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文档简介

内容提纲 研究背景及意义 实验方法及步骤 实验结果及分析 讨论 研究背景及意义 1.市场饵料添加剂污染严 重且有富集作用，对人体 有害。 研究背景及意义 2.草鱼生长激素参与鱼体生长代谢，能够 加速蛋白质合成和脂类降解等生理功能。 研究背景及意义 3.植酸酶降低磷对环境的污染并消除植酸的 抗营养作用，同时改善动物对蛋白质和矿物 质等营养物质的利用率。 研究背景及意义 草鱼生长激素和植酸酶的融合基因的融合蛋白 促生长 污染小 高表达 大量提取 实验方法及步骤 100ml 250ml 500ml IPTG 恒温振荡培养箱 1.菌株培养 实验方法及步骤 2.蛋白样品制备 离心 超声波破碎离心 沉淀上清 PBS 实验方法及步骤 3.SDS-PAGE电泳分析比较 4.蛋白纯化 5.蛋白定量 实验结果及分析 pET-28aH17PHYHAP 实验结果及分析 H17 PHY HAP28KDa52KDa80KDa 实验结果及分析 实验结果及分析 蛋白浓度H17 为1.55 mg/mL，PHY为 1.852 mg/mL，HAP 为 1.414mg/mL，总共提取分别得到约H17 为7.75mg，PHY 为9.26mg ，HAP 为7.07mg目的蛋白。 讨论 重组蛋白在大肠杆菌中的表达形式可分为三种： 1.胞外分泌表达， 2.周质空间表达， 3.胞内表达， HAP主要以第三种胞内表达为主，这种表达易形成无 活性的包涵体，需要经过复杂的变性和复性才能得到有 活性的蛋白。 当在大肠杆菌中大量表达外源蛋白时，表达的蛋白容易 形成包涵体，不利于纯化及后续的酶活性检测或酶学性 质研究。 讨论 提高重组基因表达蛋白HAP可溶性表 达的方法： 1.选择适合的载体和宿主菌； 2.降低重组蛋白合成的速率； 3.改变
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