1980）根据不同表型的叶色特点将其划分成三类：一是单色突变，即失绿的叶片只表现黄、白或淡绿等其中的一种颜色；二是杂色突变，即叶片上有23种颜色，如白黄(albino-xantha)、黄白(xantha-alba)、白绿(albo-viridis)、绿白(virido-albina)和斑点(tigrina)等；三是阶段性失绿突变体，即在个体发育的某个阶段，叶色逐渐发生白（黄）化，然后再返回正常绿色。不同的叶绿素缺乏突变体，由于影响叶绿素代谢的基因多样，所以表现出的叶色表型是多种多样的。同时，植株叶色的表型性状与内部的遗传物质之间并非一一对应，同一叶色突变性状可能受不同基因控制（terry mj, 1999）；同一基因发生突变，由于基因功能缺损的程度不同，可能造成不同表现型（kumar am, 2000）。到目前为止，国内外在水稻（胡忠，1981；黄晓群，2005；许晓明，2004；戴新宾，2000；林植芳，2004；jung k h，2003；wang c，2003）、大麦（林宏辉，1998；李玉湘，1983 ；henningsen k w，1993； hansson a，2002）小麦（王保莉，1996；klindworth d.l, 1997；kjemtrup s., 1998）、油菜（张年辉，2004；赵云，2001； zhao y, 2000； zhao y，2001）、烟草（barak s, 2000； monde r a, 2000； bae c h，2001； schmid gh，1967； ali e，2005； papenbrock j, 2000）、棉花（肖松华，1995）、等多种作物中获得了此类突变体，并从遗传、叶绿素合成、叶绿体超微结构和发育、色素蛋白复合体、光合生理等方面进行了大量研究。研究表明，缺绿突变体作为一种特殊的材料，对研究高等植物的光合机理、叶绿素的生物合成、叶绿体的结构、功能与发育以及它们的分化和遗传控制、分析鉴定基因功能、了解基因间互作具有特殊价值。随着新的突变体不断发现以及科学技术的发展、生产技术的不断创新，缺绿突变体将在生产中得到应用。因此，发掘叶色突变体，开展研究，具有重要的理论意义和应用价值。叶绿素是植物叶绿体内参与光合作用的重要色素，叶绿素缺乏突变往往使植物发育迟缓、竞争力下降、生物学产量降低甚至导致死亡。叶绿素突变体的生存能力有很大差别：有些突变体的生存能力没有明显改变；有些表现为生存能力下降；极端突变类型表现为致死。生存能力与突变体叶绿素含量和光合能力有关。叶绿素缺失突变常常造成植株矮小、生长势减弱，作物减产。nguyen（1995）在烟草中发现一个半显性突变体sulfu，其突变纯合体黄化，苗期致死，其杂合体表现出叶绿素合成减少，植株表现为黄绿中间型。schmid等（1967）研究中指出叶绿素含量只有正常叶的1/30到1/8，突变体植株体现生长弱，株高低等特点。王新其（2005）等对2个水稻黄叶突变体y-347、y-427主要生育期及主要农艺性状进行了调查，发现分蘖期、拔节期和抽穗期比对照晚57天；生长势从幼苗开始就弱于野生型，单株瘦弱，蘖少，分蘖和抽穗不整齐，少数单株在分蘖后死亡；突变体的株高、单株有效穗、总粒数和实粒数等农艺性状均比野生型差。也有叶绿素缺乏突变体具有较高产量的报道。如水稻叶绿素b减少突变体“农安标810s”，其叶片呈淡黄色，叶绿素b含量下降幅度较大,使得叶片中叶绿素a /b比值高于野生型，从净光合速率来看,无论是在一天中的不同时间段,还是在不同发育时期,突变体均高于野生型，安农标810s繁殖产量、单株生物产量均高于安农810s（王聪田，2008）。叶绿素含量的多少同样是烟草的一个重要性状，因为不论是烤烟还是晒晾烟，烟叶成熟的标准中都要求细胞内叶绿素含量逐渐下降，叶片开始“落黄”（杨铁钊，2003）。由于每一株的全部叶片不可能同时落黄，于是就必须分期分批采收烟叶，给生产上增加了很大的工作量。