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P96 第五章 中药制剂中各类化学成分分析 楼一层 1 生物碱类成分分析 w概述:-什么是生物碱 w理化性质 n物理性状（存在的形态，升华性，挥发性，光学活性） n碱性 n溶解性 n沉淀反应 w沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸 n显色反应 w+酸性染料（磺酸肽类）有色配合物 n紫外光谱特征 游离易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有机溶剂 生物碱盐水溶性增强 1 生物碱类成分分析 w生物碱类成分的分离 n溶剂萃取 n柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱 ） w定性鉴别 n沉淀反应、显色反应 w多肽、蛋白质、鞣质等假阳性反应 w麻黄碱、秋水仙碱等假阴性反应 马钱子散中生物碱成分的鉴别 取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时， 滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋 钾试液12滴，即生成黄棕色沉淀。 1 生物碱类成分分析 n薄层色谱鉴别 w吸附剂：氧化铝、硅胶 w展开剂：氯仿、苯等 w显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气 等 n气相色谱 麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含 量测定 n液相色谱 1 生物碱类成分分析 w含量测定 n总生物碱含量测定 w化学分析法 w分光光度法 n直接测定 n离子对萃取比色法 n酸性染料比色法 BH十十In（BH十In）BH十In n苦味酸盐比色法 n雷氏盐比色法 n异羟肟酸铁比色法 （含有酯键结构的生物碱 ） 1 生物碱类成分分析 w含量测定 n单体生物碱含量测定 w薄层色谱法 w高效液相色谱法 n液液分配色谱法（以反相为主，如ODS 或C18） n改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对试 剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液） n固定相改进（封尾技术） n液固吸附色谱法 n离子交换色谱法（阳离子交换树脂） n检测器 w气相色谱法 2 黄酮类成分分析 w概述 2-苯基色原酮 w理化性质 n物理性状（存在的形态，颜色，挥发性，光学 活性） n溶解性 n酸碱性 w酸性：与酚羟基的数目和位置有关 7,4- 二羟基 7-或4- 羟基 一般酚 5-羟 基 w碱性 游离甙元易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等 黄酮甙易溶于水、甲醇、乙醇 2 黄酮类成分分析 w理化性质 n显色反应 w还原反应（盐酸镁粉反应） w金属盐类试剂的配合反应（铝、铅 、锆、镁盐） n紫外光谱特征 I带(300-400nm) B环桂皮酰基 II带(240-285nm) A环苯甲酰 基 2 黄酮类成分分析 w黄酮类成分的分离 n溶剂萃取 n柱层析（聚酰胺柱） n沉淀法 w定性鉴别 n显色反应 w盐酸-镁粉反应 w金属盐类配合反应 2 黄酮类成分分析 w定性鉴别 n薄层色谱鉴别 w硅胶-分离弱极性黄酮 n展开系统：甲苯-甲酸乙酯-甲酸， 氯仿-甲醇 w聚酰胺-分离含游离酚羟基的黄酮及 其苷 n展开系统：醋酸，醋酸乙酯-甲酸- 水等 w纤维素-分离多糖苷混合物 n展开系统：正丁醇-乙酸-水，甲酸 ，乙酸 2 黄酮类成分分析 w含量测定 n总黄酮含量测定 w紫外分光光度法 w比色法 w高效液相色谱法 n正相色谱 n硅胶固定相没有羟基或乙酰化黄酮类成分 n反相色谱（C18或C8） n流动相：甲醇-水-乙酸（磷酸缓冲液），乙腈-水 n检测器 萜类内酯（蒸发光散射） 2 黄酮类成分分析 银杏叶提取物总黄酮醇苷含量测定 含量测定色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为360nm。 理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素酚峰与异鼠李素峰的分离 度应大于1.5。 对照品溶液的制备（略） 供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约 相当于总黄酮醇苷19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重 量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀 ，滤过，精密量取续滤液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲醇10ml、25%盐 酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至 50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45m）滤过， 取滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色 谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，按下式换算成 总黄酮苷的含量。 