荷移分光光度法测定左旋多巴片含量的研究.doc

论文太原师范学院论文 论文题目：荷移分光光度法测定左旋多巴片含量的研究 姓 名：王慧贤 系科专业：化学系 、化学教育专业 学 位：理学学士 指导教师：李省云学习年限：2001年10月2005年7月 2004年5月20日 左旋多巴与四氯对苯醌荷移反应的研究 王慧贤 指导教师：李省云（太原师范学院化学系012班，太原 030031）摘 要 本文主要研究左旋多巴与四氯对苯醌（TCBQ）发生荷移反应，生成稳定的1：1络合物，其max = 348 nm，表观摩尔吸光系数=6.231105Lmol-1cm-1 ，在026.4gmL-1的范围内符合朗伯比耳定律.本方法测定药物样品含量与文献方法一致,回收率95.56%102.2%,相对标准偏差在2.32%以内。关键词 荷移反应 分光光度法 左旋多巴 四氯对苯醌 应用荷移（charge-transfer，CT）络合反应进行药物分析已广泛应用。四氯对苯醌是一个强烈电子接受体，可以与许多富电子药物形成-或-类型的络合物，通过对络合物含量测定，为药物分析提供了一种新的测定方法。左旋多巴（Levodopa）,化学名称为：3羟基L 酪氨酸，白色，结晶性粉末，无臭，无味，在水中微溶，在乙醇，氯仿或乙醚中不溶，稀酸中易溶。左旋多巴是一种抗震颤麻痹药，为体内合成去甲肾上腺素，多巴胺等的前体之一，能通过血脑屏障进入脑中，经多巴脱羧酶脱羧转化成多巴胺而发挥作用。目前,测定左旋多巴含量的方法主要有分光光度法1, 荧光光度法3,催化伏安法4,园二色谱法5,光学动力学法8 ,高效液相色谱法10等。但利用四氯对苯醌分光光度法测定其含量的方法未见报道。本文参考有关文献研究了左旋多巴与四氯对苯醌形成络合物的条件，初步探讨了其反应机理，建立了一种简便可靠的测定左旋多巴的新方法，并对药物样品进行了含量测定，结果令人满意。1 实验部分1.1 主要仪器与试剂仪器：Cary300紫外可见分光光度计（美国瓦里安技术中国有限公司）； KEI.WEI电热恒温水浴锅（北京科伟勇鑫实验仪器设备厂）。 电子天平92SM-202A-DR（普利赛斯国际贸易上海有限公司）试剂：左旋多巴标准溶液：准确称取75.08%（0.3485g）左旋多巴,研细，置于1L容量瓶中，加盐酸（9：1000）溶解，定溶，过滤，取续滤液备用。四氯对苯醌乙醇溶液：3.010-3 molL-1；硼砂溶液：0.1mol/L；盐酸溶液 （9：1000）所用试剂均为分析纯，实验用水为三次蒸溜水。1.2 实验方法取适量标准溶液适量于10mL的比色管中,加入硼砂溶液3.5mL,加入四氯对苯醌溶液1.5mL,用三次蒸溜水稀释至刻度,摇匀后，于30水浴中加热40min,冷却至室温.以试剂空白为参比,用1cm石英比色皿在348nm处测其吸光度A。2 结果与讨论2.1 实验条件选择2.1.1 吸收光谱按实验方法用紫外分光光度计进行扫描，并绘出吸收光谱(如图1所示)。从吸收光谱可看出反应后形成的荷移络合物在348nm处有最大吸收峰，试剂四氯对苯醌有两个吸收峰, 分别在292nm和211nm处，左旋多巴药品也有两个吸收峰，在273nm和204nm处。本实验选用348nm为测定波长。图1 吸收光谱图 Fig.1 Absorption Spectra 1络合物(试剂空白作参比)2试剂(溶剂作参比)3药物(溶剂作参比)2.1.2 溶剂的影响按照实验方法，选用不同溶剂进行实验，（结果见表）。结果表明,在水溶剂中反应情况最好，吸光度最大。所以本实验选用水为溶剂。表1 溶剂对反应的影响(300C, 30min)Table.1 Effect of solvent(300C, 30min)溶剂 水 甲醇 乙醇 丙酮 二甲基亚砜 乙醚 乙腈A 0.2575 0.0107 混浊 混浊 参比混浊 不互溶 参比浑浊2.1.3 温度和时间的影响取20ml硼砂溶液,10ml四氯对苯醌溶液,10ml左旋多巴溶液于100容量瓶,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀，测定不同温度下反应的吸光度（结果见表2），结果表明,300C和400C时,稳定络合物的吸光度相差不大,但300C更接近室温,且反应时间短,所以本实验最佳条件为300C,40min。