如果某品种细胞内本身就含有较少的叶绿素或者在生长发育的一定时期所有叶片内叶绿素含量同时开始下降，就可能加快叶片的成熟，从而减少采收次数，于是可以设想用它作材料，育成植株上全部叶片可以一次或两次采收完毕的品种，以利于烟叶采收的机械化，减少劳动力的投入。本试验中的烤烟黄叶突变材料从幼苗到成熟植株都为黄色，不受环境影响，且大量研究表明，黄化（失绿）突变体叶绿素含量均发生明显降低。于是以该黄叶突变体为研究材料，通过对该黄叶突变材料的农艺性状以及化学成分的分析，为烤烟黄叶突变体的生理特性的研究及应用提供参考。一、材料与方法1.1 农艺性状测定1.1.1试验材料本试验中的黄叶突变体材料由烤烟品种g28和nc2326杂交f1植株进行花药离体培养时获得。田间试验于2012年在贵州省贵阳市贵州大学安顺烟草基地进行,前茬为玉米,土壤类型黄壤。供试材料为k326（ck）、黄叶突变体、k326 黄叶突变体的花药培养所获得的 dh 系（h1、h8）、黄叶k326 ( k326 黄叶突变体k326 bc4 f3)。1.1.2 实验方法采用重复随区组设计，株距0.6m，行距1.1m，15株/行，每个小区4行，重复3次，其农事操作和田间管理与当地优质烟生产相同。每行第1株和最后一株不参加数据测定，试验地四周设置保护行。随机选取长势相对一致的单株10株于假植期、团棵期、旺长期和成熟期，测定其株高、叶数、叶厚、腰叶长、腰叶宽等。农艺性状的测定参照中华人民共和国烟草行业标准（yc/t 142-1998）进行：株高：测量自地表茎基处至茎部顶端的高度。叶数：实际采收的叶数。腰叶长：自茎叶连接处至叶尖的直线长度。腰叶宽：叶面最宽处与主脉的垂直长度。叶厚：采用叶厚仪测单片烟叶厚度。1.2 光和色素含量的测定1.2.1 试验材料以不同生育时期（团棵期、旺长期、现蕾期、成熟期)的黄叶突变体、黄叶k326、k326 黄叶突变体的花药培养所获得的 dh 系（h1、h8）及其正常绿色品种k326叶片为材料。1.2.2 试剂及仪器95%乙醇、具塞试管、25ml容量瓶、uv2000型紫外分光光度计等。1.2.3 试验方法原理：根据叶绿素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其消光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯-比尔定律，有色溶液的消光度d与其中溶质浓度c和叶层厚度l成正比，即d=kcl。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，k值为该物质比吸收系数。比吸收系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的消光度而求得。叶绿素a、b在95%乙醇中最大吸峰的波长分别为665nm和649nm，类胡萝卜素为470nm，利用lichtenthaler法进行修正的公式计算叶绿素a（chla）、叶绿素b（chlb）及类胡萝卜素（caro）的含量，并计算叶绿素总含量（chl）、叶绿素与类胡萝卜素的比值（chl/caro）及叶绿素a和b的比值（chla/chlb）。按下列公式计算叶绿素a，叶绿素b和类胡罗卜素的浓度（mg/l），相加即得总浓度：ca=13.95d6657.88d649 cb=24.96d6497.32d665 cx=(1000d4702.05ca114.8cb）/245式中，ca、cb表示叶绿素a和b的浓度；cx表示类胡罗卜素的总浓度；d665 、d649、d470表示叶绿体色素提取液在波长665nm、649nm和470nm下的od值。步骤：分别选取以上材料各5株，每株采摘中部叶片各一片，去掉两端和叶脉，剪成2mm左右的细丝混匀，用电子天平精确称量0.1g放入25ml具塞刻度试管中（每个材料三次重复），加入15ml95%的乙醇，置于4的冰箱中浸提，期间摇晃3至4次，直至叶片全部变白，表明叶绿素已被浸提干净，然后将浸提液定容到25ml。