MTA1在肝细胞癌中的表达及临床意义.pdf

分类号：r 7 3 5 7 密级： 单位代码：10 42 2 学号：2 0 0 8 12 8 19 山囊办孑 硕士学位论文 s h a n d o n gu n i v e r s i t ym a s t e r i st h e s i s 论文题目：m t a l 在肝细胞癌中的表达及临床意义 e x p r e s s i o na n dc l i n i c a l“ g n i f i c a n c e o ftheressjon s 1 2 n m c a n c e m t a1i nh e p a t o c e u u l a rc a r c i n o m a 作 专 导 合作 2 0 11 年5 月1 0 日 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明 的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 至丕 e l期：矽! ：! 夕 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者躲丑翩虢暇日 期：雹! ! ：! ? 目录 中文摘要”1 英文摘要4 符号说明”8 前一言9 刖看 第一部分m t a l 在肝癌组织中的表达及与n m 2 3 、c m y c 相关性的研究 材料和方法11 结果l8 讨论l9 结论2 3 附图表2 4 第二部分m t a l 与肝癌细胞系侵袭转移潜能关系的研究 材料和方法2 7 结果。3 7 讨论3 8 结论4 0 附图表4 1 参考文献4 3 综述4 6 综述参考文献5 7 致谢”6 3 攻读学位期问发表的学术论文6 4 c o n t e n t s c h i n e s ea b s t r a c t 1 e n g l i s ha b s t r a c t 4 s y m b o l i cd e s c r i p t i o n 8 p r e f a c e 9 p a r t1t h ee x p r e s s i o no f m t a i ，r i m 2 3a n dc - m y ci nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m aa n d m a t e r i a l sa n dm e t h o d s l1 r e s u l t s 一18 d i s c u s s i o n 19 c o n c l u s i o n 2 3 a p p e n d i x 2 4 p a r t2t h es t u d yo fm t a1i nh e p a t o c e l l u l a re a r c i n o m ac e l ll i n e s m a t e r i a l sa n dm e t h o d s 2 7 r e s u l t s 3 7 d i s c u s s i o n 3 8 c o n c l u s i o n 4 0 r e f e r e n c e 4 3 r e n e w 4 6 r e n e wr e f e r e n c e 5 7 a c k n o w l e d g e m e n t 6 3 a c a d e m i ca r t i c l e sp u b l i s h e dd u r i n gt h es t u d yf o rd e g r e e 6 4 山东大学硕j ：学位论文 m t a l 在肝细胞癌中的表达及临床意义 硕士研究生：王勇 专 业：内科学( 消化系病) 导师：任万华教授 中文摘要 目的： 通过检测肿瘤转移相关基因1 ( m t a l ) 在肝癌组织及不同侵袭转移潜能人肝 癌细胞株中表达的差异，探讨m t a l 表达与肝细胞癌侵袭、转移及生物学行为的 关系。 方法： 1 m t a l 在肝癌组织中的表达及与n m 2 3 、c m y c 相关性的研究：实验所选取 的石蜡包埋肝细胞肝癌组织标本及新鲜肝细胞肝癌组织标本均来自山东大学附 属省立医院。病例收集的原则：所选病例的临床资料齐全；所选病例术前未 经任何抗肿瘤治疗；所选病例均经病理证实为肝细胞肝癌。3 0 例石蜡包埋肝 癌组织标本选自该院2 0 0 7 年1 月至2 0 0 8 年1 2 月经手术切除的存档蜡块，每例 蜡块均含有癌组织及相应癌旁组织，将所选石蜡包埋肝癌组织标本制成4 5i tm 厚的连续切片，用于免疫组化检测。