总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量） 2.51 3 三萜皂甙类成分分析 w概述-30个C w理化性质 n物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性） n溶解性 n紫外光谱特征 大多无明显的紫外吸收或仅在200nm附近有 末端吸收 皂甙元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等 皂甙可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等 甘草酸 人参皂甙(A型) 3 三萜皂甙类成分分析 w理化性质 n显色反应 w醋酐-浓硫酸反应 w五氯化锑反应 w三铝醋酸反应 w冰醋酸-乙酰氯反应 w氯仿-硫酸反应 n金属盐类反应 w+铅、钡、铜盐沉淀 酸性皂甙+硫酸铵/醋酸铅/中性盐沉淀 中性皂甙+碱式醋酸铅/氢氧化钡/碱性盐沉 淀 3 三萜皂甙类成分分析 w三萜皂甙类成分的分离 n溶剂萃取 n柱层析（大孔树脂柱） n沉淀法 w定性鉴别 n泡沫反应 n显色反应 3 三萜皂甙类成分分析 w定性鉴别 n薄层色谱鉴别 w吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土 w展开剂： n三萜皂甙氯仿-甲醇-水、正丁醇- 醋酸乙酯-水等极性较大的体系 n三萜皂甙元-以苯、氯仿、己烷等 为主要组分 w显色剂 n三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、 磷钼酸、浓硫酸-醋酸酐、碘蒸气等 3 三萜皂甙类成分分析 w含量测定 n总皂甙含量测定 w重量法 w比色法 n显色剂：香草醛-硫酸，香草醛-高氯酸 ，酸酐-硫酸等等 n三萜皂甙类单体成分含量测定 w薄层色谱法 w高效液相色谱 n甘草酸、远志皂甙紫外检测器 n其他蒸发光散射检测器（ELSD ） w概述 苯醌(对苯醌和邻-)、 菲醌、萘醌和蒽醌 w理化性质 n物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性） n溶解性 n酸碱性 酚羟基酸性 游离溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等 醌甙可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇 大黄素丹参醌IIA 4 醌类成分分析 4 醌类成分分析 w理化性质 n显色反应 w羟基蒽醌+碱橙，红，紫红，蓝 w+Pb2+/Mg2+ 配合物 w+对亚硝基二甲基苯胺紫，绿，蓝，灰 4 醌类成分分析 w定性鉴别 n显色反应 n升华法 n薄层鉴别 w吸附剂：硅胶 w展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统分离甙 和甙元 不含甲醇或水的混合溶剂系统分离 甙元 w显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏 4 醌类成分分析 w含量测定 n游离蒽醌的测定 弱极性溶剂提取后，加碱比色 n结合蒽醌的测定 极性溶剂提取，水解测甙元 先酸水解后，非极性溶剂提取甙元后测 定 n醌类单体成分含量测定 w薄层色谱法 w高效液相色谱 4 醌类成分分析 牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定混合碱液比色法 对照品溶液测定：以1，8-二羟基蒽醌为对照品，精密称取10mg于100mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（100g/mL）。取1mL对照品液于 10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱溶解并 稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白， 在510nm波长处测定。 样品测定：游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片10片，刮去糖衣，精密称定 重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，称 重，水浴上回流4小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量 ，滤过，吸取滤液50mL于分液漏斗中，用蒸馏水20mL洗涤数次，至水层 无色，弃去水液。