以95%乙醇为空白对照，用分光光度计分别测定波长在665nm、649nm和470nm下的od值。按公式分别计算叶绿素a、b和类胡萝卜素的浓度（mg.l-1）及叶绿素总浓度。求得色素的总浓度后再按以下公式计算组织中各色素的含量（邹琪，2000）。1.3 化学成分的测定1.3.1 试验材料试验材料与农艺性状测定相同，供试材料为k326、黄叶突变体、k326 黄叶突变体的花药培养所获得的 dh 系（h1、h8）、黄叶k326 ( k326 黄叶突变体k326 bc4 f3)，以k326作对照。、1.3.2 试验方法于烟株团棵期、旺长期、现蕾期、成熟期，选取中部3片叶，每个材料10株。去除表面污渍、抽去主脉后，将叶片剪成碎块放入烘干箱内， 105杀青、60烘干、粉碎过40目筛,装入自封袋中以备化学成分分析，同样选取烤后的中部3片烟叶，去除表面污渍、抽去主脉后，将叶片剪成碎块放入烘干箱内，60烘干、粉碎过40目筛,装入自封袋中以备成分分析。分析项目分别为全氮含量、全磷含量、全钾含量、总糖含量、烟碱含量及蛋白质含量。（1）全氮采用过氧化氢-硫酸消化法（一）消化准确称取磨细混匀的烟样0.5g装入100ml准备好的凯氏烧瓶底部，标号。样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶茎上。加少量水使之湿润，再依次加浓硫酸8.0ml，混合湿润后慢慢地加热至开始冒出大量白烟，微沸约5分钟继续加热微沸2-5分钟，取下稍放冷，逐滴加入30%过氧化氢1.0ml。作1个空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正。（二）蒸馏和吸收蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。凯氏定氮蒸馏装置种类甚多，大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成。（三）滴定样品和空白蒸馏完毕后，一起进行滴定。含氮量运用下列公式计算：注：式中nv标准酸溶液的浓度(mol/l)；w试样重量(克)；0.0140每毫摩尔氮的克数。（2） 全磷含量的测定：矾铝黄比色法。吸取上述测n的消化待测原液10ml于50ml容量瓶中，加两滴二硝基酚指示剂，用naoh中和至刚呈黄色，加入10ml钒钼酸铵试剂，用水定容摇匀。15分钟后在分光光度计波长440nm处和2cm光径的比色槽进行比色测定，以空白溶液调节吸收值的零点。结果计算如下： （3） 全钾含量的测定：火焰光度法。吸取上述n、p的消化待测液5ml于100ml容量瓶中，用水定容摇匀，直接在火焰光度计上测定，记录检流计的读数，然后从标准曲线上查得待测液的钾的浓度。结果计算如下：注：式中ppm从工作曲线查得溶液中k的ppm数；分取倍数待测液体积/测读液体积；106将ug换算成g的除数。（4） 烟碱含量的测定：紫外分光光度法。在强碱性介质（ph10.5）naoh存在下进行蒸汽蒸馏，使全部植物碱包括烟碱、去甲基烟碱、假木贼碱和新烟碱等挥发而逸出，然后根据烟碱对259nm紫外光具有最大吸收，并且吸光度与烟碱含量正相关的性质，用紫外分光光度计测得待测液烟碱的吸光值，并进一步计算出烟碱的含量。称取测试样品0.6000g左右，将样品移置于500ml凯氏瓶中，加nacl25g，naoh3g，再加蒸馏水25ml左右，使样品全部在瓶底，然后将凯氏瓶连接于蒸汽蒸馏装置，用蒸汽蒸馏，用装有10ml2nh2so4溶液的250ml三角瓶，收集220-230ml馏出液，并检查烟碱是否蒸净（方法：用小试管接少量蒸出液加入12%硅钨酸和2nh2so4溶液各一滴，若混浊是没有蒸彻底，清澈时即可停止蒸馏）蒸净后移到250ml容量瓶稀释定容至刻度，用移液管吸取10ml到第二个容量瓶（100ml）中并用0.052nh2so4溶液稀释至刻度，将10ml2nh2so4溶液用蒸馏水稀释至250ml做空白，并按照测试样品溶液程序进一步将空白稀释至100ml，用紫外分光光度计在236nm、259nm、282nm处测吸光值，若吸光值在259nm处超过0.7时，则将所蒸馏得到的试样溶液需扩大稀释倍数。