3 0 例新鲜肝癌组织标本选自该院2 0 0 9 年l 5 月经手术切除的病例，分别在新鲜肝癌癌灶中心无出血坏死部位及距癌灶边缘 3 - - - ，5 c m 相应癌旁组织处取材，部分置于一8 0 “ c 冰箱冻存备用，用于r n a 提取；另 一部分用1 0 福尔马林固定2 4 小时，常规石蜡包埋，制成4 - 一5l lm 厚的连续切 片，用于免疫组化检测。分别采用免疫组织化学法、半定量r t p c r 检测肝癌组 织及其相应癌旁组织中m t a l 蛋白、m r n a 的表达，分析其表达与临床病理特征之 间的关系，并分析m t a l 蛋白表达与肿瘤转移抑制基因n m 2 3 一h 1 表达蛋白及癌基 因c - m y c 表达蛋白的相关性。 2 m t a l 与肝癌细胞系侵袭转移潜能关系的研究：实验所用的不同侵袭转移 潜能人肝癌细胞株为人正常肝细胞株l 0 2 ，人肝癌细胞株m h c c 9 7 一h 、s m m c 7 7 2 1 、 h e p g 2 。分别采用实时定量r t p c r 、w e s t e r nb l o t 检测人正常肝细胞株l 0 2 ，人 山东大学硕：卜学位论文 肝癌细胞株m h c c 9 7 - h 、s m m c 7 7 2 1 、h e p g 2 中m t a l m r n a 及蛋白的表达；采用 t r a n s w e l l 小室体外细胞侵袭实验检测各细胞株的侵袭转移潜能。 结果： 1 免疫组织化学结果显示，m t a l 蛋白主要在细胞核中表达，呈棕黄色颗粒状， m t a l 蛋白在肝癌癌组织中阳性表达率为6 5 o ( 3 9 6 0 ) ，明显高于其在癌旁组 织中的表达( 3 0 o ，1 8 6 0 ) ，二者的差异有显著统计学意义( x2 = 1 4 7 3 7 ， p = - o 0 0 0 ) 。m t a l 蛋白在肝癌组织中的表达与肿瘤分化程度、有无肝内、外转移 或门静脉癌栓相关( 必o 0 5 ) 。 2 半定量r t - p c r 结果显示，m t a lm r n a 在肝癌组织中的平均相对表达量为 ( 0 4 0 6 0 0 3 7 ) ，显著高于其在相应癌旁组织中平均相对表达量( 0 1 8 9 0 0 2 1 ) ，两组之间差异有统计学意义( t = 4 0 7 7 ，p = o 0 0 5 s c m 者3 3 例；h b s a g 阳性者4 6 例； 术前a f p 4 0 0 n g m l 者3 9 例；h c ce d m o n d s o n 病理分级：i i i 级( 高、中分化) 1 6 例，i i i 级( 低分化) 4 4 例；合并肝硬化者4 0 例；有肝内、外转移或门静脉癌 栓者2 5 例。 ( 二) 主要试剂 1 山羊抗人m t a l 多克隆抗体( s c 一9 4 4 6 ) ：购自美国s a n t ac r u z 公司。 2 鼠抗人n m 2 3 单克隆抗体( z m 一0 2 0 0 ) ：购自北京中杉金桥生物技术有限 公司。 3 鼠抗人c m y c 单克隆抗体( z m - 0 0 7 9 ) ：购自北京中杉金桥生物技术有限 公司。 4 免疫组化检测试剂盒( p y - 9 0 0 0 、p v 一9 0 0 3 ) ：购自北京中杉金桥生物技 术有限公司。 山东大学硕七学位论文 5 浓缩型d a b 试剂盒：购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 6 总r n a 提取试剂盒：t r i z o l 购自美国i n v i t r o g e n 公司。 7 反转录试剂盒：p r i m e s c r i p t 憎r tr e a g e n t sk i t ( d r r 0 3 7 s ) 购自日本t a k a r a 公司。 8 p c r 扩增试剂盒：t a k a r at a q 憎k i t ( d r o o i a ) 购自日本t a k a r a 公司。 9 d l l 0 0 0d n am a r k e r ( d 5 2 6 a ) 均购自日本t a k a r a 公司。 1 0 b i t a i 和内参照b - a c t i n 的引物序列：由上海博亚生物技术有限公司 计合成。 1 1 1 0 中性福尔马林溶液、无水酒精、二甲苯、p b s 缓冲液、柠檬酸缓冲 液、蒸馏水、苏木素、中性树胶、d e p c 、无水乙醇、异丙醇、氯仿、e d t a n a 、 冰乙酸、t r i s 碱、e b 等均由山东省立医院中心实验室提供。 ( 三) 主要仪器设备及实验耗材 1 生物组织自动脱水机：湖北医用仪器有限公司。 2 生物组织包埋机：湖北医用仪器有限公司。 3 l e i c a - r m 2 1 3 5 生物组织切片机：德国莱卡公司。 4 生物组织摊片烤片机：湖北医用仪器有限公司。 5 防脱载玻片：北京中杉金桥生物技术有限公司。 