实验八大分子物质的水解和糖发酵试验ppt课件

实验八实验八 大分子物质的水解和糖发酵试验大分子物质的水解和糖发酵试验 主主 讲讲: :徐尔尼徐尔尼 生命科学学院生物技术系生命科学学院生物技术系 一、目的与要求一、目的与要求 证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同 ，从而说明不同微生物有着不同的酶系。，从而说明不同微生物有着不同的酶系。 掌握微生物大分子水解试验的原理和方法。掌握微生物大分子水解试验的原理和方法。 了解糖发酵的原理及在肠道细菌鉴定中的重要作用。了解糖发酵的原理及在肠道细菌鉴定中的重要作用。 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 学习微生物接菌技术。学习微生物接菌技术。 二、基本原理 1 1、淀粉水解试验、淀粉水解试验 微生物不能直接利用淀粉，必须靠自身产微生物不能直接利用淀粉，必须靠自身产 生的胞外淀粉酶将大分子淀粉分解成糊精、双生的胞外淀粉酶将大分子淀粉分解成糊精、双 糖和单糖才能进入细胞内，细菌是否能产生淀糖和单糖才能进入细胞内，细菌是否能产生淀 粉酶可通过观察细菌菌落周围的淀粉物质是否粉酶可通过观察细菌菌落周围的淀粉物质是否 被水解来证实，淀粉遇碘液会产生蓝色，被细被水解来证实，淀粉遇碘液会产生蓝色，被细 菌水解淀粉的区域，用碘则呈褐色。菌水解淀粉的区域，用碘则呈褐色。 二、基本原理 2 2、明胶水解试验、明胶水解试验 微生物不能直接利用明胶这蛋白质，必须靠微生物不能直接利用明胶这蛋白质，必须靠 自身产生的胞外明胶酶将大分子蛋白质水解成蛋自身产生的胞外明胶酶将大分子蛋白质水解成蛋 白胨或氨基酸才能进入细胞内，细菌能否产生明白胨或氨基酸才能进入细胞内，细菌能否产生明 胶酶可通过明胶穿刺培养来证实，在微生物的明胶酶可通过明胶穿刺培养来证实，在微生物的明 胶酶作用下，明胶失去凝固性，呈液化状态。胶酶作用下，明胶失去凝固性，呈液化状态。 二、基本原理 3 3、糖发酵试验、糖发酵试验 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应， 在肠道细菌的鉴定中尤为重要。大肠菌群能在在肠道细菌的鉴定中尤为重要。大肠菌群能在3737 0 0C C 培养下，利用乳糖产酸、产气。当产酸时，溴甲酚培养下，利用乳糖产酸、产气。当产酸时，溴甲酚 紫指示剂可由紫色（紫指示剂可由紫色（pH6.8pH6.8）变为黄色（）变为黄色（pH5.2pH5.2）。）。 当产气时，可通过倒置小倒管内的气泡来判断。当产气时，可通过倒置小倒管内的气泡来判断。 四、操作步骤四、操作步骤 1 1、淀粉水解试验、淀粉水解试验 溶化三角瓶内的淀粉培养基溶化三角瓶内的淀粉培养基 趁热倒入二块无菌培养皿各内趁热倒入二块无菌培养皿各内 约约15ml 15ml 冷凝后点植法接入冷凝后点植法接入普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 贴好标签贴好标签 平板倒置，平板倒置，3737 0 0 C C培养培养2424小时小时 滴加碘液鉴别有无淀粉水解圈滴加碘液鉴别有无淀粉水解圈 2 2、明胶水解试验、明胶水解试验 取四支明胶试管培养基取四支明胶试管培养基 用接种针分别穿刺接入用接种针分别穿刺接入普通变形杆菌普通变形杆菌 、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌，另一支不接菌为空白对照，另一支不接菌为空白对照 管管贴好标签贴好标签 2020 0 0 C C培养培养3 35d5d （或（或3737 0 0 C C培养培养2 2d d ，取出置冰浴，取出置冰浴 冷却）冷却）观察明胶液化情况观察明胶液化情况 四、操作步骤四、操作步骤 3 3、乳糖发酵试验、乳糖发酵试验 取三支乳糖蛋白胨培养基取三支乳糖蛋白胨培养基 分别接入分别接入大肠杆菌、普通变形杆菌大肠杆菌、普通变形杆菌 ， 另一支不接菌为空白对照管另一支不接菌为空白对照管 贴好标签贴好标签 3737 0 0 C C培养培养2424小时小时 观察产酸、产气情况观察产酸、产气情况 4 4、葡萄糖发酵试验、葡萄糖发酵试验 取三支葡萄糖蛋白胨培养基取三支葡萄糖蛋白胨培养基 分别接入分别接入大肠杆菌、普通变形杆大肠杆菌、普通变形杆 菌菌，另一支不接菌为空白对照管，另一支不接菌为空白对照管 贴好标签贴好标签 3737 0 0 C C培养培养2424小时小时 观察产酸、产气情况观察产酸、产气情况 操作要点：操作要点： 注意无菌操作，勿染杂菌。注意无菌操作，勿染杂菌。 接好菌的平板一定要倒置放入培养箱中。接好菌的平板一定要倒置放入培养箱中。 无菌操作技术术 五、实验数据及处理结果五、实验数据及处理结果 1 1、大分子物质水解试验、大分子物质水解试验 将结果填入下表。将结果填入下表。“ “+ +” ”表示阳性，表示阳性，“ “- -” ”表示阴性表示阴性 菌菌 名名淀粉水解试验淀粉水解试验明胶水解试验明胶水解试验 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 普通变形杆菌普通变形杆菌 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 对照对照 2 2、糖发酵试验、糖发酵试验 将结果填入下表。将结果填入下表。“ “ ” ”表示产酸产气，表示产酸产气，“ “+ +” ”表示产酸，表示产酸，“ “- -” ”表示阴性表示阴性 糖类发酵糖类发酵大肠杆菌大肠杆菌普通变形杆菌普通变形杆菌 对照对照 葡萄糖发酵葡萄糖发酵 乳糖发酵乳糖发酵 六、六、思考与讨论思考与讨论 1 1、你怎么解释淀