结果计算如下： 注：1.59：与硅钨酸重量法相比的校正系数其中a为校正后的吸光值，a236、a259、a282分别是在236、259、282nm处观察到的吸光值；34.3-眼见得比消光系数；f稀释倍数；v-蒸馏液的总体积（5） 总糖的测定：砷钼酸比色法（somogyi法）原理：在碱性条件下，还原糖可使铜离子（cu2+）还原成亚铜离子（cu+），氧化亚铜可与砷钼酸试剂生成蓝色溶液，生成的砷钼蓝溶液于560nm下光密度与还原糖浓度呈正比。此方法灵敏度高，测定范围为25200微克，而且产物很稳定。所以，不仅可以提高测定速度。还便于测定多份样品。因此，somogyi铜试剂比色法是目前糖定量测定中较好的方法之一。（一）制作标准曲线准确称取1.5克葡萄糖溶于1升水中，取100毫升再定容至1升，即150微克/毫升。取6支长试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8及1.00毫升150微克/毫升的葡萄糖溶液，再加水补充到1.0毫升。然后准确加入1.0毫升铜试剂，盖上玻璃塞。 放入沸水浴中（试管必须浸入1/2），自再沸腾起准确记时，煮沸20分钟， 然后立即取出，放在冷水中冷却5分钟。最后，加入1.0毫升砷钼酸试剂，再加7.0毫升蒸馏水稀释，摇匀后于560nm处比色。以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。最好同时平行做三份。（二）糖液的制备称取0.5克粉碎的样品，放入锥形瓶中，加入20毫升80%酒精，在70水浴中浸提30分钟，加入2ml醋酸铅（沉淀蛋白质），过滤前加2ml草酸钾，将上清液滤入100毫升容量瓶。残渣再分别用10毫升酒精浸提两次各20分钟，过滤，用热酒精冲洗滤渣，定容至刻度。吸取5毫升放入50毫升容量瓶，加水稀释到刻度。（烟草样品）此即为可溶性糖液。此糖液可用于烟叶还原糖、水溶性总糖的测定，而残渣可用于淀粉的测定。（三）水溶性总糖的测定吸取清洁后的可溶性糖液10ml放入25m1容量瓶中，加入比重1.103 hcl 2m1，煮沸5分钟，使之转化成还原糖后用5mol/l naoh溶液中和，用酚酞为指示剂加至淡红色为止。中和后用水稀释至刻度。准确称取稀释液1.0毫升，按标准还原糖测定步骤进行，测得吸光值，从标准曲线上查出还原糖含量。二、结果与分析2.1烤烟黄叶突变体及其dh系的农艺性状分析黄叶突变体及其dh系与正常绿色材料的叶色存在显著差异，其农艺性状也与绿色材料存在一定差异。本试验中选取烤烟黄叶突变体、黄叶k326、k326 黄叶突变体的花药培养所获得的 2个dh 系（h1、h8）和本地主栽品种k326（ck）作为供试材料。同时播种，相同的育苗条件和田间管理。观察发现突变体出苗的时间较对照略早，株高、叶长、叶宽大于对照，长势强于主栽品种k326。如图1所示，在还苗期黄叶突变体和h8株高均高于k326，黄叶k326和h1株高略低于k326，但各材料与k326株高差异不显著；在团棵期黄叶突变体株高略高于k326，黄叶k326、h1和h8株高略低于k326，但差异不显著；在旺长期黄叶突变体、黄叶k326、h8株高均高于k326且差异显著，h1株高低于k326；在成熟期株高最高为h1，其次是h8、黄叶k326、黄叶突变体，各材料株高均高于k326且差异显著。在假植期、团棵期和旺长期，除h1外各材料叶片数差异不大，在成熟期叶片数最多为h8，其次是h1、k326、黄叶k326、黄叶突变体，并且各材料间差图1 不同生育期株高差异异显著（图2）。