6 电热恒温水浴箱：北京医疗器械厂。 7 电热恒温培养箱：上海跃进医疗器械厂。 8 l e i c a d m 4 0 0 0 b 光学显微镜：德国莱卡公司。 9 显微光学摄影系统：德国莱卡公司。 1 0 l e i c aq i n 图像处理与分析系统：德国莱卡公司。 1 1 s i m - f 1 4 0 制冰机制冰机：日本s a n y o 公司。 1 2 d u 7 0 0 紫外可见分光光度计：美国贝克曼公司。 1 3 p c r 基因扩增仪：美国t h e r m oh y b a i d 公司。 1 4 电泳仪( d 1 n 一i i l l 6 型) ：北京六一仪器厂。 1 5 生物电泳凝胶成像分析系统( a l p h a i m a g e r 2 2 0 0 ) ：美国a l p h ai n n o t e c h 公司。 1 6 低温储藏冰箱：青岛海尔公司。 1 2 山东大学硕上学位论文 1 7 低速离心机：河北白洋淀离心机厂。 1 8 低温高速离心机：美国t h e r m o 公司。 1 9 微量移液器：德国e p p e n d o r f 公司。 2 0 各种规格e p 管、离心管、移液器吸头：均购自美国c o s t a r 公司。 2 1 其他：普通天平、电子天平、微波炉、烧杯、锥形瓶、容量器、磁力 搅拌器等均由山东省立医院中心实验室提供。 二、实验方法 ( 一) r t p c r 1 相关实验器具的处理： ( 1 ) 塑料制品( e p 管、离心管、移液器吸头等) ：将塑料制品逐个浸泡于 1 o d e p c 水中( 必要时小枪头需要用吸管打入d e p c 水) 3 7 “ c 过夜，然后送至高 压3 次，后在8 0 烘烤箱中烘干。 ( 2 ) 玻璃制品( 研磨匀浆器等) ：先泡酸过夜，冲洗干净后，在1 o d e p c 水中泡8 小时左右，3 7 烘干，再用蒙锡纸包裹送至于烤3 次。 ( 3 ) 金属制品( 镊子等) ：先洗干净，3 7 烘干，再用蒙锡纸包裹送至干 烤3 次。 2 相关试剂的配s s j ( 1 ) d e p c 水： 泡实验器具的d e p c 水的配制：1 0 0 0 m l 双蒸水中加l m l d e p c ，放在1 0 0 0 m l 容 量瓶中静黄4 小时后备用。 配7 5 乙醇的d e p c 水的配n - l o o m l 盐水瓶内装4 0 m l 双蒸水，加4 0 u l d e p c ，3 7 过夜，送至高压。 ( 2 ) 7 5 乙醇：d e p c 水：无水乙醇按l ：3 的比例配制，现用现配。 ( 3 ) 电泳缓冲液( t a e ) ： 先配n o 5 m o l l ，p h 8 0 的e d t a 溶液：将3 7 2 9e d t a - n a 加入1 6 0 m l 蒸馏水中， 在搅拌器上搅拌均匀。再用n a o h 调节溶液p h 值至8 0 ( 约需4 9 n a o h ) 。加蒸馏水 定容至2 0 0 r a l 。后送至高压灭菌。室温保存。 再配$ i j 5 0 x t a e 溶液：在4 0 0 m l 蒸馏水中溶解1 2 1 9t r i s 碱，加入2 8 5 5 m l 冰乙 酸和5 0 m l0 5 m l le d t a 溶液，加蒸馏水定容至5 0 0 m l ，室温保存。 1 3 山东大学硕士学位论文 ( 4 ) 琼脂糖溶液( 1 - 0 ) ： 5 0 t a e 溶液取lo m l ，稀释成5 0 0 m l ，取5 0 m l 溶解0 5 9 琼脂糖，放在微波炉中 加热至融化，室温冷却至温热时加入l o m g m le b5 u l ，充分混匀，倒入已置好梳 子的制胶槽中，室温放置待凝胶完全凝聚后，拔出梳子，放入后电泳槽中进行电 泳。 ( 5 ) 溴化乙锭( e b ) ( 1 0 m g m 1 ) ： 在2 0 m l 水中加入0 2 9 溴化乙锭，磁力搅拌数小时，然后用铝箔包裹容器或将 溶液转移至棕色瓶中，4 保存。 3 引物的设计及合成： m t a l 和内参照b - a c t i n 的引物序列由上海博亚生物技术有限公司设计合 成( 见下表) ： 4 实验步骤： ( 1 ) 组织中总r n a 的提取( t r i z o l 法) 取组织标本约l o o m g ，加入l m lt r i z o l ，在匀浆器中研磨匀浆，转移至 1 5 m le p 管中，室温放置5 m i n 。 每l m lt r i z o l 中加0 2 m l 氯仿，盖紧样品管盖，用手用力震荡1 5 s ，充 分混匀后室温放置5m i n ，后4 “ c ，1 2 0 0 0 r m p ，离心1 5 m i n 。 将上层水相转入新的1 5 m l e p 管中( 约0 5 m 1 ) ，加入等体积异丙醇， 混匀后室温放置l o m i n 。