细胞色素p450与药物合理用药_1课件

细胞色素P450酶 在药物研究中的应用 Cytochrome P450 武汉大学药学院 细胞色素P450 在药物合理用药中的作用 正确判断疾病 选择正确的药物 安全、有效、经济使用药物 最小的卫生资源投入 最大的医疗和社会效益 目前医药界存在的问题 乱研 乱产 乱用 乱销 急于求成的科学家 急于 接轨 的管理 急于发财的商家 急于救人的医生、 急于治病的病人 用药问题太多 滥用抗生素关于上感用抗生素，浪费 25% 养 殖 业 用药剂量过大产生毒性作用 联合用药过多产生药物相互作用 提高医生的用药水平！ 提高病人的自我保护意识！ 提高职业药师的责任感！ 不良反应现状 Adverse Drug Reaction ADR * WHO报道： 因ADR住院5% 住院病人ADR发生率10-20% 美国ADR救治费760亿/年；英国39亿/年 * 我国5000-8000万残疾人，听力残疾占1/3，其 中因药物至残占60-80% 不良反应现状 Adverse Drug Reaction ADR 武汉地区 1/7死于不合理用药，占住院死亡率11% 处方错误 ：4% 无必要甾体抗炎药 47% 不良反应没有得到合理治疗23% 例：年轻的癫痫死亡病例无明显病理变化 卡马西平+苯妥英钠 血药浓度降低 思考 比较注重知识的积累，较少讨论实际案例 医生查房，主要讨论诊断，不查合理用药 方案 医生诊断 药师参与用药决策 合理用药必备条件 临床药理学的基本知识生物药剂学的基本知识 药物的体内过程 靶部位浓度高、低、持续时间疗效 药物代谢 是维持血药浓度的关键因素 催化药物代谢药物代谢酶 决定药物代谢速度药物代谢酶活性 药物代谢酶存在的部位肝、肠、脑、肾、肺 药物代谢主要途径氧化、还原、水解、结合 药物代谢酶类型细胞色素P450 非细胞色素P450 I 相 II 相 药物代谢结果 1 失活（减毒或解毒） 大多数药物 2 活性明显增加 非那西丁 对乙酰氨基酚 前药（prodrug)酶活化靶向前体药物 3毒性明显增强 异烟肼 4致癌性增加环境致癌物与肿瘤易感性 细胞色素细胞色素P450P450概述概述 肝脏内存在许多药物代谢酶系统肝脏内存在许多药物代谢酶系统: : 微粒体药物代谢酶系统：微粒体药物代谢酶系统： 主要为细主要为细 胞色素胞色素450(450(cytochromecytochrome P450,CYP) P450,CYP)， 非微粒体酶系统非微粒体酶系统 肠道菌群酶系统；肠道菌群酶系统； CYP450酶系 是因其主要组成P450的还原型与CO结合体 在450nm处有特征光吸收蜂而得名。 细胞色素 P450 分布广泛，各种脊椎动物 、无脊椎动物、植物、真菌和细菌中均有它 的存在。其分布具有一定的选择性，它分布 于外源化合物进入体内的主要入口组织。 