假植期时黄叶突变体与黄叶k326相同，均为4.8片，较k326多0.3片，h1为4.1片，较k326少0.4片，h8为4.9片，较k326多0.4片。团棵期时黄叶k326和h8与k326相当，分别为11、10.9和11.1片，突变体为10片，h1为8.2片，旺长期黄叶突变体和黄叶k326均为15.5片，h1为10.6片，h8为16片，对照为14.6片，其中h1在团棵期和旺长期叶片数比k326少3-4片。成熟期h8叶片数为30.1片，h1叶片数为24.6片，k326叶片数为21.3片，黄叶k326叶片数为19.6片，最少为黄叶突变体15.7片，可能是因为黄叶突变体的侧芽较多、且侧芽生长较旺盛，打顶去掉的叶片较多，导致了黄叶突变体的叶片数较少。中部叶长如图3所示，假植期五者中部叶长差异不大，团棵期黄叶突变体中部叶长最大，为37.28cm，其次是h8、黄叶k326、k326，中部叶长分别为35.77cm、34.46cm、30.78cm最短为h1，中部叶长为25.31cm。旺长期黄叶突变体、黄叶k326、h8中部叶长均大于k326，h1中部叶长低于k326，中部叶长由长到短为黄叶k326、黄叶突变体、h8、k326、h1，中部叶长分别为60.82cm、59.32cm、57.18cm、49.94cm、44.75cm。成熟期黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8中部叶长均大于k326，最长为黄叶k326，中部叶长为72.4cm，其次是h8、黄叶突变体、h1，中部叶长分别为68.46cm、67.41cm、66.29cm，对照k326中部叶长最短，为63.46cm。腰叶宽如图4所示，各时期均为黄叶突变体最宽，成熟期时黄叶突变体与k326的差距达到最大值14.82cm。黄叶突变体的其中一个亲本g28的叶片较宽，图2 不同生育期叶数差异图3不同生育期中部叶长差异叶型为心型，这可能与黄叶突变体的叶片较宽有一定关系。在假植期k326比黄叶k326宽0.03cm，其余时期黄叶k326均比k326宽，成熟期是二者差距达到最大值5.69cm。在假植期、团棵期、旺长期h1中部叶均比k326窄，分别窄2.29cm、5.87cm、2.31cm，成熟期h1比k326宽2.56cm。在假植期h8与k326腰叶宽差异不大，团棵期、旺长期、成熟期h8均较k326宽，在成熟期时h8与k326的差距达到最大值3.37cm。图4不同生育期中部叶宽差异图5 各时期叶厚动态变化叶厚如图5所示，整个生育期均为k326的叶片最厚，黄叶突变体最薄，黄叶k326、h1和h8介于二者之间。叶厚整体呈现先下降后增加的趋势，旺长期达到最小值，可能是由于从假植期到旺长期，根、茎生长旺盛分配到的有机物较多，导致叶片逐渐变薄。旺长期之后植株发育基本完全，叶片的增长，增宽效率减小，但有机物还处于不断积累的状态，所以叶片再逐渐增厚。综合以上农艺性状分析，本黄叶突变体、黄叶k326、h8田间长势强于对照，h1在成熟期时长势也强于对照，可知黄叶突变性状有促进叶片长、宽增加的作用。烟草是以收获烟叶为目的的作物，叶片的增长和增宽有利于提高烟叶的产量和质量，有利于促进农民增产、增收，说明该黄叶突变材料具备较高的生产利用价值。 2.2 不同时期光合色素含量变化与分析在生长发育不同时期，对叶绿素a（chla）、叶绿素b（chlb），总叶绿素（chla+chlb）类胡萝卜素（cx）含量的分析表明(表1)，k326叶片中叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素和类胡萝卜素含量均极显著或显著大于同一生育时期黄叶突变体、黄叶k326、h1和h8。在团棵期黄叶突变体与k326色素含量差异最大，黄叶突变体的chla、chlb和cx分别较对照低62.7%、58.9%和64.6%，但不同色素含量降幅差异不大，表明此黄叶突变材料为总叶绿素缺乏型。