妇科常用动物实验设计和相关技术

妇科常用动物实验设计和相关技术 妇科实验室 胡翔 实验方案设计(开题) 1、选择实验动物并预计数量、联系喂养 和实验场所 2、分组 3、造模 4、给药 5、采血 6、处死及标本取得 选择实验动物原则 近似性原则 相容和匹配原则 重复性和均一性 饲养环境和动物选择 环境 性别判定 分组 1、按随机数字表来分组 如实验要分2个组，可作如下安排1-4入A组，5-9入B组。 查随机数字表第一行起的数字为 0 5 2 7 8 4 3 7 4 1 6 A B B A A B A A B B 分四组，1 - 2入A组；3 - 4入B组；5 - 6入C组；7 - 8 入D组；9和0废弃不用。 则0 5 2 7 8 4 3 7 4 l 6 8 3 8 5 1 5 6 9 6 分组对号入座为x C A D D B B D B A C D B D C A C C x C 2、以重量分组 把未分组的动物先按笼数称重，再分几个重 量段：如大鼠可以分160g-170g、170g-180g 、180g-190g、190g-200g、200g-210g、 210g-220g等，分段越细，则重量越平均。 再将不同重量段的大鼠每组放1只，最后力 求每组大鼠重量平均 。 标记 涂染红色：0.5中性红或品红溶液 涂染黄色：3-5苦味酸溶液 涂染咖啡色：2%硝酸银溶液 涂染黑色：煤焦油的酒精溶液 组内数量少：白，头，颈，背，尾，长；一 组数量多，如小鼠，可以加涂左前、左后， 右前，右后等。 造模 1、抓取固定 2、解剖 3、实验动物的动情期和受孕动物的检查方法 4、脱毛 5、麻醉 6、手术 7、抗生素 小鼠性周期阴道分泌物涂片变化 阶段持续时间涂片可见卵巢变化 动情前期918小 时 大量有核上皮细 胞，少量角化上 皮细胞 卵泡加速生长 动情期612小 时 满视野角化上皮 细胞，少量有核 上皮细胞 卵泡成熟、排 卵 动情后期3048小 时 角化上皮细胞及 白细胞 黄体生成 动情间期3642小 时 大量白细胞及少 量粘膜 黄体退化 动情期(E)：大量无 核成熟的角化上皮细 胞，呈块状 动情间期(DI)：阴道分泌物少,有散在 白细胞、角化细胞和有核细胞 大鼠性周期阴道分泌物涂片变化 阶段持续时间涂片可见卵巢变化 动情前期918小时 大量有核上皮细胞，少 数核消失，死亡的角化 上皮细胞 卵泡加速生长 动情期612小时 满视野角化上皮细胞， 少量有核上皮细胞 卵泡成熟、排 卵 动情后期 1 1824小时大量角化上皮细胞，呈 块状 黄体生成 动情后期 2 1224小时老而小的角化细胞，已 死亡的有核细胞，大量 的白细胞 黄体生成 动情间期3642小时 阴道分泌物少，散在的 白细胞、角化细胞和有 核细胞 黄体退化 动情间期 动情期 戊巴比妥钠的剂量和用法 麻 醉 剂 动物给药途径给药剂量 （mg/kg) 常用浓 度 (%） 维持时间副作用 戊 巴 比 妥 钠 小鼠 静脉注射 腹腔注射 35 45 3 2 24小时 ，中途加 1/5量可 维持1小 时以上 轻度心动 过速，抑 制心血管 和背髓反 射 大鼠 静脉注射 腹腔注射 25 45 3 2 豚鼠 静脉注射 腹腔注射 30 4050 3 2 兔 静脉注射 腹腔注射 30 4050 3 2 狗 腹腔注射40502 主要麻醉药的麻醉深度判定指标 浅麻醉中麻醉（最佳）深麻醉 呼吸方式不规则规则的胸腹式呼吸，呼 吸次数和换气量减少 腹式呼吸，换气 量明显减少 循环系统 表现 心跳频率低， 血压下降 心跳和血压恒定心跳明显减少， 血压下降 眼的表现有眼球运动， 对光反射眼球 向内下方，瞳 孔收缩，流泪 眼球位于中央，对光反 射迟钝，瞳孔稍大 