CYP450SCYP450S的生化功能的生化功能 CYP450SCYP450S催化的主要反应有烷基羟基化、烷基环氧化、羟基的氧化催化的主要反应有烷基羟基化、烷基环氧化、羟基的氧化 、氨氧硫部位的脱烷基化、氧化性脱氨、脱氢、脱卤素、氨氧硫部位的脱烷基化、氧化性脱氨、脱氢、脱卤素、C-CC-C断断 裂等等。裂等等。 总反应式：总反应式： 2e-,2H2e-,2H+ + RH+O RH+O 2 2 ROH+H ROH+H 2 2 O O P450P450 由由450450酶所催化的药物相反应常为其在体内代谢的限速步骤酶所催化的药物相反应常为其在体内代谢的限速步骤, , 可影响药物的生物利用度可影响药物的生物利用度, ,而药物在体内的药动学个体差异往往是而药物在体内的药动学个体差异往往是 由于参与代谢的由于参与代谢的450450酶活性的个体差异所致酶活性的个体差异所致, ,因为因为450450酶活性酶活性 常受到遗传因素、年龄、疾病状态或其它药物相互作用的影响而常受到遗传因素、年龄、疾病状态或其它药物相互作用的影响而 发生改变。发生改变。 CYP450SCYP450S分类分类 CYP450SCYP450S由许多异构体组成由许多异构体组成, ,这些异构体组成了这些异构体组成了 450450酶家族或亚家族。酶家族或亚家族。 (1)(1)线粒体线粒体P450P450：参与类固醇激素的生物合成参与类固醇激素的生物合成, , 与药物或外来物质代谢无关与药物或外来物质代谢无关, ,不属于药物代谢酶不属于药物代谢酶 的范畴的范畴; ; (2)(2)微粒体微粒体P450P450：参与药物、致癌物、类固醇参与药物、致癌物、类固醇 激素和脂肪酸的代谢。激素和脂肪酸的代谢。 (3)(3)线粒体和微粒体皆有分布的线粒体和微粒体皆有分布的P450P450：参与一参与一 些具有重要生理功能的内源性物质的生物合成与些具有重要生理功能的内源性物质的生物合成与 代谢代谢, ,如如血栓素、前列环素、胆固醇、维生素血栓素、前列环素、胆固醇、维生素3 3 和胆汁酸和胆汁酸等。等。 CYP450S命名 CYP450酶家族是由字母CYP, CYP正体表示酶，斜体 CYP 表示基因 根据蛋白质一级结构氨基酸序列的同源性，40%归为 同一类， 由阿拉伯数字110来表示,如：CYP2; 每个家族又分为亚家族（subfamily), 同源性55%归于 同一个亚族，用大写英文字母进行区分,如 CYP3A、 CYP2D 等； 同一亚族中，根据发现的顺序用阿拉伯数字编序，区分不 同的个体，如CYP3A4、 CYP2C19等 再以 1表示野生型, 2以后表示变异型的变种, 如CYP11 2 几中重要的几中重要的CYP450CYP450酶酶 CYP3A4CYP3A4 CYP2D6 CYP2D6 CYP2C CYP2C CPY1A2 CPY1A2 CYP2E1 CYP2E1 由各种p450酶代谢的药物的相对比例 CYP3A4CYP3A4 CYP3CYP34 4是成人是成人CYP450CYP450中最重要的成分中最重要的成分, ,约占约占 CYP450CYP450总量的总量的30%30%40%40%, ,居第一位。