妇科感染常见病原菌及检测方法ppt课件

妇科感染常见病原菌及检测方法妇科感染常见病原菌及检测方法 1 妇科感染常见疾病 阴道病/阴道炎 尿道炎 子宫颈炎 盆腔感染 子宫内膜炎 输卵管卵巢脓肿 输卵管炎症 2 妇科感染实验室检查的意义 很多妇科感染症状、体征有很多相似之 处。临床诊断本身既不敏感，也不特 异。 实验室诊断可以： 明确病原微生物，使治疗更具针对性； 提高患者治疗依从性； 使患者更有可能遵从性伴侣告知。 3 病例一 患者，女性，24岁，已婚，孕25周。外阴瘙 痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符, 外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。 考虑什么病？进一步做什么检查？ 4 阴道炎 正常情况下阴道内寄居有大量需氧菌及 厌氧菌，形成正常的阴道菌群。 任何原因将阴道菌群生态平衡打破，可 形成条件致病菌，引起阴道炎。 阴道粘膜生态系统 5 阴道炎 临床常见有：细菌性阴道病、念珠菌性阴 道炎、滴虫性阴道炎。 吴文湘, 廖秦平. 阴道炎的诊治进展J. 中国实用妇科与产科杂志, 2009(12):949-952. 6 阴道炎相关病原实验室检查 常常见见见见病原因子病原因子 诊诊诊诊断方法断方法最最优标优标优标优标 本本 转转转转运运要求及最佳要求及最佳时间时间时间时间 酵母菌 （ pH4.5 ） 盐水湿片和 10KOH 阴道分泌物拭子 置于 0.5mL 生理盐水或转 运拭子 ，室温， 2h 定量革兰染色 阴道分泌物拭子 转运拭子送检， 室温， 12h DNA 杂交探针 阴道分泌物拭子室温，7d 毛滴虫 （ pH4.5 ） 盐水湿片 阴道分泌物拭子 置于盐水送检， 室温， 30min30min（最佳最佳） 2 2h h 快速抗原检查 阴道上皮/分泌物拭子 转运拭子或盐水送检， 室 温， 24h DNA 杂交探针 阴道分泌物拭子室温，7d 培养 阴道分泌物拭子 直接放入 InPouch TV 培养 系统送检 室温， 48h 核酸扩增实验 阴道拭子、宫颈拭子、尿液、 液基细胞学标本、尿道拭子、 直肠拭子、咽拭子 室温，7d 7 病例1 患者，女性，24岁，已婚，孕25周。外阴瘙痒一 周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符,外阴潮 红、充血，见大量黄色脓性分泌物。 医生： 根据病史及临床表现可初步诊断为阴阴 道炎道炎。取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送 检检，以明确病原学诊断。 8 念珠菌性阴道炎 主要病原菌为： 白色假丝酵母菌 约占80%- 90% 光滑假丝酵母菌 热带假丝酵母菌 近平滑假丝酵母菌 约占10%-20% 9 念珠菌性阴道炎的实验室诊断 1. pH 4.5 2. 盐水湿片+10% KOH 3.定量革兰染色Nugent评分 4. DNA杂交探针 线索细胞 KOH 氢氧化钾 18 盐水湿片 线索细胞是诊断BV的最敏感特异的指 标。 19 胺试验 将一滴阴道分泌物滴于玻片上，再加一滴 10KOH，可闻到氨味或鱼腥样气味，即 胺试验阳性。 10%KOH 氢氧化钾 20 定量革兰染色 Nugent评分 定量革兰染色是BV 诊断最特异的检 查。 形态类别态类别每个油镜视镜视 野菌体数 / 分值值得分 011 - 55 -3030 加德纳纳菌/普雷沃菌 (革兰兰染色不定、球杆 菌) 01234 动动弯杆菌01234 乳酸杆菌43210 21 定量革兰染色 Nugent评分 乳酸杆菌革兰染色 22 定量革兰染色 Nugent评分 阴道加德纳菌革兰染色 23 定量革兰染色 Nugent评分 动弯杆菌革兰染色 24 定量革兰染色 Nugent评分 线索细胞革兰染色 25 定量革兰染色 Nugent评分 分数解释标准： 0-3 分 正常 4-7 分 中介 7-10 分 细菌性阴道炎 26 定量革兰染色 Nugent评分 乳酸杆菌0分，上皮细胞周围非常清楚。 评分：0分 27 定量革兰染色 Nugent评分 乳酸杆菌0分，少量杂菌，见白细胞和菌丝。 评分：1分 诊断：BV阴性，但诊断为VVC 28 定量革兰染色 Nugent评分 乳酸杆菌2分，加德纳菌/普雷沃菌等 3分 ，动弯杆菌 1分。 评分：6分 诊断：BV中间型 29 定量革兰染色 Nugent评分 乳酸杆菌3分，加德纳菌/普雷沃菌等 3分，动 弯杆菌 4分。 评分：10分 诊断：BV 30 阴道毛滴虫 阴道的致病性厌氧寄生原虫，虫体 为 8-45m，呈梨形或椭圆形，无色透明，大 小为白细胞的2-3倍。 