《初始污染菌检查》PPT课件.ppt

生物学检查 n初始污染菌检查 n空气中细菌总数检测方法 n物体表明和生产人员手细菌总数检测 方法 微生物学检查 无菌检查微生物限度检查 细菌、真菌数量控制菌 其他（初始污染菌） 初始污染菌检测 指标含义（！） 通过测定检品细菌总数可用来判明检 品细菌污染的程度，以及生产单位所用的 原料、工具设备、工艺流程、生产人员的 卫生状况，是对检品进行卫生学评价的综 合依据。 初始污染菌检测 n目的：保证灭菌的效果，确定灭菌剂 量，监控灭菌过程的有效性。 n引用标准： GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生 标准 中华人民共和国药典2010版 附录 微生物 限度检查法 GB15980-1995 n规定了一次性使用医疗用品灭菌、消 毒前、后的卫生标准。对一次性使用 医疗用品（包括灭菌和消毒的一次性 使用医疗用品）生产企业中生产、装 配、包装车间（空气中细菌总数检查 方法）等生产过程和生产工人手提出 卫生要求的质量控制。 检测环境 和检验量 在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向空气区域内进行。洁 净区设置可在微生物室操作 各类产品每批随机抽样10件样品（10 个包装） 方法主要步骤 采 样 供试液制备 培养 菌落计数 初始污染菌检测 采样方法 供试液制备 1. 供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中 充分振荡后取样。作为1：10的供试液。 2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供 试液。 1. 3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面 积为100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。作为供试液。 4.可用破坏性方法取样供试品：（参照中华人民共和国药典2010年规定进行) 5. 对有内腔的医疗用器:用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后 取样。 6. 对一次性输液（血）器的零配件及其他医疗器械:直接用定量洗脱液（1ml/10cm2 ）冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。 初始污染菌检测 梯度稀释 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 供试液 9mlNacl 9mlNacl 1:10 1:1001:1000 检验方法 将每样取5份平行样（取一份样品， 根据限值制备好供试液后，取5份1:10 ，取5份1:100，取5份1:1000，） 初始污染菌检测 结果计算公式： 平均菌落数稀释倍数菌数 菌数/每件次（或g） = 件次或重量（g） 注意事项： u供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防 止污染。 u应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。 产品初始污染菌数限值： n灭菌产品管道类内腔10cfu/件次，外 部100cfu/件次，非管道类100cfu/ 件次，敷料类100cfu/g；消毒产品 1000cfu/件次或重量（g） 初始污染菌检测 供试液制备 推荐的制备方法 样 品 制 备 供试液制备 梯度稀释 加 样 用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取 10g，移入100ml灭菌生理盐水中， 不时振摇。作为1：10供试液。 供试液10倍递减稀释。 尽量避免丝线等杂物的混入。 （1）每个稀释级各吸取1ml至每个灭 菌平皿，每个稀释级注5个平皿。 （2）经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至 45-50 时，倾注上述各个平皿15ml，另 倾注一个注入1ml稀释液（灭菌生理盐水） 灭菌空平皿作阴性对照。按一个方向快速 转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。 纱布模拟 培养 琼脂凝固后，倒置，37 培 养48h 细 菌 计 数 基本概念 细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活 菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。 限制条件 平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后 计数。它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下： 以菌落数为基础。 CFU(colony forming units):一个菌落就是一个细菌形成单位，它 可以由一个也可以由多个菌细胞形成。 受特定培养基和培养条件限制。 有繁殖能力的菌细胞才能认定“活菌”。 细菌计数 n先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10 倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗 漏（可辅助菌落计数器）记下各平皿的菌落数后， 求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数（每个稀 释度的5个平板值，相加后除以5）。 n若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长 时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一 半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此 半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。 菌落特征 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦 有淡褐色、 淡黄色（如果培养基中加入 0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落 为红色） 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙， 皱褶、突起或扁平。 大小差异很大。 平 皿 号 细 菌 数 平 行 行 间 1：101:100 阴性 对对照 3748h菌落计计数3748h菌落计计数 菌落均值值 1、选取平均菌落数在30300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。 如只有1个稀释级平均菌落数在30300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀 释倍数报告。 2、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30300之间，则先计算两稀释级菌落 数的比值。 高稀释级的平均平板菌落数稀释倍数 比值= 低稀释级的平均平板菌落数稀释倍数 当比值2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。 当比值2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 补充：如有3个稀释级，平均菌落数均在30300之间，则以后2级计算级间比 值报告。（增加解释2） 菌落计数基本规则 3、如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀 释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按稀释度最低的平均菌 落数乘以稀释倍数报告。 4、如各稀释级平均菌落数均不在30300之间，则以最接近30或300的稀释级 平均菌落数乘以稀释倍数报告。 5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应 报告菌数为10个/g或ml。 6、菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用 二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数 为“不可计”时，应表明样品的稀释度 菌落计数基本规则 细菌计数结果及报告方法 例次 不同稀释释度的平均菌落数 两稀释释 度菌数 之比 菌落总总数 个/g或个 /ml 报报告方式 个/g或个/ml 10-110-210-3 11365164201640016000或1.6104 22760295461.63800038000或3.8104 32890271602.22710027000或2.7104 4不可计计4650513513000 510000或 5.1105 527115270270或2.7102 6不可计计305123050031000或3.1104 空气中细菌总数检测方法 n测定空气中动态下细菌总数。 采用平板暴露法：车间在30m2以上者 ，于东、西、南、北（距墙1m处）、中五 点；小于30m2者，于一条对角线里、中、 外三点，高度均在1.5m处采样，将普通营 养琼脂平板（9cm直径）按上述采样点和高 度布放，暴露15min后立即关盖，于37温 箱培养24h后观察后果，求出5个或3个采样 点的平均菌数 计算公式 n菌数/m3= 式中： A平板面积，cm2； T平板暴露时间，min； N平均菌落数。 n标准限值：灭菌和消毒产品分别500和 2000cfu/m3 物体表面和生产人员手细菌总 数检测方法 采样方法: n将内径为5cm5cm的灭菌规格板，放在被检物体 表面，根据物体表面积大小，采平行样14个，用 浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次 （往返计为1次），将棉拭子放入10ml灭菌生理盐 水的采样管中。 n对生产人员手采样：被检人五指并拢，将浸有灭菌 生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至 指根处往返涂抹10次后，将棉拭子放入10ml