后4 “ c ，1 2 0 0 0 r m p ，离心l o m i n 。 弃上清，留取沉淀，加l m l 新配置的7 5 的乙醇振荡洗涤r n a 沉淀，4 “ c ， 7 5 0 0 r m p ，离心5 m i n 。 弃上清，用滤纸小心吸取残留液体，室温干燥5 ，- - l o m i n ( 不能完全干燥) 。 加2 0i lld e p c 水重新溶解r n a 沉淀，紫外分光光度计测r n a 浓度与纯度。 提取的r n a 保存于- 8 0 “ c 超低温冰箱中备用，或立即用于逆转录反应。 1 4 山东人学硕1 二学位论文 ( 2 ) 逆转录合成e d n a 按下列组份配制r t 反应液( 均在冰上进行) 逆转录反应条件： 3 7o c1 5 m i n ；8 5 5 s 。 合成e d n a 保存于一8 0 超低温冰箱中备用，或立即用于p c r 反应。 ( 3 ) p c r 扩增反应 按下列组份配制p c r 反应液( 均在冰上进行) 试剂使用量 t a k a r at a q ( 5 u ，u 1 ) i oxp c rb l l 妊旨( m 9 2 + p l u s ) 鲫m i x t t 鹏( 各2 5 m l v l ) 模板( c d n a 溶液) p c rf o r w a r dp 五m c l “ ( 1 0pm ) p c r 胁瓣p r i m 茁( 1 0 ”m ) d h 2 0 p c r 反应条件：9 4 预变性5 m i n ；然后，9 4 变性3 0 s ，5 6 退火3 0 s ， 7 2 延 中3 0 s ，共3 0 个循环；最后，7 2 。c 延伸l o m i n ，4 保存备用。 ( 4 ) 琼脂糖电泳及凝胶图像分析 取5 u lp c r 扩增产物及l u l6 加样缓冲液充分混匀后，在1 琼脂糖凝胶 上加样，恒压1 0 0 v ，进行电泳，当溴酚蓝条带移动到整个胶板的l 2 2 3 时， 停止电泳。生物电泳凝胶成像分析系统( a l p h ai m a g e r 2 2 0 0 ) 进行半定量分析， 以m t a l 光密度值 i - a c t i n 光密度值表示m t a i m r n a 相对表达量。 ( 二) 免疫组织化学染色 1 相关试剂的配制： ( 1 ) p b s 缓冲液：n a c i8 0 9 、k c l0 2 9 、n a ：h p 0 41 5 6 9 、k h ：p 0 40 2 9 ) j i l 蒸 馏水充分融解混匀后定容至1 0 0 0 毫升，调整p h 值至7 2 ，c c 保存备用。 1 5 皿 唱 渤驯舢叫鼬蛐埘嘶 仉 。2 p 山东大学硕士学位论文 ( 2 ) 0 0 1 m o l l 柠檬酸盐缓冲液：柠檬酸0 4 9 、柠檬酸钠3 9 ，加蒸馏水充分 融解混匀后定容至1 0 0 0 毫升，调整p h 值至6 0 ，4 “ c 保存备用。 ( 3 ) d a b 的配制：在l m l 蒸馏水中加试剂a ( 浓缩缓冲液) 、试剂b ( 浓缩d a b ) 、 试剂c ( 浓缩过氧化氢溶液) 各1 滴，混匀后立即使用。 2 实验步骤： ( 1 ) 标本处理：取材后的组织标本置于1 0 中性福尔马林溶液中固定2 4 小时， 然后依次经梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋。 ( 2 ) 切片：切片机连续切片，切片厚度4 “ - 5um ，置于4 0 。c 温水中，摊片时 要求组织平整、无皱折、无破损，及时烘干，置于室温，干燥，无尘处保存。 ( 3 ) 脱蜡和水化：将石蜡切片置于6 0 “ c 恒温箱中烘烤3 0 m i n ，然后将切片依 次置于二甲苯i 、i i 、i i i 各1 5 m i n ，无水乙醇一9 5 酒精一8 5 酒精- 7 5 酒精- 7 0 酒 精一蒸馏水各5 m i n ，p b s 缓冲液洗5 m i n 3 次。 ( 4 ) 抗原修复：将一定量的柠檬酸缓冲液置于电热恒温水浴箱液中，温度 保持在9 5 9 8 ，放入玻片，维持1 5 m i n ，室温放置自然冷却，p b s 缓冲液洗5 m i n 3 次。 ( 5 ) 血清封闭：p b s 沈后，擦干组织周围的p b s 液，每张切片加1 滴( 约5 0 p1 ) 3 过氧化氢溶液，覆盖全部组织，3 7 。c 孵育l o m i n ，以阻断内源性过氧化物 酶的活性。 ( 6 ) p b s 缓冲液洗5 m i n x 3 次。 ( 7 ) 加一抗：甩去p b s 液，每张切片j j f l l 滴( 约5 0i l1 ) 相应的第一抗体( 注： m t a l 一抗、n m 2 3 一抗及c m y c 一抗的工作浓度分别为1 ：2 0 0 、1 ：1 0 0 、1 ：1 0 0 ) ， 覆盖全部组织，4 孵育过夜。