31 毛滴虫性阴道炎的实验室诊断 1. pH 4.5 2. 盐水湿片 3.快速抗原检查 4. DNA杂交探针 5. 培养 6. 核酸扩增实验 32 盐水湿片 33 革兰染色 34 快速抗原检查 检测阴道毛滴虫特定的抗原 已有商品化试剂 最优试验条件并不需要活的微生物 35 培养 36 核酸扩增试验 APTIMA Trichomonas vaginalis (ATV) test（Gen-Probe, Inc. San Diego, CA）是 近期FDA 批准的检查，既可用于女性TV 的筛检，也可用于诊断。 可以使用多种标本类型。 一些实验室也可通过比对，验证自己的 PCR方法。 37 病例二 患者，女性，40岁，已婚，阴道分泌物增多 ，伴腰酸，偶有性生活后出血2年。检查外阴 正常，宫颈肥大，度糜烂，接触性出血。 考虑什么病？进一步做什么检查？ 38 子宫颈炎 子宫颈可因各种致病因素的侵袭而发生炎症 ，有急性和慢性两种。 疾病疾病致病菌致病菌 急性宫颈宫颈 炎沙眼衣原体、淋病奈瑟菌 慢性宫颈宫颈 炎性传传播病原体：沙眼衣原 体、淋病奈瑟菌、单纯单纯 疱疹 病毒 内源性病原体：葡萄球菌、 链链球菌、大肠肠杆菌等； 部分与引起阴道炎的病原菌 相同39 尿道炎 是指尿道黏膜的炎症 。多为致病菌逆行侵 入尿道引起。 疾病疾病致病菌致病菌 淋病性尿道炎 淋病奈瑟菌 非淋病性尿道炎 沙眼衣原体、解脲脲支原体、 阴道毛滴虫、嗜血短杆菌、 单纯单纯 疱疹病毒最常见见 非特异性尿道炎大肠肠埃希杆菌、链链球菌属及 葡萄球菌属 40 尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查 常见病原因子常见病原因子 诊断方法诊断方法 最优标本最优标本 转转转转运要求及最佳运要求及最佳时间时间时间时间 沙眼衣原体 核酸扩增实验 尿液、宫颈内、阴道和/或尿 道拭子（直肠、咽部、结膜、 液基细胞学标本） 实验室提供转运装置， 室温， 2d 杂交探针 宫颈内或尿道拭子 实验室提供转运装置， 室温， 2d 培养 宫颈内、尿道、结膜、 NP、 咽、直肠拭子 实验室提供转运装置， 4冷藏； 2h 直接免疫荧光染色结膜拭子 转运培养基，室温，2h 淋病奈瑟菌 革兰染色 尿道分泌物 直接涂片或将拭子置于转 运培养基，室温，立即 核酸扩增实验 尿液、宫颈内、阴道和/或尿 道拭子（直肠、咽部、结膜、 液基细胞学标本） 实验室提供转运装置， 室温， 2d 杂交探针 宫颈内或尿道拭子 实验室提供转运装置， 室温， 2d 培养 宫颈内、尿道、结膜、 NP、 咽、直肠拭子 转运培养基， 室温， 1h ，不要冷藏 标本 41 尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查 常见病原因子常见病原因子 诊断实验诊断实验 最优标本最优标本 转转转转运要求及最佳运要求及最佳时间时间时间时间 阴道毛滴虫 盐水湿片 宫颈内或尿道拭子 置于0.5mL盐水， 30min-2h 快速抗原检查宫颈内拭子 实验室提供转运装置， 室温， 24h 杂交探针宫颈内或阴道拭子 实验室提供转运装置， 室温， 7d 培养宫颈内或尿道拭子 直接接种在InPouch TV 培养系统，2-5d 核酸扩增实验 阴道、宫颈内拭子，尿，液基 细胞学标本，尿道、直肠、咽 部拭子 实验室提供转运装置， 室温， 2d HSV 直接免疫荧光染色病变基底部刮取 床边制片，室温，24h 培养 病变基底部刮取 置于VTM/UTM，室温或 置于冰上，2h 核酸扩增实验病变基底部刮取或分泌物拭子 实验室提供转运装置 42 病例二 患者，女性，40岁，已婚，阴道分泌物增多 ，伴腰酸，偶有性生活后出血2年。检查外阴 正常，宫颈肥大，度糜烂，接触性出血。 医生：根据临床表现初步诊断为宫颈宫颈 炎炎。取宫颈内拭子宫颈内拭子，嘱病人立即立即送检 （注意保温），以明确感染病原体。 43 淋病奈瑟菌 革兰染色 为革兰阴性双球菌，似肾形或咖啡豆状，常 成双排列，凹面相对。 急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒细胞 内；慢性淋病患者的淋球菌多分布在细胞外。 简便、快速，可做出初步诊断。仅对男性患者 进行涂片革兰染色。 44 淋病奈瑟菌 细胞内革兰阴性双球菌 对GC 特异性达95 细胞外革兰阴性双球菌 对GC 特异性达10-29 45 培养 诊断淋病的重要手段 接种到选择培养基，置于36、含5-10% CO2 ，湿润环境中培养。 