南方水稻黑条矮缩病测报调查技术规程

点击此处添加中国标准文献分类号 贵 州 省 地 方 标 准 X/ 方水稻黑条矮缩病测报调查技术 规程 点击此处添加标准英文译名 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （送审讨论稿） 本稿完成时间： 2015年 7月 10日 布 施 贵州省质量技术监督局 发布 目 次 前言 . 2 1 范围 . 3 2 术语和定义 . 3 3 南方水稻黑条矮缩病田间症状与识别 . 3 4 南方水稻黑条矮缩病检测方法 . 3 5 南方水稻黑条矮缩病发生程度 . 4 6 系统调查 . 4 7 大田普查 . 4 8 测报资料收集和汇总 . 5 附录 A（资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病田间症状与识别 . 6 附录 B（规范性附录） 南方水稻黑条矮缩病检测方法 . 7 附录 C（资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病病情严重度分级标准 . 9 附录 D（资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病病情指数计算 . 10 附录 E（资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病发生程度分级标准 . 11 附录 F（资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病模式报表 . 12 附录 G（资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病发生防治基本情况调查记载表 . 14 前 言 本标准按 2009标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 本标准起草单位：贵州大学，贵州省植保植检站 本标准主要起草人： 金林红、 宋宝安、金星、谈孝凤、贺鸣 本标准为首次发布。 南方水稻黑条矮缩病测报调查技术 规程 1 范围 本标准规定了南 方水稻黑条矮缩病田间症状与识别、 检测 方法 、病害发生程度 、系统调查、大田普查、测报资料收集和汇总。 本标准适用于 贵州 省南方水稻黑条矮缩病的测报调查。 2 术语 和 定义 下列术语和定义适用于本 文件。 方 水稻 黑 条 矮缩病 毒 南方水稻黑条矮缩病毒 (一种 粒体球状斐济 属水稻 病毒 病， 白背飞虱（ 其主要的田间传毒介体 。病毒 存在于寄主植物韧皮部筛管及伴胞内，导致寄主植物矮化、茎 表纵向条状排列小瘤突等症状。 毒介体 南方水稻黑条矮缩病毒传毒介体为白背飞虱 (属昆虫纲、同翅目、飞虱科。 成虫与若虫皆能传毒。 毒率 检测 样本（ 水稻植株或白背飞虱）病毒 数 占 样本（ 水稻植株或白背飞虱）数量的百分率。 、 株率 调查发病株数占调查总株数的百分率。 丛率 调查发病丛数占调查总丛数的百分率。 田率 调查已发病田块数占总田块数的百分率。 3 田间 症状与识别 南方水稻黑条矮缩病 田间 症状与识别，参见附录 A。 4 检测方法 南方水稻黑条矮缩病 检测方法 ，参见附录 B。 5 病发生程度 情严重度分级 标准 南方水稻黑条矮缩病病情严重度分级 标准 ，参见附录 C。 情 指数计算 南方水稻黑条矮缩病病情指数计算 ，参见附录 D。 生程度分级 南方水稻黑条矮缩病发生程度分级 , 参见附录 E。 6 系统调查 查时间 自白背飞虱迁入水稻田高峰后起（一般早稻 4月下旬至 5月上旬，中稻 5月下旬至 6月上旬，晚稻 7月下旬至 8月上旬），每 15 次（可结合白背飞虱虫量调查同时进行），至 9月中旬调查植株结束。每次调查后，随机取白背飞虱 100头，检测带毒率。 