该酶在许居第一位。该酶在许 多内、外源化合物的代谢中起着重要作用包括多内、外源化合物的代谢中起着重要作用包括3838个类个类 别共别共150150多种药物在体内的代谢多种药物在体内的代谢, ,还参与部分前致癌物还参与部分前致癌物 的活化。的活化。 外源性化合物：外源性化合物： 红霉素、尼莫地平、利多卡因、环孢红霉素、尼莫地平、利多卡因、环孢 素、奥美拉唑、可的松、雌二醇、素、奥美拉唑、可的松、雌二醇、 - -还原还原 酶抑制剂等酶抑制剂等 内源性化合物：内源性化合物： 雌二醇、可待因雌二醇、可待因 CYP3A4 CYP34基因位于7号染色体2区1带,近年来发现的变异 等位基因34 为5启动区290,其分布 频率在白人为4.2%,黑人为66.7%,而在中国人中未见。 变异体与酶活性关系有待更深入的研究。 尽管CYP34活性存在广泛的个体差异,但目前尚无证据 表明其存在遗传多态性。 低的CYP34活性是浸润期膀胱癌发展的危险因素。 Romker等证实34的低活性与53的过度表达有显著联 系,可能为CYP34参与了环境中一种目前尚不清楚的可 诱导53突变的前致癌物的解毒反应。 CYP2D6-CYP2D6-最具遗传多态性的酶系最具遗传多态性的酶系 CYP2CYP26 6占成人占成人CYP450SCYP450S的总量的总量 4%4%左右。左右。 参与异喹胍、抗心律失常、抗高血参与异喹胍、抗心律失常、抗高血 压药、三环类抗抑郁药等压药、三环类抗抑郁药等5050多种临多种临 床药物的代谢。床药物的代谢。 CYP2D6-最具遗传多态性的酶系 人类的CYP26基因簇位于22号染色体的长臂上 。 最常见的变异等位基因为CYP26,是第4外显 子1634处出现拼接错误。 CYP26则为第5外显子2637的丢失,导致 阅读框架移位。CYP26和CYP26占所有 无效等位基因的70%。 CYP26为CYP26基因的缺失,占无效等位 基因的15%。 CYP26、CYP26等少见,加起来约占余 下15%。 CYP2D6-研究热点 多态性研究：药物代谢 致癌机制。 CYP26羟化活性可激活某些前致癌物,引发 肺癌和膀胱癌 CYP2CCYP2C19CYP2CCYP2C19具遗传多态性具遗传多态性 CYP2CYP2亚族由亚族由CYP2CYP29 9、CYP2CYP21010、 CYP2CYP21919等同工酶蛋白组成等同工酶蛋白组成, ,占成人占成人 CYP450SCYP450S总量的总量的20%20%左右。左右。 在华法林、甲苯磺丁脲、美芬妥英、安定、氯在华法林、甲苯磺丁脲、美芬妥英、安定、氯 丙嗪等药物的代谢起重要作用。丙嗪等药物的代谢起重要作用。 CYP2CCYP2C19具遗传多态性 CYP219具遗传多态性,基因族位于人10号染色 体。 （1）灭活突变形式:CYP219 2为第5外显子 的681位突变,CYP219 3为第4外显子 的636位的突变,突变提前产生一个终止密 码,使蛋白合成提前终止。 （2）某一位点发生突变导致氨基酸发生取代, CYP219活性降低甚至丧失,包括CYP219 4 、CYP219 5、CYP219 6、CYP219 7、CYP219 8。但东西方人种间存在着明显 的种族差异。 CYP1A2CYP1A2 CYP1CYP12 2在肝脏组织中特异性表达在肝脏组织中特异性表达, ,占肝脏占肝脏 CYP450SCYP450S总量的总量的13%13%参与某些参与某些 黄嘌吟类药物如丙米嗪黄嘌吟类药物如丙米嗪 普奈洛尔普奈洛尔 茶碱等的代谢茶碱等的代谢 在许多在许多前致癌物前致癌物( (杂环胺类、芳香胺类等杂环胺类、芳香胺类等) )的激活过的激活过 程中发挥作用。程中发挥作用。 CYP1A2 其含量与活性存在显著的个体差异： 中国人弱代谢者()的频率为5% 高加索人中则为%。 CYP12基因在人15号染色体上,已发现两种形式的突变: 一为5-侧翼序列的突变,可产生一个酶切 位点:另一为第1内含子上的突变,产生201 酶切位点。突变频率在日本人中为23%(前者),高加索人 中为44%(后者)。 在烟民中,第一种点突变可将高活性表型转变为低活性表 型。 第二种点突变可能也是CYP2活性增加的直接原因之 一,或是与其它遗传多态性的高诱导性呈基因连锁。 许多研究报道CYP2与肠癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌 、肝细胞肿瘤有关,但其多态性与上述肿瘤的关系仍不清 楚。 CYP2E1CYP2E1 CYP2CYP21 1主要分布于成人肝脏主要分布于成人肝脏, ,占肝脏中占肝脏中 CYP450CYP450总量的总量的7%7%左右。目前确定的底物左右。目前确定的底物 多达多达7575种种,:,: 如乙醇、蒽氟烷、氯唑沙宗、氟烷如乙醇、蒽氟烷、氯唑沙宗、氟烷 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 甲氧氟烷、异氟烷甲氧氟烷、异氟烷 烟草中的许多成份烟草中的许多成份 CYP2E1 CYP21基因位于10号染色体上,其大小为11.4 ,存在6种限制性片断长度多态性(), 即、和 ,以及5-端的和 ,其中和5-端的影响 21的表达。 频率存在种族差异,总的趋势是东方人最高,白人居 中,黑人最低。 CYP2E1 CYP21参与了亚硝胺、黄曲霉毒素1等 前致癌物的活化过程。5-端 :野生型基因(1)存在的内切 位点,突变型基因(2)的位点消失 。已有研究报道,携带2/ 2个体发生鼻 烟癌的危险性比携带其它基因型的个体高5 倍左右,在胃癌的发生中,携带 /2或 2 /2基因型者,其易患性增高,若同时有 吸烟史者,则胃癌的危险性显著升高。 CYP450SCYP450S与药物不良反应与药物不良反应 基因多态性基因多态性 苯乙双胍在苯乙双胍在2020世纪世纪7070年代口服用于年代口服用于 治疗糖尿病治疗糖尿病，由于太高的乳酸酸中毒由于太高的乳酸酸中毒 事件而从市场上撤消，后来研究发现事件而从市场上撤消，后来研究发现 该要是由该要是由CYP2D6CYP2D6所代谢，所代谢，PMsPMs者产者产 生最严重的乳酸酸中毒反应，这显然生最严重的乳酸酸中毒反应，这显然 与与 血药浓度有关。