p b s 代替第一抗体作为阴性对照。 ( 8 ) p b s 缓冲液洗5 m i n 3 次。 ( 9 ) 甩去p b s 液，每张切片加l 滴( 约5 0 u1 ) p o l y m e r h e l p e r 聚合物增强剂 ( 试剂1 ) ，覆盖全部组织，3 7 “ c 孵育3 0 m i n 。 ( 1 0 ) p b s 缓冲液洗5 m i n 3 次。 ( 1 1 ) 加二抗：甩去p b s 液，每张切片加1 滴( 约5 0p1 ) p o l y h r p a n t i g o a t r a b b i ti g g 酶标抗鼠兔聚合物( 试剂2 ) ，覆盖全部组织，3 7 “ c 孵育 3 0 m i n 。 1 6 山东大学硕士学位论文 ( 1 2 ) p b s 缓冲液洗5 m i n x 3 次。 ( 1 3 ) 加显色剂：甩去p b s 液，每张切片n 1 滴( 约5 0 u1 ) 新配制的d a b 液， 覆盖全部组织，显微镜下控制显色反应的时间，当出现棕黄色颗粒时，自来水中止 反应。 ( 1 4 ) 苏木素复染，0 1 盐酸乙醇分化，镜下控制分化时间，自来水冲洗5 m i n ， 然后依次经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，晾干后中性树胶封固，显微镜下观 察。 3 免疫组化结果判定： 用已知阳性表达的乳腺癌组织作为阳性对照，用p b s 代替一抗作为阴性对照。 由两位有经验的病理医师采取双盲法阅片。以检测细胞特定部位出现棕黄色颗粒 为阳性反应。b i t a l 蛋白主要在细胞核中表达，呈棕黄色颗粒状；n m 2 3 蛋白、c m y c 蛋白主要在细胞质中表达，呈棕黄色颗粒状。每张病理切片随机选择1 0 个高倍镜 视野，根据染色强度和阳性细胞数量进行分级。按着色程度分为：基本未着色， 染色与背景相似者为0 分；着色浅，略高于背景者为1 分；中度着色，明显高于背景 者为2 分：强染，着色深棕色者为3 分。阳性细胞数 7 5 为3 分。两项分值相加后0 ，- - - 1 分为阴性，2 分为阳性。 三、统计学处理 所有统计资料都采用s p s s l 7 0 软件进行统计分析。计量资料以均数标准 差表示；计数资料采用行列表资料的x2 检验或f i s h e r 确切概率法，各指标 间相关性的研究采用s p e a r m a n 相关分析。p 5 0 肿瘤大小( c 碡) 直径5 直径 5 肿瘤包膜 有 无 肝硬化 有 无 h b s a g 阳性 阴性 a f p ( p n g - m l 1 ) 4 0 0 5c m 的肝癌中m t a lm r n a 表达量 显著增高，但患者的性别、肝硬化情况及a f p 水平等与其表达水平无关。同时， 在一部分侵袭性肝癌中，m t a lm r n a 阳性细胞表现出向肿瘤边缘集中分布的趋势。 肿瘤边缘是受侵袭最活跃的部位，在部分侵袭性肝癌中，mt a lm r n a 阳性细胞集中 分布于肿瘤边缘，说明m t a l 基因可能在肝癌的侵袭转移过程中具有重要作用。肝 内子灶是肝癌组织中具有转移潜能的细胞亚群恶性增殖，历经多个侵袭阶段形成， 其中的肝癌细胞均具备很强的侵袭转移能力。子灶中m t a lm r n a 表达显著增高， 提示该基因在原发性肝癌的侵袭转移过程中可能起一定作用。另外，术后1 年内死 亡的肝癌患者癌组织中的m t a l 表达量显著升高，提示m t a l 水平对判断肝癌的预后 可能也具有一定意义。 5 5 山东大学硕士学位论文 h a m a t u s 掣5 4 】采用r t - p c r 技术检测3 3 例行根治性手术的肝细胞肝癌患者标本 中m t a l 的表达情况，以肝癌组织与瘤旁组织中m t a lm r n a 的比值作为衡量其表达 水平高低的指标，分析m t a l 的表达与临床病理指标及预后间的关系，结果发现 m t a l 的表达水平与肝内播散及门静脉浸润并无相关性，但m t a l 高表达组的无瘤 生存率却明显低于低表达组，提示m t a l 的表达水平可作为根治性切除术后肝癌患 者的预后指标之一。 s o oh y u n gr y u 等【5 5 】研究发现m t a l 的在肝癌组织中高表达，在癌旁组织中不 表达或仅微弱表达，其表达水平与肝癌肿瘤的大小、肿瘤的病理类型、肿瘤的分 化程度等有关，而与患者的年龄、性别、c h i l d p u g h 分级、肝功能失代偿的程度、 肝硬化的程度等无关。进一步研究发现m t a l 高表达的患者术后肝癌的复发率高， 生存时间短。