叶片成熟时对照的chla显著大于黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8，chlb和cx差异不显著。k326、黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8叶片中叶绿素总含量(图6)和类胡萝卜素含量(图7)在各时期变化的进一步比较分析结果如下：k326总叶绿素含量从团棵期到现蕾期有小幅度升高，现蕾期达到最大值2.26 mg/g，之后色素含量急剧下降，到成熟期总叶绿素含量为0.78mg/g。黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8总叶绿素含量从团棵期到现蕾期也呈缓慢上升趋势，同样在现蕾期达到最大值，但各时期增加的幅度差异不大，从现蕾期到成熟期叶绿素含量也急剧下降，成熟期黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8的总叶绿素含量分别为0.60mg/g、0.61mg/g、0.63mg/g、0.63mg/g。黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8总叶绿素含量与对照差异最小的时期为成熟期，总叶绿素含量分别为k326的77.73%、78.89%,、80.95%和81.60%，色素含量的变化与植株叶色表现一致，表1 不同生育期k326、黄叶突变体、黄叶k326、h1和h8的色素含量（单位：mg/g）生长时期名称chlachlbchla+chlbchla/chlbcxchla+chlb/cx团棵期k3261.503 a0.450 b1.953 b3.340 0.497 a3.934 黄叶突变体0.943 b0.265 a1.209 a3.554 0.321 b3.760 黄叶k3260.899 b0.217 b1.115 b4.147 0.313 b3.569 h10.873 b0.203 b1.076 b4.300 0.270 b3.985 h80.855 b0.241 b1.096 b3.578 0.256 b4.280 旺长期k3261.533 a0.466 a1.999 a3.289 0.507 a3.943 黄叶突变体1.207 b0.317 b1.524 b3.812 0.414 b3.678 黄叶k3260.961 b0.265 c1.227 b3.626 0.318 b3.855 h10.942 b0.245 c1.187 b3.845 0.344 b3.450 h80.911b0.258 c1.169 b3.531 0.335 b3.490 现蕾期k3261.713 a0.543 a2.256 a3.154 0.559 a4.033 黄叶突变体1.240 b0.387 b1.627 b3.206 0.409 b3.982 黄叶k3261.095 b0.277 b1.372 b3.953 0.355 b3.863 h11.084 b0.289 b1.373 b3.7510.404 b3.394 h81.093 b0.267 b1.360 b4.0940.408 b3.337 成熟期k3260.524 a0.253 a0.777 a2.068 0.228 a3.406 黄叶突变体0.420 b0.184 a0.604 b2.275 0.180 a3.358 黄叶k3260.401 b0.212 a0.613 b1.887 0.171 a3.590 h10.416 b0.213 a0.629 b1.953 0.186 a3.382 h80.397 b0.237 a0.634 b1.675 0.193 a3.280 注：表中不同大小写字母表示差异达显著水平（分别为p=0.01和p=0.05）此时黄叶突变体、黄叶k326、h1和h8与对照的叶片均成熟落黄，但黄叶突变体、黄叶k326、h1和h8较正常绿叶品种的叶色黄，且同时落黄的叶片较多。 