20种抗菌中药的凝集活性研究(1)

2020 种抗菌中药的凝集活性研究种抗菌中药的凝集活性研究(1)(1) 作者：张朝燕，蓝闽波，戴亚娟 【摘要】 目的比较常见抗菌中药的凝集活性。方法选 用盐-磷酸（PBS） 、Tris-HCl、乙酸钠缓冲溶液提取 20 种 常见抗菌中药的凝集素，测定各提取液对兔血红细胞的凝 集作用。结果 20 种抗菌中药用不同 pH 的浸提液提取后表 现不同的凝集活性，在 3 种不同 pH 的浸提取液中均具有较 高凝集活性的有虎杖、山豆根、黄连、板蓝根。结论抗菌 中药多数有较好的凝集活性，PBS 对中药材中凝集素的提取 具广谱性。 【关键词】 抗菌中药；凝集素；红细胞凝集试验 Abstract：ObjectiveTocomparethehemagglutinationacti vitiesoftheextractionsfromantimicrobialChinesehemag glutinationactivitiesoftheextractionsfromPBS,Tris- HCl,NaAcetatebuffersolutionsof20kindsofantimicrobia lChineseherbsonrabbiterythrocyteweremeasuredbyHemag glutinationhemagglutinationactivitiesoftheseherbswe revariousinthethreedifferentbuffersolutions;Further more,RhizomaPolygoniCuspidati,RadixPuerariae,Rhizom aCoptidisandRadixIsatidis hadhighhemagglutinationac tivitiesinthethreedifferentbufferofantimicrobialChi nesehavegoodhemagglutinationactivities;PBScanbeused widelyforthehemagglutinationactivitiesoftheextracti onsfromantimicrobialChineseherbs. Keywords：AntimicrobialChineseherbs; Lectins; Hemag glutinationactivity 我国是水产养殖大国，但是水产病害一直是制约水 产养殖发展的主要因素。为治疗和预防鱼虾贝类的疾病， 人们广泛使用各种化学药物和抗生素。长期用药，不仅使 病原菌的抗药性越来越明显，而且药物残留和环境污染日 趋严重，生态养殖和科学防治成为水产养殖面临的迫切问 题。在长期的养殖活动中，发现采用中药如黄连、大黄、 板蓝根等可以防治一定的水产病害。这与中药能提高水产 动物非特异性免疫能力，调整机体新陈代谢，提高抗应激 能力等多种作用有关1，2 。 在水产动物中，分为无脊椎动物和脊椎动物。脊椎 动物主要行使非特异性免疫与特异性免疫。属于无脊椎动 物的甲壳动物和软体动物均缺乏免疫球蛋白，主要通过物 理屏障、吞噬作用、溶菌作用和凝集作用等清除入侵的病 原菌。凝集素能够与碳水化合物和糖蛋白结合,从而使异源 细胞或微生物发生凝集,或使各种可溶性糖结合物发生沉淀,被 认为是机体自然防御机制中的免疫识别和监测分子。鱼虾 贝类免疫系统不像高等动物那样完善,凝集素等非特异性免 疫因子在其防御病原微生物过程中发挥着重要的作用 36 。 虽然目前关于中药提高免疫和抗菌用于水产病虫害 防治的研究较多，但多数集中在粗提物、小分子和多糖等 活性成分711 ，对于抗菌中药中的凝集素，如何通过 外源途径提高水产动物的防病能力研究报道极少。鉴于此， 本研究选用了 3 种浸提液提取 20 种中药的凝集素，测定这 些常见抗菌药物的提取液对兔血红细胞凝集作用的强弱。 旨在为研究水产养殖抗菌中药的抗菌和免疫物质基础提供 研究思路和数据，为抗菌中药的筛选及水产病虫害的防治 提供实验依据。 1 材料与方法 中药材 20 种中药从上海董涵春堂药店购买，均未炮 制处理，切细或粉碎，过筛，备用。 浸提缓冲液盐磷酸缓冲液；mol/LTris- HC11mol/LNaC1 缓冲溶液， ；mol/LNaAcetate 缓冲溶液， pH。 2红血球生理盐水悬液兔红血球取自上海第二军医 大学所提供的家兔，取兔新鲜血液，加入装有玻璃珠的三 角烧瓶中，振摇数分钟或用玻璃棒搅拌，除去纤维蛋白原， 用生理盐水冲洗，离心 23 次，至上清液不呈红色为止。 然后根据红血球体积用生理盐水配成 2的混悬液。 样品浸提液的制备将 20 种药材每份称重 1g，称取 3 份，分别加入 10ml 的 PBS 缓冲液、Tris-HC1 缓冲液、 NaAcetate 缓冲液浸泡过夜，然后将浸提液离心，保存备用。 凝集效价测定12取 96 孔 V 型凝集板，每孔加入 25lPBS，然后在每排第一孔加样品粗提液 25l，依次倍 比稀释，每一样品作 3 排，最后分别加入兔红血球悬液 25l，设 PBS 为空白对照。静置 1h 后，用肉眼和显微镜 观察其凝集效价。 用同样方法分别做 Tris-HC1 缓冲液、乙酸钠缓冲液样 品的凝集效价。 2 结果 20 种抗菌中药 PBS 提取液的凝集效价测定结果抗菌中 药材中提取的凝集素生物活性的大小通常用凝集效价来表 示，即能引起凝集现象凝集素的最高稀释倍数 2n 表示。各 抗菌中药材的凝集素活性见表 1。表 1 20 种抗菌中药 PBS 提取液的凝集效价（略） 由表 1 可见，被测的 20 位味中药材分属 l3 科，其 中 17 种有凝集活性，占到总数的 85。使兔红血球凝集的 效价最高为 256，最低为 1。将抗菌中药材中提取的凝集素 的凝集效价分列为四级。一级效价大于 128，计 3 种：虎杖、 山豆根、板蓝根；二级效价为 3264，计 6 种：