角膜反射，对光 反射消失，瞳孔 散大，角膜干燥 口腔反射有咽下、咽喉 反射 无无 肌松弛有腹肌明显腹肌异常运动 其他表现流涎、出汗、 分泌物增多、 排便、排尿 内脏牵引引起的迷走神 经反射，收缩反射消失 给 药 药物用量的确定及计算方法： 1、按体表面积折算 2、按体重折算 给药方法和途径 1、灌胃 2、静脉给药 3、直肠和阴道给药 人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值表 小白鼠 (20g) 大白鼠 (200g) 豚鼠 (400g) 家兔 (1.5kg) 猫 (2.0kg) 猴 (4.0kg) 狗(12kg)人(70kg) 小白鼠 (20g) 1.07.012.2527.829.764.1124.2378.9 大白鼠 (200g) 0.141.01.743.94.29.217.856.0 豚鼠 (400g) 0.080.571.02.252.45.24.231.5 家兔 (1.5kg) 0.040.250.441.01.082.44.514.2 猫(2.0kg)0.030.230.410.921.02.24.113.0 猴(4.0kg)0.0160.110.190.420.451.01.96.1 狗(12kg)0.0080.060.100.220.230.521.08.1 人(70kg)0.00260.0180.0310.070.0780.160.821.0 灌 胃 使用1-5m1注射器和金属钝针头灌胃，灌胃 时将灌胃针头安在注射器上，吸入药液，左手抓 住鼠背部及颈部皮肤，将动物固定，注意颈部皮 肤不宜向后拉得太紧，以免勒住气管。将鼠的背 部皮肤和尾巴固定在手腕大鱼际上，使小鼠头部 和躯干伸直、并呈垂直体位。右手持注射器将针 头由口腔而插入，避开牙齿(或由嘴角将针头插 入)，沿咽后壁徐徐插入食道下段，遇有阻力时 ，可轻轻上下滑动，不可强行插入，一般灌胃针 头插入长度小鼠为2.5-3.5cm大鼠为3.5-5.5cm。 静脉给药 一般局部环境温度要在30左右或以上，放 小鼠在适当大小的倒扣的盆里，只露尾巴，这种 容器能够压住尾部不让活动。尾部用45一50 的温水浸润半分钟，待血管扩张后或小鼠出现甩 尾时取出小鼠尾部，擦干消毒，在末端13或l 4处用左手三指捏住尾巴，右手持注射器，针 头与静脉平行(小于30度)、缓慢进针，以左手拇 食指将针头与鼠尾一起固定，试注入少许药液， 如果注射部位皮肤不发白，并感觉进药阻力不大 时，表示针头刺入静脉 。 直肠给药 一般用导尿管或灌肠用的胶皮管。在胶皮 管或导尿管头部徐液体石蜡，由放手使兔蹲卧 于桌上，以左臂及左腋轻轻按住兔头及前肢， 以左手拉住兔尾，露出肛门，并厅有手轻握后 肢，实验者将橡皮管插入家兔肛门内深度约7 -9cm，橡皮管插好后。将注射器与橡皮管套紧 ，即对灌注药液。 剪尾采血 眼眶后静脉丛采血 颈(股)动(静)脉采血,腹主动脉采血 摘眼球采血 断头采血 大、小鼠采血法 处死及标本取得 1、断髓法 2、断头法 3、标本固定 4、脏器称量 5、血液标本 全血 血浆 血清 血液标本的保存 1、血标本应具塞避光保存，保存容器最好用 玻璃、聚氯乙烯和聚四氟乙烯制品。 2、低温下保存的样品不能住室温慢慢溶解 而应放在温水水浴中短时快速溶解。血液标本 必须避免重复地冻结溶解。这样会使血液成分 改变。 3、血清一般保存于4-6c冰箱或冻结保存数天 。放于负70度可保存3个月左右，其多数成分 较稳定的。 4、全血切勿冰冻，红细胞在冰点下受到物理 作用的改变不可逆，将引起溶血和影响结果。 取血注意事项 1、注射器及试管干燥洁净 2、血液应避免流经动物皮毛 3、血液应沿