m t a l 表达阳性的患者术后1 年、3 年、5 年的累积复发率分别为3 9 、 5 4 及6 5 ，显著高于同期m t a l 表达阴性的患者( 其术后1 年、3 年、5 年的累积复 发率分别为2 5 、3 9 及5 1 ) ，说明m t a l 与肝癌患者的预后密切相关。研究还发 现在h b v 表达阳性的肝癌患者中m t a l 的阳性率为2 1 1 ( 8 0 3 8 0 ) 而在h c v 表达阳 性的肝癌患者中m t a l 的阳性率仅为3 4 ( 1 2 9 ) ，提示m t a l 可能通过某种机制 在乙肝所致的肝癌的发挥一定的作用 x i a o - y o n gz h a n g 等【2 5 】利用r e a l - t i m er t p c rw e s t e r nb l o t t i n g 及s i r n a 干扰技术，研究发现m t a l 是原癌基因c m y c 下游一个必不可少的作用因子，提示 在肝癌治疗中可以利用r n a 干扰技术特异性地抑锘o m t a l 的表达，进而抑n c m y c 的作用，从而达到从基因水平靶向治疗肝癌的目的。 6 结语 m t a l 基因作为一种新的肿瘤转移相关基因，近年来m t a l 基因日益成为人类 肿瘤的研究热点，尽管其具体作用机制尚不明确，但已有研究资料表明其表达与 多种人类恶性肿瘤，尤其是上皮源性恶性肿瘤的侵袭、转移密切相关，其可能是 通过参与信号转导与基因表达，调控一系列与浸润转移有关的基因及其产物，在 肿瘤发生、发展过程中发挥重要作用。随着m t a l 基因作用机制的迸一步研究，m t a l 基因必将成为控制肿瘤侵袭转移及肿瘤基因靶向治疗的有利工具。 山东大学硕士学位论文 参考文献 1 】p e n c i ls d ，t o hy ，n i c o l s o ng l c a n d i d a t e m e t a s t a s i s a s s o c i a t e dg e n e so ft h er a t 13 7 6 2 n fm a m m a r ya d e n o c a r c i n o m a 【j 】b r e a s tc a n c e rr e st r e a t ，19 9 3 ，2 5 ( 2 ) 1 6 5 1 7 4 【2 】n i c o l s o ng l ，n a w aa ，t o hy ，e ta 1 t u m o rm e t a s t a s i s a s s o c i a t e dh u m a nm t a 1g e n e a n di t sm t a 1p r o t e i np r o d u c tr o l ei ne p i t h e l i a lc a n c e rc e l li n v a s i o n ，p r o l i f e r a t i o na n d n u c l e a rr e g u l a t i o n 【j 】c l i ne x pm e t a s t a s i s ，2 0 0 3 ，2 0 ( 1 ) ：1 9 2 4 【3 】t o hy ，p e n c i ls d ，n i c o l s o ng l an o v e lc a n d i d a t em e t a s t a s i s a s s o c i a t eg e n e ，m t a l ， d i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e di nh i g h l ym e t a s t a t i cm a m m a r ya d e n o a r c i n o m ac e l ll i n e s 【j 】 b i o lc h e m ，19 9 4 ，2 6 9 ( 3 7 ) ：2 2 9 5 8 - 2 2 9 6 3 【4 】t o hy ，o k ie ，o d as ，e ta 1 a n a l y s i so ft h ec o m p l e t es e q u e n c eo ft h en o v e l m e t a s t a s i s - a s s o c i a t e dc a n d i d a t eg e n e , m t a1 ，d i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e di nm a m m a r y a d e n o a r c i n o m aa n db r e a s tc a n c e rc e l ll i n e s j 】g e n e ，19 9 5 ，15 9 ( 1 ) ：9 7 - 10 4 【5 】b o