体外分析的数据处理检验核医学

体外分析的数据处理 数据处理基本步骤 n数据处理是将实验测得的未知样品的直接 结果换算成剂量，每次实验均需绘制标准 曲线（剂量反应曲线），从中查出待测样 品剂量。 n1、绘图法（有人为误差） n2、数学模型拟合法 第一节 RIA、IRMA剂量 反应曲线的建立 n一、RIA剂量反应曲线 n二、IRMA剂量反应曲线 一、RIA剂量反应曲线 n反应动力学模式： *Ag+Ag+Ab (*Ag-Ab)+(Ag-Ab) n其中：Ab限量 （*Ag+Ag）抗原决定簇 Ab结合位点 n 对于Ab， *Ag和Ag不可辨别，与Ab结合机 率一致 n如果：固定*Ag量， Ag则（*Ag-Ab）， Ag则（*Ag-Ab）； Ag浓度与（*Ag-Ab） 放射性计数呈反向关系 RIA剂量反应曲线 nRIA-Kit有一组具有梯度，已知为标准浓度 的Ag标准品，以此为横坐标，以与之 相对应的（*Ag-Ab）放射性计数为纵坐标 ，可建立反映Ag浓度与（*Ag-Ab）计数的 反向变化规律曲线RIA剂量反应曲线。 n待测物的Ag浓度可根据其对应的（*Ag-Ab ）计数，在曲线中查得。 常用专业名词 nT（Total）管计数：每一试管投入的*Ag的 放射性计数。 nB（Bound）管计数：（*Ag-Ab）的计数也 称结合计数 nBo管计数：当Ag=0浓度时的（*Ag-Ab） 计数，为最大结合计数 n F（Free）计数：游离的*Ag的放射性计数， F=T-B RIA剂量反应曲线反应坐标（ 纵坐标）表达方式 B-(*Ag-Ab)计数 F/B或B/F 结合计数与游离计数之比 B T = (*Ag-(*Ag-AbAb) )计数计数 每管总计数 0.990 n拟合百分比偏差 DEV%=(/Xi)100% 85%，Bn/B03 四、标准曲线的质控参数 nB0%：3070% ，50%最佳 nNSB/T0.99 n拟合百分比偏差（DEV%）： |DEV%|5） nPx= Pi（阳性对照样品n3） 1 n 1 n 2、控制对照组离散范围 n Ni1.5Nx 或Ni1.5Px 或Pi2.1 或 2、不确定区范围和Nx计数水平有关 Nx 不确定区（S/Nx） 50 1.06-3.3 100 1.48-2.78 300 1.81-2.41 500 1.91-2.32 有的试剂盒确定为2.10.2为不确定区。 在不确定区范围内的S/Nx的样品，应重新再做 一遍，阳性结果仍然重复为阳性结果者判为阳性， 否则一律判为阴性。 s N x +P x 0.5 第五节 RBA的数据处理 （单位点） 一、单点法RBA的数据处理 n例：实验室进行外周血WBC的GCR分析，测得 TB为4500cpm，NSB为2500cpm，3H-Dex的SA为 1.851012Bq/mmol，蛋白量为1mg，液闪的 Eff=30% nSB=TB-NSB=4500-2500=2000cpm n2000/（0.3601.8510121）=60fmol/mg n1mol=6.021023分子 n60fmol/mg= 6010-156.021023=3.61010受体/mg蛋白 若：WBC细胞数为7.5106个，则 RT=3.61010/ 7.5106=4800受体/细胞 二、多点法（以Scatchard为例） n例： 实验室做外周血WBC的GCR多点分析，3H -Dex的SA为38.0Ci/mmol，放化纯为99%， 配成工作浓度10uCi/ml. 1、加样程序 WBC/GCR 3H-Dex多点RBA 编编号3H-DexDex(ul)PBS补补足体 积积ul细细胞ululnM TB1104.38 90500 NSB1104.38585500 TB2208.77 80500 NSB2 TB32510.95 75500 NSB32510.9512.562.5500 TB43013.16 70500 NSB4 TB54017.54 60500 NSB54017.541540500 TB65021.93 50500 NSB65021.932525500 2、测量结果 WBC/GCR 3H-Dex多点RBA测量结果 编号 3H-Dex （ul) TB（ cpm）NSB（cpm）T(cpm) 1101786569144530 2202799 289060 32533221375361325 4303627 433590 54042352117578120 65047402690722650 3、建立NSB的回归方程 n以NSB管的cpm对3H-Dex的体积数（10、 20、25、3040、50）建立回归方程，得 到： Y=52.5456X+45.7007（r=0.9997） 将未做的NSB管对应的3H-Dex体积（20、 40）代入方程，得到NSB各管值。 （10、571）；（20、1097）；（25、1359 ）；（30、1622）；（40、2148）；（50 、2673） 4、计算B、F和B/F 3H-Dex（ul)SB（cpm）F（cpm）B/F 1012151427440.008512 2017022862610.005946 2519633580030.005483 3020054299630.004663 4020875738850.003637 5020677179100.002879 5、换算B相对应的3H-Dex 物质量 比放= SA为38.0Ci/mmol，放化纯为99%， Eff=42% 1、38Ci/mmol=38uCi/nmol=1.406106Bq/nmol 2、1nmol=1.406106Bq0.99=1.4202106Bq 3、1cpm=1/(0.4260)=0.03968Bq =0.03968/(1. 4202106Bq)=0.0282fmol 换算B对应的fmol数 n1215cpm-34.26（fmol） n1702cpm-48.00 （fmol） n1963cpm-55.36 （fmol） n2005cpm-56.54（fmol） n2087cpm-58.85 （fmol） n2067cpm-58.30 （fmol） n以B对应的fmol数为横坐标，B/F为纵 坐标进行Scatchard作图 6、Scatchard作图 7、计算RT和KD ny=0时，对应的为RT 即 RT=0.01542/0.0001972=78.195fmol 如果细胞数为7.5106个，则则 RT=6276个受体/细细胞 n截距=