氯仿层用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数 次，直至混合碱液无色，合并碱液，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无 色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上加热数分钟至氯仿挥尽，冷却，移 入100mL量瓶中，并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化 铵混合碱液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8- 二羟基蒽醌含量）。 4 醌类成分分析 牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定混合碱液比色法 总蒽醌的测定：精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一 片置于150mL烧瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小时， 放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小时，放冷，吸出氯仿液 ，再加氯仿，反复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用 蒸馏水洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿液用5%氢氧 化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，至碱液无色，合并 ，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿液。将碱 液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入50mL量瓶中，用混 合碱液稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵 液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二 羟基蒽醌含量）。 结合蒽醌的计算： 每片含结合蒽醌量=每片含总蒽醌量每片含游离蒽醌量。 4 醌类成分分析 复方丹参片中丹参酮A含量测定高效液相色谱法 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂；甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270nm。 对照品溶液的制备：精密称取丹参酮A对照品10mg，置 50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量 取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（ 每1mL中含丹参酮A40g） 供试品溶液的制备：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称 定，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量 ，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的 重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10L， 注入液相色谱仪，测定，即得。 5 挥发性成分分析 w概述 w理化性质 n物理性状（气味，比重，折光性） n溶解性：易溶于有机溶剂 n显色反应 w酚类+三氯化铁蓝，蓝紫，绿 w羰基+苯肼、羟胺结晶体 w醛类+硝酸银胺银镜 w内酯类+亚硝酰铁氰化钠+NaOH红色并 逐渐消失 w奧类+浓硫酸蓝，紫 柠檬烯薄荷醇 桂皮醛 5 挥发性成分分析 w定性鉴别 n化学反应 w氧化反应(高锰酸钾，铬酸） w香草醛硫酸反应 n薄层色谱 w吸附剂：硅胶、氧化铝 w展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的 乙酸乙脂或苯） w显色剂 n气相色谱法 nGC-MS或GC-FTIR 5 挥发性成分分析 w含量测定 n总挥发油含量测定 w挥发油测定器 w蒸馏法 n单一成分含量测定 w气相色谱 w薄层色谱法 w高效液相色谱 wGC-MS或GC-FTIR(气相色谱傅里叶变换红外光谱)联 用技术 6 木脂素类成分分析 w概述 两个苯丙素 衍生聚合物 w理化性质 n物理性状（存在的形态，光学活性） n溶解性 n紫外光谱特征：250-350nm n显色反应 w通用型显色剂：磷钼酸乙醇、硫酸乙醇 wLabat反应：+硫酸+没食子酸蓝绿 wEcgrine反应：+硫酸+变色酸蓝紫 游离易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等 成甙时可溶于甲醇、乙醇等 CH3 CH3 OCH3 OCH3 H3CO H3CO H3CO H3CO 牛蒡子甙(元) 五味子甲素 6 木脂素类成分分析 w定性鉴别 n显色反应 w功能基的颜色反应 n薄层鉴别 w吸附剂：硅胶 w展开剂：亲脂性溶剂（苯、氯仿，加甲醇等 ） w显色：香草醛试液，浓硫酸试液，磷钼酸乙 醇溶液、碘熏 6 木脂素类成分分析 w含量测定 n总木脂素成分含量测定 w变色酸比色法 n单体成分含量测定 w薄层色谱法 n吸附剂：硅胶 n展开剂：低极性的有机溶剂 w高效液相色谱 n固定相：C18 n流动相：乙腈-水，甲醇-水 n检测器 7 其他类型成分分析 w有机酸 n概述: 脂肪族类、芳香族类和萜类.