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Medical MicrobiologyMedical Microbiology Department of Microbiology,Department of Microbiology, HMUHMU 哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学微生物学教研室 王王 燕燕 办公室:病原学馆办公室:病原学馆318318室室 E-mailE-mail: QQ QQ:11230443051123044305 呼吸道感染的细菌 o 分枝杆菌属 n 结核分枝杆菌 n 麻风分枝杆菌 o 棒状杆菌属 n 白喉棒状杆菌 o 军团菌属 n 嗜肺军团菌 分枝杆菌属 Mycobacterium 教学大纲 o 结核分枝杆菌 n 形态、染色及培养特性,抵抗力和变异性 n 致病物质及其特点,所致疾病 n 结核菌素试验、卡介苗,治疗和预防原则 o 麻风分枝杆菌 n 形态染色特点,致病特点及分型 分枝杆菌属(Mycobacterium ) o 是一类细长略弯的分枝状杆菌 o 抗酸杆菌 细胞壁脂质含量高 染色 培养 抵抗力 致病特点 免疫特点 分枝杆菌属的分类 分类生长特点主要对人致病的分枝杆菌 结核分枝杆菌复 合群 缓慢结核分枝杆菌、牛分枝杆菌 非结核分枝杆菌 组 缓慢、光产色堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌 组 缓慢、暗产色瘰疬分枝杆菌、苏加分枝杆菌 组 缓慢、不产色鸟-胞内分枝杆菌、蟾分枝杆菌 组 快速偶发分枝杆菌、鬼分枝杆菌 麻风分枝杆菌目前尚不能在人工培养基上生长 第一节 结核分枝杆菌 (tubercle bacilli) History o TB present in human population since 2400 BCE o Egyptian mummies shown signs of tubercular decay in spine and skull o 1882.3.24 Robert Koch 流行病学 o全球疫情 n感染结核菌人口 20亿 n现结核病人 2000万 n每年新发病人 8001000万 n每年死于结核病 300万人 o我国疫情 n活动性肺结核病人 450万人 n每年新发病人 200万人 n每年因结核病死亡 25万人 n每年新发耐多药结核 12万人 Robert Koch Estimated TB incidence rate, 2006 Estimated new TB cases (all forms) per 100 000 population The boundaries and names shown and the designations used on this map do not imply the expression of any opinion whatsoever on the part of the World Health Organization concerning the legal status of any country, territory, city or area or of its authorities, or concerning the delimitation of its frontiers or boundaries. Dotted lines on maps represent approximate border lines for which there may not yet be full agreement. WHO 2006. All rights reserved No estimate 0-24 50-99 300 or more 25-49 100-299 Re-emerging Infectious Disease (重现的传染病) Prevalence of HIV/TB co-infection 流行病学 o “世界防治结核病日”3月24日 n 2014年 你我共同参与,依法防控结核 n 2013年 你我共同参与,消除结核危害 n 2012年 你我共同参与,消除结核危害 n 2011年 遏制结核,共享健康 n 2010年 遏制结核,健康和谐 n 2009年 关注农民工,共享健康 n 2008年 控制结核,人人有责 n 2007年 结核流行广泛,控制从我做起 n 2006年 防治结核,坚持不懈 生物学性状 o 形态与染色 n 细长略弯,有时呈分枝状 n (14)m 0.4m n 齐-尼抗酸染色阳性 “谗、懒、丑、顽、变” o “谗、懒、丑”: n 罗氏培养基(含蛋黄、甘 油、马铃薯、无机盐、孔 雀绿等) n 生长缓慢;培养需3-4周有 菌落生成 罗氏培养基 NOTE: cord growth (serpentine arrangement) of virulent