第二十六章白细胞分化抗原和粘附分子的检测

第二十六章第二十六章 白细胞分化抗原和粘附分子的检测白细胞分化抗原和粘附分子的检测 Chapter 26 Assays for Leukocyte Differentiation Antigen and Adhesion Molecule 第一部分第一部分 教学内容和要求教学内容和要求 一、目的要求一、目的要求 掌握掌握：人白细胞分化抗原、细胞表面粘附分子及可溶性粘附分子的测定原理和方法；熟悉熟悉：粘附分子基 因及其表达的测定方法；了解了解：人白细胞分化抗原、粘附分子测定的临床应用。 二、教学内容 1白细胞分化抗原测定：白细胞分化抗原测定，白细胞分化抗原测定的应用。 2粘附分子的测定：细胞表面粘附分子的测定，可溶性粘附分子的测定，粘附分子基因及其表达的检测， 粘附分子测定的应用。 第二部分第二部分 测试题测试题 一、一、 选择题选择题 （一）单项选择题（一）单项选择题（A A 型题）型题） 1白细胞分化抗原测定方法目前主要采用 A. ELISA B. 酶免疫组化法 C. 放射免疫技术 D. 时间分辨荧光免疫法 E. 流式细胞仪测定法 2下列白细胞分化抗原哪个是人类 HIV 的主要受体 A.CD3 B.CD4 C.CD2 D. CD8 E. CD34 3参与 T 细胞黏附的白细胞分化抗原是 A.CD3 B.CD4 C.CD2 D.CD8 E.CD28 4分布于成熟 T 细胞和部分胸腺细胞表面的白细胞分化抗原是 A.CD3 B.CD4 C.CD2 D.CD8 E.CD28 5称为细胞毒 T 细胞抗原 4 的白细胞分化抗原是 A.CD3 B.CD4 C.CD152 D.CD34 E.CD28 6称为白细胞共同抗原的白细胞分化抗原是 A.CD45 B.CD79 C.CD152 D.CD34 E.CD28 7.称为白细胞功能相关抗原 2 的白细胞分化抗原是 A.CD45 B.CD79 C.CD152 D.CD2 E.CD28 8.称为白细胞功能相关抗原 1 的白细胞分化抗原是 A.CD11a/CD18 B.CD79/CD21 C.CD28/B7 D.CD4/CD8 E.CD152/CD8 9参与 B 细胞抗原识别和活化的白细胞分化抗原是 A.CD45 B.CD79 C.CD152 D.CD2 E.CD28 10.胰岛素依赖糖尿病的发病与哪类白细胞分化抗原有关 A.CD4 B.CD3 C.CD152 D.CD95 E.CD28 11.造血干细胞表面表达的白细胞分化抗原是 A.CD45 B.CD79 C.CD152 D. CD28 E. CD34 12正常人 CD4+/CD8+比值在 A.1.72.0 之间 B.0.81.2 之间 C.1.21.8 之间 D.1.02.0 之间 E. 0.51.0 之间 13免疫细胞化学法检测 CD 分子常计数多少个细胞，求得相应 CD 抗原阳性细胞百分率 A.100 B.200 C.300 D. 500 E. 1000 14. B 细胞表面最重要的 CD 分子是 A.CD3 B.CD4 C.CD8 D.CD40 E.CD80 15.细胞外可溶性粘附分子主要测定法是 A. ELISA B. 酶免疫组化法 C. 荧光免疫法 D. 流式细胞仪测定法 E. 时间分辨荧光免疫法 16 用于粘附分子测定的标本 A. 活组织切片 B. 淋巴细胞 C. 内皮细胞 D. 组织细胞提取物 E. 以上都是 17检测细胞表面粘附分子常用的方法是 A. 酶免疫发光法 B. 酶免疫组织化学法 C. 荧光免疫法 D. 流式细胞仪测定法 E. 时间分辨荧光免疫法 18在检测可溶性粘附分子中，ELISA 常用 A. 