甲肝定量测定课件

甲肝定量测定 Abbott AXSYM SYSTEM 2010.07.31 原理 使用Abbott AXSYM System 检测血浆或血清中总Anti-HAV 1 疾病的急性期抗体：IgM anti-HAV（决定疾病急性期最可靠 的标志是病毒特异的IgM anti-HAV ） 2 恢复期并可持续多年的抗体：IgG anti-HAV 竞争法：样品中的anti-HAV与酶标抗体（与碱性磷酸酶结合的 Anti-HAV）竞争结合微球上的Hepatitis A Virus 原理 1 样品+微球上的HAV结合，形成抗原抗体复合物 2 微球与玻璃纤维杯不可逆结合 3 加入酶标抗体，与微球上未与样品中anti-HAV结合的位 点结合 4 洗脱未结合酶标抗体 5加入底物MUP 6碱性磷酸酶催化从MUP移除一个磷酸集团生成产物4- methylumbelliferone(MU) 7MU由荧光照射后产生荧光，由光学系统测量 试剂 定标液：AxSYM HAVAB 2.0 Quantitative Standard Calibrators（REF 3C76-01） 质控液： AxSYM HAVAB 2.0 Controls（REF 6C70-10 ） 试剂： AxSYM HAVAB 2.0 Reagent Pack（REF 6C70-20） 酶标抗体， Hepatitis A Virus包被的微球 稀释液： AxSYM HAVAB 2.0 Quantitative Specimen Diluent（REF 3C76-50） AxSYM 1号液（底物液 ）：SOLUTION 1 MUP(REF 8A47-04) 以上试剂贮存：2-8C，下面三种试剂贮存于15-30C AxSYM 3号液（洗脱液）：SOLUTION 3 MATRIX CELL WASH(REF 8A81- 04)Ag-Ab结合后洗脱未结合的酶标Ab AxSYM 4号液（管路冲洗液和FPIA稀释液）： SOLUTION 4 LINE DILUENT （REF 8A46） 探针清洗液（系统保养液）：PROBE CLEANNING SOLUTION(REF 9A35- 04/9A35-05) 注意：甲肝抗体测定，SOLUTION 4是定性检测的稀释液，定量测定有专门的稀释液 试验材料 样品杯sample cups (REF 8A76-01 ) 反应杯reaction vessels（REF 8A75-02） 纤维杯matrix cells (REF 8A73-02) 试验方法 样品体积：样品杯172L，同一样品再次测定， 原杯补加122 L 定标液：垂直加8滴 质控液：垂直加5滴(实验证明3滴足够) 样品 检测样品避免反复冻融（6次），解冻后样品需充分混匀 并在使用前离心（RCF 10，000g 10min），取澄清的 部分，而不要取脂质层。 样品检测前2-8C可储存14天，但超过3天测前要重新离 心。不确定测定时间的样品在-20C或更低温度储存。 样品上机后3h内检测 100mIU/ml的需稀释（1：15，1：200） 定标 定量测定使用的是六点定标（STANDARD CAL） 以下三种情况发生时需重新定标 1 更换批号不同的试剂 2 质控值超出范围 3 进行MEIA光路校正 质控 质控：每日开始检测样品前；新批号试剂定 标通过后 阳性或阴性对照超出界值：表明试剂变质或 操作错误。要重新定标、样品需重测。 Target Concentration (mIU/ml) Concentration Range (mIU/ml) Control+0.000.00 to 10.00 Control-27.0020.00 to 34.00 上次实验问题 上次实验两次测定结果相差很大，原因： 1 第一次质控失控 2 稀释液使用的是定性的稀释液，应当使用定量试 剂专用的稀释液 3 样品放置后未离心 本次实验改进 使用定量试剂专用的稀释液（REF 3C76-50） 样品血清解冻后充分混匀 （低速振荡或轻轻颠倒混匀） ， 10，000转/min、10min离心，避免颗粒物质干扰； 4C放置超过三天的离心，以保证好的重复性 宁波标本115份中有1/4需稀释，本次订试剂及稀释液时可 以做参考 本次实验改进 实验室需挂窗帘：仪器须远离热源或冷源