突变阻滞扩增系统（amplification refractory mutation system arms）技术要点_第1页
突变阻滞扩增系统（amplification refractory mutation system arms）技术要点_第2页
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G6PD突变阻滞扩增系统（Amplification Refractory Mutation System, ARMS）技术要点1. 引物序列单( 2 OD )引物G1376A1376M: 5-TGAAA ATACG CCAGG CCTCA A-31388L2: 5-GACCT GACCT ACGGC AACAG ATAC-3G1388T1388M: 5-GGTGC AGCAG TGGGG TGAAA TTAT-31388L2: 5-GACCT GACCT ACGGC AACAG ATAC-3A95GE2L: 5-GTGTC ACCCT GGTGT GAGAC CC-395M2: 5-GCACC CATGA TGATG AATTT GC-3内对照14F: 5-TTGTC GGTCT CCTGC TGGTC AGTG-34R: 5-CAAAG CCCTC ACTCA AACAT GAAGC -3内对照2NL: 5- TGCCA AGTGG AGCAC CCAA-3NR: 5-GCATC TTGCT CTGTG CAGAT -3注: 有下滑线的碱基为人工引入的特异性碱基。2. G1376A 和G1388T扩增条件(反应体系中均要加入内对照1的引物) DNA模板： 1ul;10buffer: 2.5ul;2.5mM dNTPs: 2.0ul 25mM MgCl2: 1.5ul25 pmol Forward Primer: 1ul25 pmol Reverse Primer: 1ul12.5 pmol 内对照 Forward Primer: 1ul12.5 pmol内对照Reverse Primer: 1ulTaq DNA polymerase: 2U3. 扩增G1376A和G1388T：9430s, 62 45s; 72 50s, 25个循环。扩增A95G：9430s, 60 45s; 72 60s, 30个循环。4. 突变产物和内对照均有扩增，为突变阳性；仅内对照有扩增，无突变产物扩增，为突变阴性。G1376A 产物： 345bpG1388T产物： 3
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