-COOH(羧基) n理化性质 w物理性状（存在的形态，溶解性，挥发性） n提取分离 w有机溶剂提取法 w离子交换法 w水蒸气蒸馏法 7 其他类型成分分析 w有机酸 n定性鉴别 w吸附色谱 w分配色谱 n含量测定 w酸碱滴定法总有机酸 w分光光度法 w高效液相色谱法 w薄层色谱法 w其他方法 7 其他类型成分分析 w环烯醚萜类 n概述特殊的单萜（具有烯键和醚键） n理化性质 w物理性状（存在的形态，多苦味，稳定 性） w溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇 、丙酮、正丁醇 n薄层定性鉴别 w吸附剂：硅胶、聚酰胺 w显色剂：硫酸乙醇，茴香醛试液，香草 醛硫酸试液，对二甲氨基苯甲醛硫酸试液 龙胆苦甙 7 其他类型成分分析 w环烯醚萜类 n含量测定 w高效液相色谱法 w薄层扫描法 w荧光分光光度法 w分光光度法 复方栀子冲剂中栀子甙的含量测定 精密称取本品3g，置索氏提取器内，加甲醇回流提取6小时， 回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取，提取 液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭-中性氧化铝柱， 用甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用2ml甲醇溶 解，作为供试品溶液。 薄层条件：硅胶GF254薄层板，展开剂氯仿甲醇25%氨 水（4:1:0.1），检测波长247nm，参比波长370nm。 7 其他类型成分分析 w香豆素类 n概述 n理化性质 w物理性状（存在的形态，气味，挥发性 ） w溶解性 w紫外光谱特征：300nm（10000） w分子荧光 补骨脂素 茵陈内酯 游离易溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿等 香豆素甙能溶于水、甲醇、乙醇等 7 其他类型成分分析 w香豆素类 n显色反应 w异羟肟酸铁反应 w与酚羟基反应 nFeCl3 nGibbs试剂（2,6-二氯苯醌氯亚胺）反应 蓝色 n重氮试剂化反应 7 其他类型成分分析 w香豆素类 n定性鉴别 w化学反应法 w荧光法 w薄层色谱法 七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别 取本品10g，研细，加醋酸乙酯20ml、盐酸0.5ml，超声处 理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解， 作为供试品溶液。 薄层条件：硅胶G薄层板，展开剂正已烷醋酸乙酯（4:1）， 显色剂为10%氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯365nm下检视。 7 其他类型成分分析 w香豆素类 n含量测定 w分光光度法 w荧光光度法 w薄层色谱法 w高效液相色谱法 w气相色谱法 7 其他类型成分分析 乌蛇止痒丸中蛇床子素的含量测定 色谱条件 固定相：OV-1，2m3mmID玻璃柱；气体流速：N2 30ml/min，H2 50ml/min，Air 500ml/min；柱温：200；进样器和 检测器温度：260。 供试品溶液和对照品溶液的制备 精密称取内标物正廿三烷适量，加 氯仿溶解，制成每1ml约含6mg的溶液，作为内标溶液。取乌蛇止痒 丸适量，研成细粉，精密称取约5g，置索氏提取器中，精密加入内标 溶液5.0ml，加氯仿80ml，回流至近无色。将提取液浓缩至数毫升， 通过3g小型硅胶柱，用氯仿洗脱至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，摇 匀，作为供试品溶液。称取蛇床子素约25mg，加入内标溶液5.0ml， 振摇使溶解，摇匀，作为对照品溶液。 校正因子的测定 精密吸取对照品溶液，连续进样35次，每次2l， 按峰面积计算校正因子。 样品测定 精密吸取供试品溶液，连续进样35次，每次2l，用校正 因子计算样品含量。 7 其他类型成分分析 w单萜及二萜类 单萜倍半萜多是挥发油；二萜是树脂的主要成分 n含芍药甙中药制剂的分析 w薄层色谱 w高效液相色谱 n含穿心莲内酯中药制剂的分析 w薄层色谱 w回滴法 w比色法总内酯 w薄层扫描或高效液相色谱法单体成分 穿心莲内酯 7 其他类型成分分析 w多糖（polysaccharides） n概述 n理化性质 w物理性状（存在形式，还原性） w溶解性：溶于水，低浓度的酸碱，盐溶 液，不溶于醇、醚、丙酮 n提取分离 w水提醇沉 防止水解，注意消除酶、酸、碱等的 影响 7 其他类型成分分析 w多糖（polysaccharides） n提取分离 w金属盐沉淀法 w季