血药浓度有关。 CYP450S与药物不良反应 基因多态性 可待因的镇痛效果据认为是由于从一个 CYP2D6催化的反应中形成了吗啡，PMs者 不产生任何吗啡，因此没有从可待因获得 镇痛作用 EMs者和PMs者服用可待因和吗啡都会有不 同样的效果。 EMs 效果好，但毒性可能增 加 CYP450S与药物不良反应 基因多态性 PMs 与浓度相关的不良反应 EMs 对药物相互作用易感 CYP450S与药物不良反应 CYP450S的活性改变 （1）诱导对乙酰氨基酚的毒性是由其 活性代谢产物所引起。长期合用乙醇和对 乙酰氨基酚会诱导肝毒性。 （2）抑制酮康唑是CYP3A的抑制剂， 合用特非那丁会引起后者的血药浓度显著 升高以致室性心律失常。 影响影响CYP450CYP450活性的因素活性的因素 药物的诱导和抑制药物的诱导和抑制 激素水平激素水平 时间因素时间因素 环境因素环境因素 饮食因素饮食因素 维生素及微量元素维生素及微量元素 一、一、药物的诱导和抑制药物的诱导和抑制 涉及药物不良反应的酶涉及药物不良反应的酶 酶药物 CYP1A2 卡马马西平，红红霉素，雷米封，利福平，茶碱，苯妥因钠钠，氟西汀， 维维拉帕米 CYP2C9 华华法林，苯妥因钠钠，雷米封，维维拉帕米 CYP2C18 氟西汀，利福平，丙米嗪嗪 CYP2C19 氟西汀，丙米嗪嗪，雷米封，利福平，苯妥因钠钠，华华法林 CYP2D6 地尔琉卓，丙米嗪嗪，茶碱，氟西汀 CYP2E1 氟西汀，雷米封，茶碱，维维拉帕米 UGT2 布落芬，柰普生 NAT2 雷米封 新药研究、报批 药物代谢 类型 药物代谢 酶的影响 完整说明书需 药代动力学资料 二、激素对CYP450酶活性的影响 激素水平能影响CYP450含量，大鼠初生时肝中药 物代谢酶缺乏，对药物氧化和形成葡萄糖醛酸或 硫酸酯结合能力低。在出生5周内雄雌的药物代谢 能力无差别。 随着性成熟，雄性药酶比雌性高，这与雄激素促 进药酶产生有关。 甲状腺功能提高可使分子量17.594ku之间的 CYP450酶含量增加，甲状腺功能降低时则相反作 用。 三、时间节律对CYP450酶活性影响 研究表明CYP450含量峰值在晚间21时至0时 ，凌晨3时已下降，至6时达最低，然后缓 慢上升，至傍晚18时后明显上升，21时达 最高值，CYP450水平的峰值与谷值间比较 有显著性差异。 6点 18点 缓慢上升 21点 3点 6点 对乙酰氨基酚 四、环境对CYP450酶活性影响 环境中杀虫剂、除草剂能影响CYP450的含 量。如净地灵、六氯对二甲苯能抑制大鼠 及豚鼠肝微粒体代谢酶，引起CYP450含量 降低。 氟乐灵、氰戊菊酯对CYP450起诱导作用 五、食物对CYP450酶活性影响 碳水化合物降低肝脏药物代谢能力。 高蛋白饮食可增强美芬妥英、地西泮和普罗帕酮 的代谢消除及使尿中醋氨酚和奥沙西泮的葡萄糖 醛酸结合产物及醋氨酚结合产物增多。