直接法 B. 间接法 C. 夹心法 D. 竞争法 E. 组化法 19细胞粘附分子基因的多态性检测的验证方法是 A. PCR-SSCP B. PCR-RFLP C. 实时荧光 PCR 测定技术 D. PCR-直接测序法 E. 以上都不是 20 炎症的发生与白细胞在血管壁上的哪些变化有关 A. 附壁滚动 B. 激活 C. 紧密粘附 D. 移行 E. 以上都是 21.与肿瘤的发展和扩散有关的是 A. CD4 分子 B. CD4 分子变异体 C. CD8 分子 D. CD8 分子变异体 E. CD44 分子变异体 22粘附分子作用是 A. 细胞信号传导与活化 B. 细胞的伸展与转移 C. 细胞的生长与分化 D. 创伤的愈合 E. 以上都是 （二）多项选择题（二）多项选择题（X X 型题）型题） 1. 白细胞分化抗原参与哪些生理或病理过程 A. 免疫应答 B. 炎症反应 C. 免疫细胞迁移 D. 免疫细胞分化成熟 E. 胰岛素依赖糖尿病 2. 白细胞分化抗原测定方法包括哪些 A. 荧光免疫显微技术 B. 免疫细胞化学技术 C. 抗体致敏细胞花环法 D. 流式细胞术 E. 补体结合实验 3白细胞分化抗原测定的应用 A血液病的诊断与洽疗 B血栓与出血性疾病的诊断与治疗 C艾滋病的诊断与治疗 D疾病发病机制的研究 EIg 含量的研究 4.流式细胞仪测 CD 分子下列哪些是正确的 A. 特异性高 B. 快速 C. 准确 D. 仪器普及 E. 操作先进 5.以下哪些是 CD 分子功能特点 A. 与 T 细胞识别、黏附、活化相关 B. 参与 T 细胞黏附 C. 作为协同刺激分子，参与 T、B 淋巴细胞的活化增殖 D. 参与 TCR 复合物的组成 E. 参与 B 细胞抗原识别和活化 6免疫球蛋白 Fc 受体（FcR）有哪几种 A FcR BFcR C.FcR D.FcR E.FcR 7下列哪些项是粘附分子结构 A. 活化区 B. 胞内区 C. 胞浆区 D. 疏水区 E. 胞外区 8.关于肿瘤转移的描述下列哪些是正确的 A. 肿瘤转移与粘附分子密切相关 B. 内皮细胞肿瘤细胞识别粘附分子 C. 不同肿瘤其粘附途径不同 D. 恶性肿瘤细胞的转移与炎症时白细胞的浸润一样 E. 以上都不是 9.器官移植排斥时下列哪些是正确的 A. 粘附分子在内皮细胞表达增加 B. 粘附分子在肾小球表达增加 C. 粘附分子在浸润白细胞上表达增加 D. 粘附分子在移植物上表达增加 E. 粘附分子抗体有抑制作用 10.目前研究粘附分子在探讨哪些疾病发生机制有意义 A. 炎症 B. 肿瘤发生 C. 肿瘤移植 D. 免疫应答 E. 移植排斥 11.细胞表面黏附分子的测定方法有哪些 A.酶免疫组织化学测定 B.免疫荧光方法 C.流式细胞术 D.时间分辨荧光免疫测定法 E.酶免疫测定法 12.可溶性黏附分子的测定方法主要有 A.酶免疫组织化学测定 B.免疫荧光方法 C.流式细胞术 D.时间分辨荧光免疫测定法 E.酶免疫测定法 13.时间分辨荧光免疫测定方法用于内皮细胞、淋巴细胞等细胞表面黏附分子的测定，其具有哪些特点 A. 不受非特异性荧光的干扰 B. 可同时用于多种黏附分子的测定 C. 有放射性污染的处理问题 D. 有较好的灵敏度 E. 方法准确、可靠 14.酶免疫方法用于细胞表面黏附分子测定的缺点包括哪些 A. 存在内源性酶的干扰 B. 测定灵敏度差 C. 测定不够简单方便 D. 固定剂可导致非特异性显色 E. 方法难以掌握 15.细胞黏附分子基因表达（mRNA）的测定方法主要有哪些 A.PCR-SSCP B.PCR-RFLP C.Northern-blot D.RT-PCR E.PCR-ASO 16.PCR-SSCP 用于黏附分子基因多态性的检测具有下述哪些特点 A.