脂质体介导转染n2a细胞的优化方法

脂质体介导转染 N2a 细胞的优化方法 赵云鹤赵云鹤 1，王若楠 ，王若楠 2，杨桂姣 ，杨桂姣 1，陆 ，陆 利利 1 1山西医科大学人体解剖学教研室，山西省太原市 030001；2山西医科大学七年制临床医学系， 山西省太原市 030001 Optimization of N2a cell transfection mediated by liposome Zhao Yun-he1, Wang Ruo-nan2, Yang Gui-jiao1, Lu Li1 1Department of Anatomy, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China; 2Seven-year Program of Clinical Medicine, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China 摘要摘要 背景背景：阳离子脂质体介导的细胞转染具有结果可靠、可重复性强的特点，但面临一个共同的缺 点，就是转染效率常较低。 目的目的：探讨阳离子脂质体转染 N2a 细胞(小鼠神经胶质瘤细胞)的优化方法。 方法方法：采用 24 孔培养板，1.5 L 阳离子脂质体 Lipofectamine LTX 介导，通过贴壁法和 悬浮法，将 500 ng 带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组质粒 pcDNA3-GFP 转入 N2a 细胞， 倒置荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白表达情况，并比较二者转染效率。采用悬浮转染法， 将 500 ng 质粒 DNA 分别用 1.0，1.5，2.0，2.5 L Lipofectamine LTX 进行转染，探 讨最适脂质体和 DNA 比例。 结果与结论：结果与结论：1.5 L 脂质体/500 ng DNA，悬浮法转染效率显著高于贴壁法转染效率(P 0.01)；1.0，1.5，2.0，2.5 L Lipofectamine LTX 对 500 ng 质粒 DNA 的转染效率分 别为(76.603.85)%，(80.004.17)%，(88.005.89)%，(54.964.23)%，提示脂 质体 2.0 L 与质粒 DNA 500 ng 的转染效率最高。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞； 血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程 全文链接： 关键词关键词 ： 组织构建； 组织工程； 脂质体； 贴壁转染； 悬浮转染； N2a 细胞； 绿色荧光蛋白； Abstract： BACKGROUND: Cationic liposome-mediated cell transfection is reliable and repeatable. However the transfection efficiency is often low. OBJECTIVE: To study the optimized methods for gene transfection mediated by liposome into N2a cells (mouse neuroblastma cells). METHODS: Using traditional adherent method and improved suspension method, 500 ng recombinant plasmid pcDNA3-GFP carrying green fluorescence protein was transfected into N2a cells in 24-well culture plate, which was mediated by 1.5 L Lipofectamine LTX Reagent. The expression of green fluorescent protein was observed by inverted fluorescence microscope, and the transfection efficiencies at different transfection ways were calculated. By using improved suspension transfection method, 500 ng plasmid DNA was transfected with different doses of Lipofectamine LTX Reagent (1.0, 1.5, 2.0, 2.5 L). The optimal ratio of liposome and DNA was explored. RESULTS AND CONCLUSION: The transfection efficiency of suspension transfection method was significantly higher than that of the tranditional adherent method (P 0.01) when using 1.5 L liposome/500 ng DNA. The transfection efficiency of the 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 L Lipofectamine LTX on 500 ng plasmid DNA was respectively (76.603.85)%, (80.004.17)%, (88.005.89)%, (54.964.23)%. It showed the 500 ng DNA and 2.0 L liposome achieve the highest transfection efficiency. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞； 血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程 全文链接： Key words： liposome; transfection; green fluorescent protein; 中图分类号中图分类号: R318 基金资助基金资助: 山西省研究生创新基金项目(20133075)；山西省高等学校大学生创新创业培训项 目(2013119)；山西医科大学青年科技研究基金项目(02201101) 通讯作者通讯作者: 陆利，博士，教授，硕士生导师，山西医科大学人体解剖学教研室，山西省太原市 030001 作者简介作者简介: 赵云鹤，女，1981 年生，山西省阳泉市人，山西医科大学在读博士，主要从事神 经干细胞衰老机制的相关研究。 引用本文引用本文: 赵云鹤,王若楠,杨桂姣等. 脂质体介导转染 N2a 细胞的优化方法J. 中国组织工程研究, 2014, 18(29): 4669-4674. Zhao Yun-he,Wang Ruo-nan,