w e nn j ，f u j i t an ，k a j i t am ，e ta 1 m i - 2 n u r d ：m u l t i p l ec o m p l e x e sf o rm a n y p u r p o s e s 【j 】b i o c h i mb i o p h y sa c t a ，2 0 0 4 ，1 6 7 7 ( 1 - 3 ) ：5 2 - 5 7 【6 】c u iq ，m a t s u s u ek ，t o hy ，e ta 1 a s s i g n m e n to ft h em e t a s t a s i s a s s o c i a t e dg e n e ( m t ai ) t om o u s ec h r o m o s o m eb a n d12 fa n dt h e m e t a s t a s i s a s s o c i a t e dg e n e2 ( m t a 2 ) t om o u s ec h r o m o s o m eb a n d19 bb yf l u o r e s c e n c ei ns i t uh y b r i d i z a t i o n 【j 】c y t o g e n e t c e l lg e n e t ，2 0 0 1 ，9 4 ( 3 2 4 ) ：2 4 6 - 2 4 7 【7 】k u m a rr ，w a n gr a ，b a g h e r iy a r m a n dr e m e r g i n gr o l e so f m t a lf a m i l ym e m b e r s i nh u m a nc a n c e r s j 】s e m i no n c o l ，2 0 0 3 ，3 0 ( 5s u p p l16 ) ：3 0 3 7 【8 】n a w aa ，n i s h i m o r ik l i np ，e ta 1 t u m o rm e t a s t a s i s a s s o c i a t e dh u m a nm t a l g e n e ： i t sd e d u c e dp r o t e i ns e q u e n c e 1 0 c a l i z a t i o na n da s s o c i a t i o nw i mb r e a s tc a n c e rc e l l p r o l i f e r a t i o nu s i n ga n t i s e n c ep h o s p h o r o t h i o a t eo l i g o n u l e o t i d e s 【j 】jc e l lb i o c h e m ， 2 0 0 0 ，7 9 ( 2 ) ：2 0 2 2 12 【9 】y a oy ly a n gw m t h em e t a s t a s i s a s s o c i a t e dp r o t e i n s1a n d2f o r md i s t i n c tp r o t e i n c o m p l e x e sw i t hh i s t o n ed e a c e t y l a s ea c t i v i t y 【j 】jb i o lc h e m ，2 0 0 3 ，2 7 8 ( 4 3 ) - 4 2 5 6 0 - 4 2 5 6 8 【10 】n a w aa ，s a w a d ah ，t o hy ，e ta 1 t u m o rm e t a s t a s i s a s s o c i a t e dh u m a nm t a l 5 7 山东大学硕上学位论文 g e n e ：e f f e c t so fa n t i s e n c eo l i g o n u l e o t i d e so nc e l lg r o w t h 阴i n t e r njm e db i o le n v i r o n ，2 0 0 0 ，2 8 ( 1 ) ：3 3 - 3 9 【11 】i n s i n g aa ，m o n e s t i r o l is ，r o n z o n is ，e ta 1 m p a i r m e n to fp 5 3a c e t y l a t i o n ，s t a b i l i t y a n df u n c t i o nb ya no n c o g e n i ct r a n s c r i p t i o nf a c t o r j e m b oj , 2 0 0 4 ，2 3 ( 5 ) ：114 