适用于大样本的基因多态性检测 B.适用于未知的基因多态性检测 C.测定点突变，不易出现假阳性 D.快速灵敏 E.检测方法可以标准化 二、填空题二、填空题 1. 白细胞分化抗原检测方法包括 、 、 和 。 2. CD3 分子与 和 组成 TCR 复合物 。 3粘附分子根据存在形式分为 和 。 4CD4 粘附分子的配体是 ，CD8 粘附分子的配体是 。 三、名词解释三、名词解释 1.免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily) 2.E-选择素家族（E-selectin） 3.粘附分子（adhesion molecule） 四、问答题四、问答题 1. 简述时间分辨荧光免疫测定法的特点？ 2. 实时荧光 PCR 方法的优点有哪些？ 3. 细胞粘附分子基因的多态性测定有哪些？ 4. 简述酶组化法的基本原理？ 5. 试述细胞表面粘附分子的测定有哪些？ 6. PCR-SSCP 用于细胞黏附分子基因的多态性测定的主要缺点是什么？ 7. 实时荧光 PCR 方法用于细胞黏附分子基因的多态性测定的主要缺点是什么？ 8. 简述细胞表面黏附分子测定的意义。 9. 简述可溶性黏附分子测定的临床意义。 10.简述白细胞分化抗原检测在艾滋病诊断和治疗中有哪些意义？ 11.简述白细胞分化抗原及其单克隆抗体在基础免疫学方面有哪些应用？ 12.简述白细胞分化抗原及其单克隆抗体在临床免疫上主要有哪些应用？ 第三部分第三部分 参考答案与题解参考答案与题解 一、一、 选择题选择题 （一）单项选择题（一）单项选择题（A A 型题）型题） 1.E 2.B 3.C 4.A 5.C 6.A 7.D 8.A 9.B 10.D 11.E 12.A 13.B 14.D 15.A 16.E 17.B 18.C 19.D 20.E 21.E 22.E （二）多项选择题（二）多项选择题（X X 型题）型题） 1.ABCDE 2.ABCD 3.ABCD 4.ABCE 5.ABCDE 6.ABE 7.BCDE 8.ABCD 9.ABCE 10.ACDE 11.ABCDE 12.ABDE 13.ABDE 14.AD 15.CD 16.ABD 二、填空题二、填空题 1. 荧光免疫显微技术，免疫细胞化学法，抗体致敏细胞花环法，流式细胞术 2.TCR, TCR 3.细胞表面粘附分子， 可溶性粘附分子 4.MHC-类分子， MHC-类分子 三、名词解释三、名词解释 1.免疫球蛋白超家族:该类细胞黏附分子具有与 Ig 相似的结构特征，即具有一个或多个 IgV 样或 C 样结构 域，具有黏附分子功能，种类繁多，统称为 IgSF，其识别的配体多为 IgSF 分子和整合素家族分子。主要 参与介导细胞间黏附和信号传递，参与淋巴细胞法与分化，炎症反应和免疫应答及淋巴细胞的归巢和再循 环。 2.E-selectin：选择素家族成员，主要表达于血管内皮细胞上，其与配体结合后，参与介导白细胞向炎症区 和肿瘤细胞转移。 3.粘附分子：指介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合的一类分子糖蛋白，分布于细胞表面或 细胞外基质，参与细胞信号传导与活化、细胞的伸展和移动、细胞的生长及分化、肿瘤转移和创伤愈合。 四、问答题四、问答题 1不受特异荧光的干扰。可同时用于多种因子的测定没有放射性污物的处理问题。 2扩增和产物测定同时完成，扩散及应答在测定的始终是处于闭管状态，污染的可能性小。简便快 速。可同时测定大量标本。 