如果床边直接接种标本到选择培养基，加 CO2 药片形成气体环境，培养敏感性会更 好。 46 培养 初代培养生长缓慢，24小时后可形成灰色/湿 润、半透明的小菌落（直径0.5-1mm）。 氧化酶阳性、触酶阳性、葡萄糖产酸试验阳性 且仅分解利用葡萄糖。 图片by陈东科 47 核酸扩增试验 已有商品化试剂盒。 优点是快速、准确，缺点是试验设备要求 高。 淋病奈瑟菌DNA 在感染成功治疗后，在标 本中仍可保留3周之久，所以不能作为治疗 评估指标。 48 杂交探针 目前FDA 已有批准的GC的杂交试验试 剂盒。 不可针对尿标本。 49 病例三 病人，女，24岁，主诉为持续3天的轻度排 尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴 有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件 压痛，化脓性宫颈分泌物。 考虑什么病？进一步做什么检查？ 50 盆腔炎 盆腔炎症性疾病是女性上生殖道一系列疾 病的总称。 包括： 子宫内膜炎 输卵管卵巢脓肿 输卵管炎症 盆腔腹膜炎 51 盆腔炎致病菌 盆盆 腔腔 炎炎 外源性病原体 内源性病原体 主要为为性传传播疾病 病原体：淋病奈瑟 菌、沙眼衣原体、 支原体等 来自于原寄生于阴道 的正常菌群，包括： 需氧菌和厌厌氧菌 52 内源性病原体 需氧菌及兼性厌氧菌： 金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、 阴道加德纳菌等 厌氧菌： 脆弱拟杆菌、消化链球菌、普雷沃菌、真杆 菌等 感染特点：容易形成盆腔脓肿、感染性 血栓静脉炎，脓液有粪臭并有气泡 53 盆腔炎相关病原实验室检查 常常见见见见病原因病原因 子子 诊诊诊诊断方法断方法最最优标优标优标优标 本本 转转转转运运要求及最佳要求及最佳时时时时 间间间间 混合厌厌氧菌 阴道菌从 肠肠杆菌科、 链链球菌、 支原体 血培养和AST来评评估少 见见病原 血，20mL注入2瓶 ，静脉穿刺采集 床边边注入血培养瓶， 室温，1h 革兰兰染色 需氧和厌厌氧培养 子宫宫内膜，输输卵管- 卵巢脓肿脓肿 和/或输输卵 管内容物 置入或注入无菌厌厌氧 容器，室温，30min 子宫宫内膜炎组织组织 学证证据子宫宫内膜活检检无菌容器，室温， 30min 福尔马马林容器，室温 ，30min-4h 淋病奈瑟菌 沙眼衣原体 阴道毛滴虫 核酸扩扩增试验试验尿液，宫颈宫颈 内拭子 实验实验 室提供转转运装 置，室温，2d HIVHIV EIA抗体血清促凝管，室温，2h 54 病例三 病人，女，24岁，主诉为持续3天的轻度排尿 困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有中 度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛， 化脓性宫颈分泌物。 医生：根据临床表现初步诊断为急性盆急性盆 腔炎腔炎。进一步送检至少一套血培养，抽 取脓肿置于厌氧容器尽快送检，并取宫 颈内拭子送检，必要时取子宫内膜活检 ，以明确感染病原体。 55 盆腔炎相关厌氧菌培养流程 分离培养 挑取菌落 需氧培养 厌氧培养 厌氧培养 生长 不生长 生长 专性厌氧菌：做第二次耐氧试验 形态染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱 厌氧（+）需氧（-） 兼性厌氧菌 标本 肉眼观察 染色镜检 56 直接涂片染色镜检 在接种时做涂片，革兰染色并镜检： 观察脓细胞的有无及特殊情况，细菌与细胞之间 的相关性。 观察有无细菌，微生物的类型和大概的数量以及 有无芽孢、形状和位置、着色及菌体特征。 大致推断微生物的种类，如梭菌、放线菌、拟杆 菌、消化球菌和消化链球菌等。 57 常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征 拟杆菌、普雷沃菌属 产气荚膜梭菌，破伤风梭菌 双歧杆菌属，真杆菌属 乳酸杆菌属，放线菌属 消化链球菌属，消化球菌属 58 常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征 革兰阴性杆菌，两端钝圆着色深，中间着 色浅不均匀，且有空泡，长短不一拟 杆菌 59 常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征 革兰阳性粗短两端钝圆杆菌，无芽孢，中 性粒细胞也很少且变形破碎，标本来自战 伤或肢体严重肿胀者产气荚膜梭菌 60 常见盆腔炎相关厌氧菌形