查方法 水稻秧田和大田，在白背飞 虱带毒虫量高、常年南方黑条矮缩病发病比较重、有代表性的地区，选取不同感病品种、不同播栽期具有代表性的类型田各 1块进行调查。秧田采取对角线 5点取样法，每点随机取 20株秧苗，共 100株，检测带毒率，检测方法见附录 B。大田采取平行线上等距离多点取样法，每块内调查 100丛（即两边各 10个点，每点 5丛），记录发病丛数、发病株数、严重度，计算病株率、病丛率、病情指数。结果记入表 1。 表 1 南方水稻黑条矮缩病田间发病系统调查表 调查地点： 州（市） 县 (市、区 ) 乡村 调查日期： 年 月 日 调查 点数 类型田 品种 调查总丛数(丛 ) 病丛数 (丛 ) 病丛率（ %） 调查总株数(株 ) 病株数(株 ) 病株率 % 严重度 病情 指数 备 注 0 1 2 3 4 1 2 7 大田普查 查时间 秧田期、分蘖初期、成熟期各一次。 查范围 南方水稻黑条矮缩病发生区。 查方法 秧田采取对角线 5点取样法，每点随机取 20株秧苗，共 100株，检测发病率。大田期分别选择不同类型田共 20取 平行线上等距离多点取样法，每块内调查 100丛（即两边各 10个点，每点 5丛），记载总丛数、病丛数，计算病丛率。结果记入表 2。 表 2 南方水稻黑条矮缩病田间病情普查表 调查地点： 州（市） 县 (市、区 ) 乡村 调查 时间 (月 品种 生 育 期 调查 田块 （块） 发病 田块 （块） 病田率 （ %） 调查 丛数 （丛 发病 丛数 （丛） 病丛率 ( ) 8 测报资料收集和汇总 报资料收集 (1)水稻播种期和各期播种的水稻面积及其它必须的栽培管理资料； (2)主要品种的栽培面积、生育期和抗性情况； (3)当地气象台（站）主要气象要素的预测值和实测值。 式报表 测报站每年定时填写南方水稻黑条矮缩病模式报表 （参 见附件录 F）， 报上级测报部门 。 本情况统计 基本情况统计 ，参 见附录 G。 A A 附 录 A （资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病田间症状与识别 南方水稻黑条矮缩病主要田间症状表现为：分蘖增加，叶片僵直，叶色深绿，叶背的叶脉和茎秆上现初蜡白色，后变褐色的短条瘤状隆起（蜡白条），不抽穗，或穗小，空秕率高，不 同生育期染病后的症状略有差异。苗期发病，心叶生长缓慢，叶片短宽、僵直、浓绿，叶脉有不规则蜡白色瘤状突起，后变黑褐色，根短小，植株矮小，不抽穗，常提早枯死。分蘖期发病，新生分蘖先显症，主茎和早期分蘖尚能抽出短小病穗，但病穗缩藏于叶鞘内。拔节期发病，剑叶短阔，穗颈短缩，结实率低。叶背和茎秆上有白色蜡条。 水稻发病后典型表现为：高位分蘖、茎节部倒生须根、茎秆上有白色（或黑褐色）蜡条。 B B 附 录 B （规范性附录） 南方水稻黑条矮缩病检测方法 理和方法 针对南方水稻黑条矮缩病基因， 设计特异性引物 ,采用 测 的水稻和白背飞虱体内南方水稻黑条矮缩病 。 器设备 (1)高速台式冷冻离心机 ； (2)琼脂糖凝胶电泳仪 ； (3)电泳凝胶成像系统 ； (4)超净工作台 ； (5)水浴锅 ； (6)液氮罐。 (7)研钵； 验耗材 (1)乳胶手套； (2)10 L, 100 L, 1000 L)； (3)1.0 .5 (4)烧杯： 10 50 100 000 (5)液氮； (6)量筒： 10 50 100 000 (7)试 剂瓶： 50 100 500 000 (8) (9)( (10) (11) (12)000 (13)M (14) (15)50 验步骤 本 总 (1) 剪取 0.1 本茎部或 5头飞虱样本组织至研钵中，液氮下充分研磨至粉末状，加入 1 ，继续研磨匀浆并转移至 1.5 (2) 4 ， 12,000 上清转移至无 .5 (3) 按照上清的总体积，加入 1/5体积的氯仿，盖好试管盖，剧烈震荡 30 s，室温放置 5 (4) 4 ， 12,000 5 上层无色的氯仿相转移至新的无 .5 (5) 加入等体积 的异丙醇，混匀，冰箱中冻存 20 (6) 4 ， 12,000 0 (7) 加入 1 5% 乙醇 ( 洗涤沉淀； (8) 4 ， 12,000 上清，短暂离心后，使用 超净台上吹干沉淀，加入 30 (0.1 g 水稻、 5头白背飞虱 )。 