strains 生化反应 抵抗力 四抗 抗干燥 抗酸碱 抗碱性染料 抗青霉素等 三怕怕湿热 怕紫外线怕脂溶剂 不发酵乳糖,热触酶阴性 “顽” : o 形态、菌落、毒力、免疫 原性、耐药性等均可变异 o 卡介苗(Bacilli Calmette- Guerin,BCG) n 将有毒的牛型结核分枝杆菌 培养于含甘油、胆汁、马铃 薯的培养基中,经230次移种 传代,历时13年而获得的减 毒活菌株,目前广泛用于人 类结核病的预防 “变” : 致 病 物 质 二、致病性 类脂 索状因子(破坏细胞,引起肉芽肿) 磷脂(促使单核细胞增生,形成结核结节) 蜡质D(引起迟发型超敏反应) 硫酸脑苷脂(抑制吞噬体与溶酶体结合) 蛋白质引起迟发型超敏反应 多糖 局部病灶细胞浸润 分枝菌酸(与抗酸性有关) ProteinWax-D + 机体致敏 对结核菌素产生迟发型超敏反应 蛋白质也可刺激机体产生相应抗体 蛋白质:蛋白质: 致病物质 致 病 物 质 二、致病性 类脂 索状因子(破坏细胞,引起肉芽肿) 磷脂(形成结核结节) 蜡质D(引起迟发性过敏反应) 硫酸脑苷脂(抑制吞噬体与溶酶体结合) 蛋白质引起迟发性过敏反应 多糖 局部病灶细胞浸润 分枝菌酸(与抗酸性有关) 致病机制 o 入侵途径 n 呼吸道 n 消化道 n 破损皮肤 Tuberculosis: Transmission and Natural History Infection Initial containment 95% Early Progression - 5% Tuberculosis: Transmission and Natural History Infection Initial containment 95% Late Progression - 5% Self-Cure 90% Early Progression - 5% 胞内菌 致病机制 原发后结核 病程呈慢性渐进性,伴有乏力、 体重减轻、咳嗽、盗汗、午后潮 热、胸痛等。病灶多局限呈干酪 样结节,若结节破溃,则可形成 空洞,传染性强。 致病性致病性 原发结核 原发综合征:原发灶、淋 巴管炎、肺门淋巴结肿大 原发感染 肺结核肺结核 多发生于儿童 原发灶原发灶 (渗出性炎性病灶)(渗出性炎性病灶) 淋巴管淋巴管 肺门淋巴结肺门淋巴结 原发综合征胸透为哑铃形阴影 胸透为哑铃形阴影 原 发 型 肺 结 核 正 原 发 型 肺 结 核 侧 诱发因素:原发病灶中潜伏的结核杆菌; 外界的结核杆菌再次侵入。 疾病特点:病灶局限,不累及邻近淋巴结,但易发生慢 性肉芽肿、干酪样坏死和空洞,传染性强。 病程呈慢性渐进性,伴有乏力、体重减轻、 咳嗽、盗汗、午后潮热、胸痛等。 原发后感染(多发生于成年人) 肺结核 右 上 干 酪 样 肺 结 核 右 下 干 酪 样 肺 结 核 肺外感染 o 常见于脑、肾、骨、关节、生殖系统等结核 急 性 粟 粒 型 肺 结 核 Large caseating tubercleMiliary tubercles HUMAN LUNGHUMAN LUNGHUMAN LUNGHUMAN LUNG TUBERCULOSIS 免疫性 o 感染免疫(infection immunity)/有菌免疫 n 即只有当TB菌在体内存在时才有免疫力,一 旦体内的TB菌被杀灭,免疫也随之消失。 o 细胞免疫为主 o 与迟发型超敏反应同时发生 以前感染过或免疫豚鼠正常豚鼠 24-48小时10-14天 局部浅溃疡 局部坏死溃疡 不扩散, 脱落后自行愈合 附近淋巴结肿大 有毒TB菌 全身扩散 皮下 郭霍现象 附近淋巴结不肿大 结核菌素试验 o 原理 n 皮肤迟发型超敏反应 o 试剂 n 旧结核菌素(old tuberculin,OT) n 纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD) 结核菌素试验方法 o 注射于前臂皮内 o 48-72h 阴性 0-5mm 阳性 5-15mm 强阳性 15mm 结核菌素试验结果分析 阳性 强阳性 阴性 硬结、红肿直径 5-15mm之间 感染过结核杆菌 卡介苗接种成功 硬结直径超过 15mm以上 表明可能有活动性结 核,应进一步检查 注射部位有针眼大的 红点或稍有红肿,硬 结直径小于5mm 无结核免疫力, 但应考虑: 感染初期,T细胞未致敏 老年人 严重结核病患者 获得性免疫功能低下 o 流行病学调查或随访 o 协助结核的诊断及其疗效判断 结核菌素试验应用 结核分枝杆菌检验程序 标本 核酸 检测 接种固体培养基 可疑菌落 涂片抗酸 染色镜检 抗体 检测 慢性生长菌快速生长菌 菌种鉴定 标本前处理 接种液体 培养基 接种小白鼠 豚鼠 脏器涂片 镜检 抗酸染色鉴定试验 结核分枝杆菌痰标本抗酸染色结核分枝杆菌尿标本抗酸染色 荧光金胺染色 结核分枝杆菌菌落特点 特异性防治 o 卡介苗预防 n 卡介苗是目前唯一可预防结核的疫苗 n 对象 新生儿及结核菌素试验阴性儿童 o 药物治疗 n 链霉素、异烟肼、对氨基水杨酸 n 利福霉素类、喹诺酮类 o 五项原则 n 早期、联合、规则、足量、全程 患者年龄:32 患者性别:女 全部症状:因发热,胸痛,咳嗽,血痰1周入院。