3（1）PCR-SSCP （2）PCR-RFLP （3）实时荧光 PCR （4）PCR-ASO （5）PCR-SSO （6）PCR-SSP 4酶标抗特异性粘附分子的 抗体与处理好的组织切片标本反应后，如组织细胞存在相应的粘附分子，则 酶标抗体即可与其结合，再加入颗粒性底物显色。 5. 酶免疫组化法；荧光免疫法；流式细胞仪测定法；时间分辨荧光免疫测定法；酶免疫法。 6. 主要缺点是：测定点突变时，不能排除假阳性，测定特异性必须由 DNA 测序来证实；PCR 的测定 操作难于标准化。PCR-SSCP 测定受影响因素较多，没有一个适合于各种情况下的通用实验条件，实验室 必须根据自己的摸索，得出自己实验室的最适实验条件。因此，PCR-SSCP 对实验操作者的经验要求较高， 不好掌握，应用不是很普遍。 7. 优点主要是：扩增和产物测定同时完成，扩增反应管在测定的始终总是处于闭管状态，因此出现扩 增产物污染的可能性小；简便快速；可同时测定大量样本。缺点是：对每种突变，需制备得到相应 的荧光标记特异探针；需要特殊的实时荧光测定设备。 8. 组织细胞活检标本的特定细胞黏附分子测定，可作为恶性肿瘤诊断和预后的指标。LI-钙黏素是肠道特 异的细胞黏附分子，胃活检组织标本的 LI-钙黏素免疫组化测定可作为胃发生和肿瘤形成及分化较好的腺 癌的一个重要的早期辅助诊断指标。对组织标本的 E-钙黏素的免疫组化测定为阴性，可能预后不良，如 E-钙黏素测定可作为已分化的甲状腺癌的一个独立的预后指标。 9.血液循环中可作为疾病辅助诊断的可溶性细胞黏附分子主要有免疫球蛋白超家族的 VCAM-1 和 ICAM-1 和选择性家族。ICAM-1 在肝病、寄生虫病如阿米巴病、贾第虫病和弓形体病等、转移癌、溃疡性结肠炎 等的患者血循环中浓度明显增高，其测定可作为血管内皮损伤及疾病严重程度的诊断指标。VCAM-1 在肾 功能损害、自身免疫病如系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎等、器官移植排斥、深静脉栓塞等的患者血循 环中有明显增高。在深静脉栓塞手术后的病人血清中检测 VCAM-1，可作为静脉血栓症的早期诊断指标。 在器官移植的病人，在移植器官发生排斥反应前数天，即可测出病人血液中 VCAM-1 有明显升高，可作 为器官移植后监测早期排斥发生的非侵入性指标。 E、L 和 P 三种类型的选择素均可出现于血循环中，可溶性 E-选择素的增高可见于糖尿病、恶性肿瘤、 自身免疫病、败血症、结节性多动脉炎和巨大细胞动脉炎等疾病患者血循环中，这种增高与疾病的活动性 无关，而与器官受损伤的程度相关。因此，血液中可溶性 L-选择素水平的测定可作为疾病严重程度及预 后的辅助诊断指标。血液中可溶性 L-选择素的增高可见于败血症、HIV 感染和 AIDS 患者，L-选择素具有 抑制白细胞对内皮细胞黏附的功能，因此，血液中可溶性 L-选择素的增高可作为疾病预后的辅助诊断指 标。血液中可溶性 P-选择素的增高可见于溶血性尿毒症和血小板减少性紫癫患者，P-选择素可阻断 TNF 对-整合素的激活，进而抑制中性粒细胞与内皮细胞的黏附。 10.白细胞分化抗原检测在艾滋病诊断和治疗中的意义在于：CD4 分子胞膜外区第一个 V 样结构域是 人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus , HIV）外壳蛋白 gp120 识别的部位，因此人类 CD4+分 子是 HIV 的主要受体。HIV 感染 CD4+细胞后，通过损伤细胞膜、干扰细胞代谢、形成合胞体、CTL 和抗体 破坏 HIV 感染的细胞等多种机制，选择性地使 CD4+细胞数量锐减和