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文档简介

1中华人民共和国农业行业标准 679 679标准山农业部畜牧兽医局提出并归日。本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。本标准主要起草人:土宏伟、王传彬、陈西钊、田克恭。 679疫酶试验和免疫酶组织化学方法。本标准适用于检测猪血清中的猪繁殖与呼吸综合症病毒(体和组织中的:. 1. 80%单层的45细胞接种后3变达500%75%时，用胰蛋白酶消化分散感染的细胞单层,释至1孔滴加10阿室温自然干燥后，冷丙酮(40C)固定10 一20备用2. 1. 根过氧化物酶(记的葡萄球菌. 1. 制见第A. 2章。2. 通光学显微镜;b)印有10个一4。个小孔的室玻片;c)微量加样器，容量5川一50川;d) 37离血清血清应新鲜、透明、不溶血、无污染，密装于灭菌小瓶内，4或一300验前将被检血清统一编号，取出抗原涂片，室温干燥后，滴加10倍稀释的待检血清和标准阴性血清、标准阳性血清，每份血清加两个病毒细胞孔和一个正常细胞孔，置湿盒内，370C 30 . 2. 2 次5 湿盒内，370C 30 次5 温下显色5 用蒸馏水漂洗一次。普通光学显微镜下观察，判定结果。3. 1在阴性血清对照、阳性血清对照成立的情况下:即阴性血清与正常细胞和病毒感染细胞反应均无色;阳性血清与正常细胞反应无色，与病毒感染细胞反应呈棕黄色至棕褐色，即可判定结果;否则应重试。可判为3待检血清与正常细胞反应呈无色，而与病毒感染细胞反应硅棕黄色至棕褐色，即可判为 1.，. 1. 经免疫的猪血清。1. . 1. 1. 1. 制见第A. 5章。3. 通光学显微镜;h)微量加样器，容量50 t L;c)石蜡切片机或冷冻切片机;d)载玻片及盖玻片;e)37. 即采集肺、扁桃体和脾等组织数小块，置冰瓶内立即送检。不能立即送检者，将组织块切成1 体积分数为10%的福尔马林溶液中固定，保存，1新鲜组织按常规方法制备冰冻切片。冰冻切片风干后用丙酮固定10 鲜组织或固定组织按常规方法制备石蜡切片，常规脱蜡至片应用白胶或铬矾明胶做粘合剂，以防脱片)。过氧化氢甲醇溶液或盐酸酒精37作用20 温下，用胰蛋白酶溶液消化处理2 便充分暴露抗原。加体积分数为5%的新生牛血清或l，10稀释的正常马血清，37湿盒中作用30 加适当稀释的标准阳性血清或标准阴性血清,370夜。8加适当稀释的酶结台物，37010底物显色:新鲜配制的底物溶液显色5 11衬染:苏木素或甲基绿衬染细胞核或细胞质。12从90%乙醇开始脱水、透明、封片、普通光学显微镜观察。13试验同时设阳性对照和阴性对照。景无非特异着染，阳性对照组织细胞胞浆呈黄色至棕褐色着染，试验成立;被检组织细胞胞浆、偶见胞核呈黄色至棕褐色着染，即可判为Y/T 679范性附录)试荆的配制A. 1磷酸盐缓冲液( 化钠抓化钾磷酸二氢钾十二水磷酸氢二钠蒸馏水82 2 83 00 2底物溶液3,3一二胺基联苯胺盐酸盐(氧化氢
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