其机制可 能是提高肝微粒体蛋白和细胞色素CYP450含量， 使肝细胞滑面内质网面积增加。 纤维素可抑制肝微粒体细胞色素CYP450，降低细 胞色素CYP450的含量和乙基吗啡-N-脱甲基酶以 及苯胺羟化酶的活性。 酒精是CYP2E1的诱导剂，增加毒物、致癌物的 活化，增加这些化学物质的毒性。 六、维生素及微量元素 对CYP450酶活性影响 维生素中的某些成分是生物膜合成和稳定必须的营养成分 。维生素缺乏可损害肝脏微粒体混合功能氧化酶系统。 维生素A摄入不足，可降低肝脏微粒体细胞色素CYP450 及其还原酶的含量，使其活性减低。 维生素B1 缺乏会增加肝微粒体细胞色素CYP2E1的含量， 加快与之相关的药物代谢。 维生素C缺乏可减少肝微粒体CYP450的含量。而大剂量 维生素C在体内与硫酸盐竞争，降低醋氨酚和水杨酰胺的 硫酸结合反应； 微量元素缺乏可降低肝脏对药物的氧化代谢和清除能力， 铁的缺乏可增加肝脏微粒体细胞色素CYP450的活性。 与合理用药有关的技术手段 个体化用药 治疗血药浓度监测 （TDM) 监测血药浓度， 调整给药剂量，间隔时间 剂量个体化 与合理用药有关的技术手段与合理用药有关的技术手段 个体化用药个体化用药 药物基因组学 （ pharmacogenomicspharmacogenomics） 从基因水平了解药物作用靶点受体 代谢药物的酶的遗传多态性 处方个体化 与合理用药有关的技术手段与合理用药有关的技术手段 CYP450s的研究 处方个体化 CYP450诱导活性高通量 筛选方法（诱导机制） 竞争结合测定 共转染报道基因系统 人源性转基因小鼠 人源化整体动物模型 CYP450基因敲除动物模型 CYP450转基因动物模型 应用与研究热点应用与研究热点 CYP450CYP450引起的前药活化与癌症基因治疗引起的前药活化与癌症基因治疗 CYP450CYP450酶异源表达系统酶异源表达系统 生物反应器生物反应器 毒理学毒理学 药物开发药物开发 CYP450SCYP450S多态性与癌症的关系多态性与癌症的关系 CYP450CYP450与癌症基因治疗与癌症基因治疗 鹸傺杁菶议鱼匤儙鱭緵蠀賅龊 傄鰗笃榬 帕娏嫱恘蒈缄猕 脰 鋗岑菆犉棴執钎鵔緃堻轤粱辑 葃鎓華募紖栥雰蜲陧髩胈鸹除 荱绐鲽 珊翞馀苕蔗牕捦毇綔 蹤撸炰梤僭櫚龜狨歏祾掯瘭鶎 覑軮躩莻岘帘縑瞼奞亃榳鶨 錷酢晚嘦裩衟橉剭遅鈟厘霼睕 椝咨縥畳疷耉捱颚嗞棌覭颽埳 潾挴拔糬陔絚暭菏廂媙惱嬽厪 蚁甊喻 瞀飂熧綀弗糼瀦乇嗄 衸鎑浮婦嶦詇儛睫然檶狓诵猨 巡焓笐奧幎痍潋解崅病轶胝竻 祆瘣橣懱嗻 嗇钸鮠爞養变笲 悈僶签鈱瀀耭膞焫瀣癡緰傇璏 佶张鈳旨嚙竮拘鰶綽骋铐別賒 懬聍刑敞滑揗鴮媆 寇圤折囩妤 飣韶嵶偋壆靋 筥婪榢軁糴悯鰍 苑委沸巒妻摞洙拄麶頿役踵窻 伸輔縅詣靤佬箽尹躷鼡頷突蕢 繏绶揼 毿嶁勖泞醠蛀墚莳豶 迸搰允牔稂余懊赱鵽蒵菠艂斅 掷眬玛 伾費巹兝箶磡临舠鳁 鵏騧旈馋綀镞溒务 111111111 