近 三月来有低热,午后体温增高,咳嗽,曾在本单位诊 断为“感冒”,给予抗感冒治疗,疗效欠佳。1周来 体温增高,咳嗽加剧,痰中带血.半年来有明显厌食 ,消瘦,夜间盗汗。 治疗情况:体温38度,脉搏88次每分,呼吸28次每 分,发育正常,营养稍差,消瘦,神志清楚查体合作, 胸部检查无明显异常。X线检查可见双肺纹理增粗 ,右肺间有片状阴影。取痰液做细菌培养和抗酸检 查均为阴性。PPD试验强阳性。再次取痰送检,经 浓缩集菌后涂片,抗酸杆菌阳性。 第二节 麻风分枝杆菌 (M. leprae) 生物学性状 o 形态与染色 n抗酸染色阳性 n典型的胞内寄生菌 n麻风细胞 o 培养特性 n不能在人工培养基中生长 n犰狳 o 抵抗力 n在干燥环境中7天以内仍有繁殖能力 o 犰狳(读音:qi y),又称“铠鼠”、“披甲猪”。 o 犰狳身上的铠甲由许多小骨片组成,每个骨片上长着一 层角质物质,异常坚硬。 o 2011年4月底,美国研究人员称,美国首例麻风病人可能 由犰狳传染而来。 传播途径:呼吸道、接触传播传染源:瘤型麻风传染源:瘤型麻风 病人为主要传染源病人为主要传染源 以细胞免疫为主以细胞免疫为主 肉芽肿损害肉芽肿损害 色素减退色素减退 感觉缺失感觉缺失 致病性与免疫性 分型 o 根据机体的免疫状态、病理变化和临床表现分 n 瘤型 传染性强 n 结核样型 少侵犯内脏 o 处于两型之间的分成2类 n 界限类 n 未定类 瘤型麻风 n 患者细胞免疫缺陷、巨噬细 胞功能低下 n 主要侵犯皮肤、黏膜、神经 、眼及内脏 n 形成红斑和结节,“狮面”状 n 传染性强且病情严重,为开 放性麻风 Lepromatous Leprosy (Early/Late Stages) 结核样型麻风 n 患者细胞免疫较强 n 病变多发生于皮肤与外周神 经,很少侵犯内脏 n 传染性小,为闭锁性麻风 n 极少演变为瘤型,称良性麻 风 结核样型麻风皮肤损害 o 界线类 n 兼有瘤型与结核样型的特点 n 能向两型转化 n 病变部位可找到含菌的麻风细胞 o 未定类 n 病变如一般非特异性炎症,属于早期病变 n 病灶中很少找到麻风杆菌 n 大多数可转变为结核样型 o 抗酸染色 微生物学诊断 麻风细胞抗酸染色麻风分枝杆菌组织切片(Triff染色) 防治原则 o 目前尚无有效的菌苗进行特异的预防 o 早期发现早期隔离治疗 o 砜类、利福平和丙硫异烟胺 Lepromatous Leprosy Pre- and Post-Treatment 问 题 o 简述结核分枝杆菌的主要生物学特性 o 简述结核菌素试验原理、结果判断及意义 o 简述结核病的预防及抗结核药物的治疗原则 o 简述麻风分枝杆菌的生物学特性及致病特点 棒状杆菌属 Corynebacterium 微生物学教研室 王燕 教学大纲 o 掌握内容:白喉棒状杆菌形态染色、培养特性 致病物质及所致疾病 微生物学检查法及特异性防治原则 o 熟悉内容:白喉棒状杆菌的免疫性及锡克试验原 理及结果判定 o 了解内容:棒状杆菌属的分类、分布及致病性 棒状杆菌属 Corynebacterium o 白喉棒状杆菌(Cdiphtheriae) 引起白喉 o 类白喉杆菌(diphtheroid bacilli) 假白喉棒状杆菌 干燥棒状杆菌 微小棒状杆菌 结膜棒状杆菌 痤疮棒状杆菌 属于条件致病菌 Case o 一幼儿园女孩,5岁,因喉咙痛和发烧4天来院就诊.因 患儿父母于6个月前由俄罗斯移民至美国,免疫状况 不祥。检查病人发现情绪焦虑,呼吸急促,呈重症 容。体温38.6,声音嘶哑。查体发现患者扁桃体 及咽部水肿,扁桃体表面由悬雍垂至软腭覆有灰色 假膜。颈淋巴结大。肺影清晰,初步诊断为咽白喉 ,并立即转至当地的儿童医院要求进一步确诊。 o 怎样进一步确诊?应如何进行治疗? o 对幼儿园同班 及其他班小朋友如何采取预防措施? 白喉棒状杆菌 Corynebacterium. diphtheriae 形态与染色 o 革兰阳性,细长弯曲 ,一端或两端膨大呈 棒状 o 美蓝或奈瑟染色,菌 体两端或一端可见着 色较深的异染颗粒 培养特性 o 需氧或兼性厌氧 o 吕氏凝固血清培养基 o 亚碲酸钾(K2TeO23H2O)血琼 脂平板 o 根据菌落溶血分: 重型轻型中间型 变异、抵抗力 o 变异 n 形态、菌落 S型变为R型 n 毒力 无毒变有毒 o 抵抗力 n 较其他无芽胞细菌强 n 对青霉素及广谱抗生素敏感,对磺胺不敏感 致病物质 o 白喉毒素(diphtherotoxin) n 毒性强、具有高度抗原性 n 由A、B两个肽链经二硫键连接 n 抑制宿主细胞蛋白质合成:使延伸因子EF-2失活,抑 制氨基酸转移,阻断蛋白肽链形成. o 索状因子(cord factor)糖脂,破坏细胞线粒体 o K抗原 不耐热的糖蛋白,抗吞噬

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