转录及 转录反应 以提取的总 随机引物合成 以合成 行 增。使用常规 应体系， 94 变性 2 94 变性 30 s， 58 退火 30 s， 72 延伸 70 s， 35个循环； 72 保持 10 12 保持 10 脂糖凝胶电泳 物于 10 g /L 琼脂糖凝胶中电泳，用溴化乙锭染色后在凝胶成像系统下观察记录 ， 并与核酸分子量标准 较被扩增产物的大小 ，确定样本是否带毒。 果计算 水稻 植株带毒率 =感病植株株数 /检测总株数（） 白背 飞虱带毒率 =感病飞虱虫量 /检测总虫量 （） C C 附 录 C （资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病病情严重度分级 标准 南方水稻黑条矮缩病病情严重度分级 标准 见表 表 方水稻黑条矮缩病病情严重度分级 标准 级 别 症 状 0 级 健株，无症状； 1 级 植株 矮缩不明显，能抽穗，但穗小，结实率低，在中上部叶片基部可见纵向皱褶；在茎秆下部节间和节上可见蜡白色或黑褐色隆起的纵向排列小瘤突； 2 级 植株矮缩丛生，高度不及正常株的 3/4，有的能抽穗，但相对抽穗迟而小、实粒少、粒重轻，半包在叶鞘里，剑叶短小僵直； 3 级 植株分蘖 增多丛生，矮缩明显，高度不及正常株的 1/2，主茎及早生分蘖尚能抽穗，但穗头难以结实，或包穗，或穗小，似侏儒病； 4 级 植株严重 矮缩，高度不及正常株的 1/3，后期不能抽穗，常提早枯死。 D D 附 录 D （资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病病情指数计算 南方水稻黑条矮缩病病情指数计算 公式如下： 100d 式 中： A 病情指数； 各级严重度病丛数； I 各级严重度代表值； M 调查总丛数； 严重度最高级代表值； E E 附 录 E （资料性附录） 南方水稻 黑条矮缩病发生程度分级标准 南方水稻黑条矮缩病流行程度以当地发病的平均病情指数表示，划分为 5级，各级指标见表 表 方水稻黑条矮缩病发生程度分级标准 类型田 发生程度 轻发生 （ 1 级） 中等偏轻发生 （ 2 级） 中等发生 （ 3 级） 中等偏重发生 （ 4 级） 大发生 （ 5 级） 平均病情指数 20 20 F F 附 录 F （资料性附录） 南方水稻黑条矮缩病模式报表 表 方水稻黑条矮缩病灯下、田间白背飞虱带毒率检测模式报表 序号 报表内容 结果 调查日期 灯下白背飞虱样本量（头） 灯下白背飞虱样本带毒量（头） 灯下白背飞虱样本带毒率（ %） 带毒率比上年增减（ %） 带毒率比历年平均数增减（ %） 田间白背飞虱样本量（头） 田间白背飞虱样本带毒量（头） 田间白背飞虱样本带毒率（ %） 带毒率比上年增减（ %） 带毒率比历年平均数增减（ %） 预计南方水稻黑条矮缩病发生程度 (级 ) 预计南方水稻黑条矮缩病 发生面积（万亩） 注： 此表在 5始，调查两次。 表 方水稻黑条矮缩病田间植株发生情况系统调查模式报表 序号 报表内容 调查结果 调查日期 稻作类型 秧田病株率（ %） 本田病丛率（ %） 平均严重度（ %） 病情指数 注： 此表自田间见病后每月逢 1、 15日 调查汇报 1次。 表 方黑条矮缩病田间发生情况普查模式报表 序号 报表内容 调查结果 调查日期 稻作类型 生育期 本田病田率（ %） 本田病丛率（ %） 发病面积（ 防治面积（ 注： 秧田期、分蘖初期、成熟期各调查一次，并于调查后第二个工作日上报。 G G 附 录 G （资料性附录） 南方水稻黑条