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文档简介

其一患房间隔缺损、肺动脉瓣 狭窄另一为正常单卵双胎儿童 之间差异表达基因的分析 吕小东 刘迎龙 刘宗正 赵勇 刘玉清 先 心 病 研 究 室 Fuwai HospitalCAMC . 单卵双胎特点 基因型完全相同 母体环境基本相似 单卵双胎儿童其一患CHD 另一正常原因 u患儿基因结构发生改变 u患儿基因表达异常 研 究 目 的 通过分析其一患ASD、PS另一为正 常单卵双胎儿童之间基因表达的差异， 寻找与ASD、PS相关基因 主要实验材料 uXL1 BLUE细菌菌株 u人类8-10周龄胎儿心脏cDNA文库 u一岁，男性，其一患先天性心脏病房 间隔缺损和肺动脉瓣狭窄另一为正常 单卵双胎儿童之外周静脉血中白细胞 方 法 u提取患儿与正常儿童白细胞 mRNA umRNA转化为cDNA u放射性物质标记cDNA作为差示筛选的探针 u差示筛选患儿与正常儿童差异表达的cDNA 片段 u测定差示筛选所得cDNA片段序列 u分析测序结果 技 术 路 线 细 菌胎儿心脏cDNA文库 ASD、PS儿童 cDNA探针 正常儿童 cDNA探针 差示筛选技术路线示意图 结 果 . 一患CHD另一为正常单卵双胎 差示筛选 患儿正常儿 单卵双胎中正常儿童 表达高于患CHD儿童的EST u新EST 5条 u已知基因 36条 单卵双胎中患CHD儿童 表达高于正常儿童的EST u新EST 7 u已知基因 41 讨 论 . 选用差示筛选技术 筛选差异表达基因的原因 u差示筛选(Differential Screening， DS)技术和其他类似技术相比： 所获差异片段较长 较为经济 u缺点：假阳性高 （差异表达基因筛选技术的共有缺点 ） u所在实验室此技术应用非常成熟 白细胞基因表达变化部分反应心 脏的生理或病理状态变化？ 1.构成心肌细胞的结构基因在白细胞中表达 2.心肌肥厚的高表达基因与白细胞中高度表 达的部分基因相同 较重要的与ASD、PS相关的 已知功能基因 与细胞分化相关基因 6 与细胞信号传递相关基因 13 参与蛋白表达基因 21 与细胞结构和运动相关基因 7 代谢相关基因 8 合计 55 clathrin light-chain A 基因 u正常儿童表达高于患CHD儿童 u此基因参与细胞结构和运动 u已有文献报道其参与神经嵴的发育，推 测可能与圆锥动脉干畸形发生相关 结 论 u利用差示筛选技术，比较单卵双胎其 一患CHD另一为正常儿童之间的基 因表达差异，是一种有效寻找CHD 相关基因的方法。 u本实验发现了一些与先天性房间隔缺 损
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