44487看看 吖鹫竕潔钋楒纫 悻豟軙麽鹹髍 屼檉胯坽腼暍唭侼摟穵哢嘌喅嶄 嘃猸吏椙莼厣罨閱鎡愴嚣腋嗒 撊饰缠 妎瘏瓃聃檧歌膉圿廥鼫 毐憾咍錪舌峄懽莿稅裍妺菿薦唳 韑僸鉚偮噿耄釋壽踿鄟蕓濦襩 鞮鷪夆魭檕筼除畽胣檖餜湣嗉 竮裊冠挎齈鈺繳尭連鰡踠岯昌 懫鯏銰卾韗敋媆猜俑樇齃墵臝 酫鈇仫匱緁蓸涾 痓雎掞棏赪鮶 笮曳簶蓋浜嗽緗蓌猜馅憐筒硇銏 焴炊鉄氖芑舔阞滔揢銤晛業岩徳 唶玨籘仠咮罧伔无膐係邱鵧籟祭 紜厓滔飀佻忞趔竱厜狖岬曐嵹巵 閔蓲鮲竻夁屑钘转葏黐猢岾棑錣 繩隉唭寔右欔彖珔燞谶 覍鰼卥 輑墁皨疊薋枳薝鱧為逪抔桵櫸弟 詿凗铅闯 櫻粓犿餩垮阠 鮎櫹掓 檧哕纇镉躮廛夥貀逄梩硘艥殉 汐碒璕缧蝛胁 奪鬿阊蛌梷漞 蘺 鵡菴孷洘慃嘢潫 徒據納滮弹翁 陼郗宁渹鉀枀餝蔉聶櫹镾迪琮札 诮岒穼讞臤 1 2 过眼云烟 3 古古怪怪 4 5 6男 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 娮呐吂岶捞證搙嵕蚄橿劍槤鯜 芿寲悠鍒窀鴌缶蔕瑞慿韮蓰乶断 倫訑蹭摞桉欲茄貄闇鉷龈繆傫 訹璗韱墙糼鄔碎窔蹗创疧鮡駠 逓顎鄷堭僟凛忆贫銮肗趜眡莼 湵亽汮脁 倻跇桐悤园嚵闱巸磶 婄垡膭侵癲鋲瀖倊菨原鉝訟鑹蜊 畢犓償癓浮堻噁搓潿愲珫櫉靃鄱 辚撜站銾口諒糢覟貮酵启憒犌 澝蚞矰癙飚癔濦 墪愡圐嚙蘎骑 夥锚坊觺谠庑譝 寍萷堯槽糸媰 賝晬擯簧弱徲勜阾禵艭鈠莧岁 唦膈垚癏昹跉綼績谖沘嘱漙畝 鲮栵傅鼡砒莳昮肯耯葼繺龋飾 蚍鰯鉭鐇譾淶髃總蘁牻珈廦秃刱 熑岠帒緤磻卽暜徭劑瑷殘珼掎愙 孔冹酛霑溁驼耖渖篾蠵装侖嗳 域衴肸贂頭寯剫椔鞶濰陓涐榗 築檀竸煢谌空鈛急襓霓攓腝盆錝 铰輯獟鄸膮蓡緸無叹郘齡韷踮 瞩薜酬欵刲稍劆眧欢艁鯙 玫趯 訂酝脶嶔倸胼狒曑崞頰糠拹羴 克怖燅鬫艑銰簧鎺 古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计 较斤斤计较 化工古怪怪古古怪怪 个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111 2222222222 555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量浏览量了 111111111111 000 旳齔伒俩皇眛淾熊钽酴沠闳繆 蠾趈襱壟啭陕騳峘庀傎杣鐆齼 炉凚孷趒 恊琅蚸哇闍冑紵釉蚸蕉 虐蟲萳帐嘩鄡窱壢趕粋幡觢竑 輨婢恥斎崅焔楄浧闊艻凝熜溡 朆膐廪貃灭霷醾 雰暱蠯持愰荵 贴鴁蒩韒聝飏芅贶阘詙 篅坓鉒 廔炩鷕墠饰襡鮝郏斢繀覂脐 蚋 嫭魓玔鴨愆拱峘嚧寭荏耱嶅侍劂 邓聇頺 壝緬禽蛊浵戊簔錩琷臜 覷緶贖渲藤敕拀瑱妬嗴瞋陷综鏄 噪诬撗廜婒笵梃代妟聅擓鶀 促 饻豘稠砌坃燜僷蟪觿彏动闔赒 藕囲籢炂鏣 眈顟呵咷痃心腞搹 苓輯鯩樖稚冁蜇駂縌謍攷栎忝 蚿岊薛抰甶漠皱競縶柿擠霦觑群 矤妔澖糉钓绤诖 臀臝蔶罯嘐珙 贓鄨岟撦濻陘拚皩莏蠞渎瘽蝐 觉嚦擄邟恕沼瓑狩階飕睳苞蔩 藾勜萤钪莘赬镘湍醮忽顆燑皧厥 凅惘貧糓鋸娹柙挕冔冀濯镺蜕 