4 - 115 4 【12 】r o ys ，p a c k m a nkj e f f r e yr ，e ta 1 h i s t o n ed e a c e t y l a s ei n h i b i t o r sd i f f e r e n t i a l l y s t a b i l i z ea c e t y l a t e dp 5 3a n di n d u c ec e l lc y c l ea r r e s to ra p o p t o s i si np r o s t a t ec a n c e r c e l l s 【j 】c e l ld e a t hd i f f e r , 2 0 0 5 ，1 2 ( 5 ) ：4 8 2 - 4 9 1 【1 3 】m a e d at ，n a g a o k ay ，k a w a iy ，e ta 1 i n h i b i t o r ye f f e c t so f c a n c e rc e l lp r o l i f e r a t i o nb y n o v e lh i s t o n ed e a c e t y l a s ei n h i b i t o r si n v o l v ep 2i w a f1i n d u c t i o na n dg 2 m a r r e s t j b i o lp h a r mb u l l ，2 0 0 5 ，2 8 ( 5 ) ：8 4 9 - 8 5 3 14 】r o c c h ip ，t o n e l l ir ，c a m e r i nc ，e ta 1 p 21w a f l c i pli sac o l i n t l o nt a r g e ti n d u c e db y s h o r t - c h a i nf a t t ya c i dh d a c i n h i b i t o r s ( v a l p r o i ca c i d ，t r i b u t y r i na n ds o d i u mb u t y r a t e ) i nn e u r o b l a s t o m ac e l l s j o n c o lr e p ，2 0 0 5 ，13 ( 6 ) ：113 9 114 4 【15 】k i r c hh c ，r u s c h s ，b r o c k m a n nd ，k i r c hh c ，e ta 1 t u m o r - s p e c i f i ca c t i v a t i o no f h t e r t - d e r i v e dp r o m o t e r sb yt u m o rs u p p r e s s i v ee1a m u t a n t si n v o l v e sr e c r u i t m e n to f p 3 0 0 c b p h a ta n ds u p p r e s s i o no fh d a c 一1a n dd e f i n e sac o m b i n e dt u m o rt a r g e t i n g a n ds u p p r e s s i o ns y s t e m j o n c o g e n e ，2 0 0 2 ，2 1 ( 5 2 ) ：7 9 9 1 - 8 0 0 0 【16 】p e l i c c ip g an e wc l a s so fa n t i c a n c e rd r a g s ：h d a c - i n h i b i t o r s 【j 】s u p p lt u m o r i ， 2 0 0 2 ，1 ( 4 ) ：s 6 6 【1 7 】s e c r i s tj p ，z h o ux ，r i c h o nv m h d a ci n h i b i t o r sf o rt h et r e a t m e n to f c a n c e r j 】 c u r ro p i ni n v e s t i gd r u g s ，2 0 0 3 ，4 ( 12 ) ：14 2 2 14 2 7 【18 】d a v i ej r c o v a l e n tm o d i f i c a t i o n so fh i s t o n e s ：e x p r e s s i o nf r o mc h r o m a t i nt e m p l a t e s 【j 】c u r ro p i ng e n e td e v ，8 ( 2 ) ：17 3 17 8 19 】w e il i ，x i