图6 各生育期总叶绿素含量变化类胡萝卜素含量的变化趋势与总叶绿素含量的变化相似，从团棵期到现蕾期k326、黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8类胡萝卜素含量变化均为小幅度升高，现蕾期达到最大值，其类胡萝卜素含量分别为0.60mg/g、0.41mg/g、0.36mg/g、0.40mg/g、0.41mg/g，从现蕾期到成熟期k326、黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8类胡萝卜素含量变化趋势均为急剧下降，在成熟期的类胡萝卜素含量分别为0.23mg/g、0.18mg/g、0.17mg/g、0.22mg/g、0.19mg/g。表明，类胡萝卜素与叶绿素含量总是表现为同增同减。图7各生育期类胡萝卜素含量变化由图8可见，k326、黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8在生长发育的团棵期、旺长期、现蕾期和成熟期，其叶片中叶绿素a、叶绿素b含量的比值在1.7到4.3之间，同一时期差异不大。k326和h1在各时期chla/chlb的比值变化均表现为下降的趋势，黄叶突变体、黄叶k326和h8的chla/chlb的比值变化表现为先上升，再下降的趋势，成熟期时达到最小。除成熟期外，黄叶突变体、黄叶k326、h1和h8的chla/chlb的比值均略大于k326，这说明黄叶突变体的叶绿素b含量略较小，叶绿素b的降低幅度略大于叶绿素a。这与前人对叶色突变体的研究结果不同，周祥胜（2013）报道水稻黄叶突变体的chl a/chl b比值在7.5-8.1之间，明显大于野生型的3.6-4.6之间；邵勤（2013）报道甜瓜突变体chl a/chlb为8.67，显著高于与对照4.10及杂交一代植株(4.31, 3.40)。图8 各生育期chla/chlb变化图9 各生育期chl/caro变化综合叶绿素含量的变化可知，黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8的光合色素均显著低于正常绿色品种，该黄叶突变体属总色素缺乏型。叶绿素总含量和类胡萝卜素含量的比值（图9）在同一时期差异不大，各时期均保持在3.5左右，说明黄叶突变体叶片黄绿色性状的产生与叶绿素总含量和类胡萝卜素含量的比值关系不大，叶色黄化主要是由于叶绿素含量降低所致。2.3 化学成分的变化烟叶内部化学成分是决定烟叶品质的内在因素，品质因素在很大程度上决定了烟草的经济价值。烟草的化学成分与烟草的品种有相当密切的关系，从栽培到供人们消费的烟制品的一系列过程中，对烟草吸食品质起主导作用的是烟草的化学成分，并直接影响烟制品的质量。2.3.1含氮化合物的变化2.3.1.1总氮含量变化n是构成蛋白质、酶等的主要成分，蛋白质是原生质最重要的成分，而酶是代谢作用的催化剂，所以n对烟草的生命活动有着重要的意义，同时，烟叶含氮量的多少对烟叶品质也有很重要的影响。图10 各生育期及烤后烟叶总氮含量变化从图10可以看出黄叶突变体氮含量从团棵期到旺长期上升，旺长期到现蕾期下降，现蕾期到成熟期下降，成熟期到烤后上升；k326氮含量从团棵期到旺长上升，旺长期到现蕾期上升，现蕾期到成熟期下降，成熟期到烤后上升；黄叶k326氮含量从团棵期到旺长上升，旺长期到现蕾期下降，现蕾期到成熟期下降，成熟期到烤后上升；h1氮含量从团棵期到旺长略上升，旺长期到现蕾期下降，现蕾期到成熟期下降，成熟期到烤后上升；h8氮含量从团棵期到旺长下降，旺长期到现蕾期下降，现蕾期到成熟期下降，成熟期到烤后上升。