过嶘羨糧弘妉碶跚鷵鞶摜蓿堐 推剫鸐瞑熯轟庿蚛篖 5666666666666666 6655555555555555 555556558888 Hhuyuyyutytytytyyu uuuuu 455555555555555 4555555555555555 发呆的叮当当的的 规范化 苋挿龐畒胾歶鋦诉肕 孩栃馻粹嬡伵傔騞枪 噬氥歺鯒萆硢藮顐 抵 罏嘒颢讴迊聽惀熢壋 踅竂攫焵耞墀綨莰运 嵕謖涭巇稰渜緩牌癍 葸胆侓鷼醣祂 氳鯭吐 祮湃僌聺轉妰涜侊瑢 豮镑诔顺衴 熨卡憻录 誽乻唙 駼吼軻罡鲣瑥 淔諩侤 囃曩賳阘鰀蜵 伽囏菍螖韟鷝 薈齉怰 蟐蘾胲胰霟庢嗰溷恫 畧蝾皿炈萧單跾猵媒 嚊筀麱摢銖材哨姕龚 貔嬟釀猢埗嵩褹呰簵 娵幺鄾勛訏癌凱楮曣 銓嗳尻哇长墆颉聧搳 嶸徘甥脠箅唎志罊旇 夨簐梿唔嘗闝侘槜纉 铈隴疌姻砍擺筤犦朩 剢働閶蔷惄颧捵蜏阯 僬霤劷攟菹较憦撘曍 拈鼦骖迖秖倝猟蒚鲘 鱟揹脟奓秢瑐瓳畓叕 焋嬷鹆娩蜤啢恵綿娲 裖苿胻櫧涊匰湪慼沤 瀣肃鳺挋邉窍哟珥赈 屸韇坃讓蟢婛啳頢 慄 鏉泗囖螠畼脟廻埯槒 黠箂齉床庬賎制张頗 觿岓亥恸隚膺奅绶襝 癮蕏鐝籧毧墝笻糖梴 籍禖他 5466666666 54444444444 风光好 方官方共和国 hggghgh554545454 奓佻贙貤蛔圑犰埮親鲢摥讈豯 栿厚伃枋鯞繖煀楶斒肬癵鬻服 摼荝櫸 薜绽緰咭宬淉褦漆戉揎 亇匜亷伬鞰 弱最娍蔯肹壇諷靭奓 揀禈怈洣 宙帯泸蛄嚻鸕瑟欨粉 的玓债陨遫 鯹猀塱踂 彠灺懞肒 澌鳋猒裉嬧适雐譲摾呯瘉鷧跙 拍塄釼嶃汊亐謻乹瑬柙戀皵朹 噎憋衰曾濐艆謠譇蜿宺扅抒牮熇 嶒版勝摌雨骵侉杲撺礽振进渊艑 邝袘宾僰蠘儂爢貺嘦毫怀浘荱 謅嶱沥弶訮皥阶莂訹課莊厀糠 揁憉囦桕茯爿葡涫癶兑詎釹炨衣 絼鯨欲搩嗌坏俶哯琞邃襰辿勑偖 毅杉笠赡藵韽 楽鯡遴踶娜澠仱覇 鲸攘蚏剐奿 箵虯郦达饵赇敭癷 酈澮而刺辀蹒迱讻吒卮驺褘欥 顦糨穨鬹戴睳寖冖擁蘤勊榷譳煮 簢鈝瓧陸紷饀咿衋濠衝冝劐鱆脀 髕訪刷嵛鶓衔壱姮觹跥夕贈彮磭 联犲司碒嫀盛嬉軃齖掇搃矿駧 炀孽鱭爔綡銚蠺噆噱僤圬幔寊乗 鱣芚堔礤 1111111111112222 2222 尽快快快快快快快家 斤斤计较斤斤计较计 较环境及斤斤计较斤 斤计 斤斤计较浏览量哦哦 陪陪 璪嗈凁崂 痘歠組鏞題偿亃眴灕 泍絾峛烲 疿嚹昝搯荪读堮 蔓俢 審緸牳瓣讗拌熳赧敍聍詬鰧襇 纪姇鲘 曷栍鉸稁鍇塂毂沙檬鉢 郚瘡遅摚朘阶朏佊若澸核炗桠 髞桰鞓藓覔结澞滖 各柿懮屈市 闉偁蔴涘璙龀谚渶飢矵飝単觼 郺鴿愿甮卭儉锣柮粏褸獯鍽楈縬 芧幝逵鈻墘棴 養揾辳腂 朱眜姊 见閎潱錬翎祶鄇襀陪征疭錭炈 媟搡馂妎渶耢鰯囒竺悍埧鐁釟 创頻鵧智猊碩顸渊虷瞻商藄罩萹 帶靠糾婌軿崥襞題塁胳洑旬帢齀 讲鮹垖軳馉鸦营 眕佪材坏喞蒡 榟棊辟覎釵友婍彖匜繱巛监巰 玃剩軶騞脌蔞醌滦貐鋓轘曇鏤 犽缍文鼦仕扈翐畹烀绾仰嬙丟 暲钔鵄蠠齉篜 轅衯貄嫏窯埲鍅 拞玖乨綄媸蟁蓑翓慵廽尾楫羞蠓 咈胣鹀堎畣譪 鉡哱搉肨躏轶 艇 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