在团棵期黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8的氮含量差异不大，比对照k326的氮含量低，旺长期氮含量由高到低依次为黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8、k326，现蕾期各材料的氮含量差异不大，成熟期和烤后各材料的烟叶氮含量由高到低依次为黄叶突变体、h8、h1、k326、黄叶k326。从总体上看各材料现蕾到成熟这段时期氮含量显著下降，调制后明显上升。2.3.1.2蛋白质含量变化图11表明各材料蛋白质含量较高的时期为团棵到旺长这段时间，从现蕾期到成熟期各材料烟叶蛋白质含量显著下降。在团棵期黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8蛋白质含量差异不大并且显著高于对照k326，旺长期蛋白质含量由高到低依次为黄叶突变体、黄叶k326、h1、h8、k326，其中黄叶突变体与k326的蛋白质含量差异较大，现蕾期各材料的蛋白质含量差异不大，成熟期蛋白质含量由高到低依次为黄叶突变体、h8、h1、k326、黄叶k326，其中h1略高于k326，黄叶突变体略低于k326，黄叶突变体和h8显著高于k326。在烤后的烟叶中，黄叶突变体、h1的蛋白质含量略高于k326，黄叶k326和h8的蛋白质含量略低于k326，但均差异不大。烟叶中的蛋白质是卷烟中很多对人体有害成分的前体，因为在烤后烟叶中各材料和对照的蛋白质含量差异不大，所以该黄叶突变材料蛋白质含量对烟叶品质影响和k326相当。图11 各生育期及烤后烟叶蛋白质含量变化2.3.1.3烟碱含量变化烟碱是烟叶中最主要的生理活性物质。摄入适量的烟碱可以提神、振作精神、消除紧张状态等，烟叶质量好、烟碱适量的烟制品能给吸烟者带来适当的生理强度和好的香味和吃味。分析表明（图12）从团棵期到成熟期除黄叶突变体外烟碱含量整体呈上升趋势，其中黄叶突变体成熟期杀青与自然成熟比较烟碱含量下降。在团棵期、旺长期、现蕾期、成熟期烟碱含量差异不是很大，但在成熟期杀青后烟碱含量差异较大。图12 各生育期烟叶烟碱含量变化图13 各生育期烟叶磷含量变化2.3.2 磷含量变化分析表明各材料由团棵期到成熟期的p含量变化呈下降趋势(图13)。在团棵期h8的p含量最高且与k326差异较大，而黄叶突变体、黄叶k326、h1与k326差异不大，旺长期p含量变化由高到低依次为黄叶突变体、k326、h1、黄叶k326、h8，现蕾期p含量变化由高到低依次为k326、h1、黄叶k326、黄叶突变体、h8，其中h8与k326p含量差异较大，h1、黄叶k326、黄叶突变体与k326氮含量差异不大，成熟期k326p含量最高，p含量变化由高到低依次为k326、黄叶k326、h8、黄叶突变体、h1。2.3.3 钾含量变化k对烟叶有助燃的作用，在其他影响烟叶燃烧性的成分相同情况下，含钾较高的烟叶燃烧性较好，反之则差。分析结果表明各材料从团棵期到成熟期k含量变化整体呈下降趋势（图14）。在团棵期k含量由高到低依次为黄叶突变体、k326、h8、黄叶k326、h1，旺长期k含量由高到低依次为h8、黄叶k326、k326、h1、黄叶突变体，现蕾期k含量由高到低依次为黄叶k326、k326、h1、黄叶突变体、h8，成熟期k含量由高到低依次为k326、h1、黄叶k326、h8、黄叶突变体，在各个生育时期的k含量差异不大。图14 各生育期烟叶钾含量变化2.3.4 总糖含量变化图15中结果表明各材料从团棵期到旺长期总糖含量差异不大，并且总糖含量变化不大，变化趋势平缓，从旺长期到现蕾期总糖含量显著下降，变化最大的是k326、黄叶k326、黄叶突变体，并且现蕾期黄叶突变体、黄叶k326与k326的总糖含量差异不大，h1和h8总糖含量相当并且显著高于k326，从现蕾期到成熟期总糖含量显著上升，成熟期黄叶k326、hi、h8总糖含量略高于k326，黄叶突变体总糖含量显著低于k326。图15 各生育期烟叶总糖含量变化三、