表2 温度和时间的影响 Table.2 Effect of reaction temperature time 温度/ 时间/min2530405010 0.46000.40650.7442200.32900.46930.44420.6696300.37200.47600.46820.6163400.36170.47400.47300.5859500.39990.47440.47300.5850600.42440.47860.4720700.4036 0.48300.46702.1.4 硼砂用量的影响按实验方法，改变硼砂的用量,测其吸光度(结果见表3)。结果表明，加入3.5mL硼砂溶液,反应较完全。本实验选用硼砂溶液用量为3.5ml。 表3硼砂用量的影响 Table.3 Effect of acidicity 硼砂用量(ml) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0吸光度（A）- 0.026 0.127 0.525 0.304 0.698 0.423 0.674 0.684 0.545 0.498 0.6012.1.5 试剂用量的影响按照实验方法,加入不同量的四氯对苯醌乙醇溶液，反应后测定其吸光度（结果见表4）。实验表明,随着四氯对苯醌的用量增大，吸光度的值也增大；当增大到1.4mL后，吸光度的值达到最大，其后变化不大,为了反应完全,本实验取稍过量1.5ml四氯对苯醌.表4 试剂用量的影响 Table.4 Effect of reagent 四氯对苯醌(ml)0.1 0.3 0.5 0.7 1.0 1.2 1.4 1.5 1.7 1.9吸光度（A） 0.241 0.329 0.436 0.420 0.500 0.578 0.585 0.573 0.569 0.5812.1.6 工作曲线按照实验确定的最佳条件,取不同量的试液，反应后测其络合物的吸光度，并绘制工作曲线(见图2)。处理所得数据，得线性方程为：0.03558C-0.0127，相关系数R=0.99931,表观摩尔吸光系数为=6.231103Lmol-1cm-1，线性范围：0-26.4g/ml 表5药品加入量Table.5 The affiliation of drugs measures 左旋多巴(ml)0.07 0.1 0.15 0.3 0.4 0.5 0.6 1.0吸光度（A） 0.0495 0.0904 0.1275 0.2787 0.3699 0.443 0.5342 0.9373 图 2 工作曲线Fig.2 Working Curve2.1.7 络合物组成的测定用等摩尔连续变化法测定络合物的组成（见图3），结果表明左旋多巴与四氯对苯醌的络合比为1：1;并计算出其表观稳定常数为：K稳= 4.37105 表6络合比 M/M+N 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 吸光度 0.0756 0.1045 0.1811 0.2366 0.2843 0.2811 0.2715 0.2159 0.1340 注：M左旋多巴平衡浓度 NTCBQ平衡浓度 图 3 等摩尔连续变化法测定络合物的组成Fig3. Determination of composition by Jobs methodM左旋多巴;N四氯对苯醌2.1.8 稳定性实验 取3.5ml硼砂溶液，1.5ml四氯苯醌溶液，0.5ml左旋多巴标准溶液于10ml比色管中，加水稀释至10ml，摇匀，在30水浴锅中加热40min，以试剂空白为参比，在=348nm处测其吸光度值。然后每隔10分钟测一次吸光度，（结果见表7）从表中可以可知络合物在170分钟以内吸光度值变化不大，说明络合物的稳定性较好。 表7络合物的稳定性 时间/min 40 50 60 70 80 90 100 吸光度 0.5640 0.5714 0.5855 0.5960 0.6076 0.6181 0.6215 时间/min 110 120 130 140 150 160 170吸光度 0.6329 0.6344 0.6376 0.6375 0.6378 0.6361 0.6345 3 反应机理探讨左旋多巴分子内N原子上有一孤电子对可作为电子给予体，而四氯对苯醌作为电子接受体，在水溶液中形成-络合物。基于测得络合物组成比为1:1，该荷移反应可表示为:4 样品的测定及方法的回收率和精密度4.1 样品的测定准确称取上海立达制药有限公司生产的左旋多巴片10片，研细，称取相当于一片的量,置于1000mL容量瓶中,加盐酸溶液（9:1000）定容。摇匀,过滤.按照实验方法测定吸光度，同时与文献1法测定值进行比较。（结果见表8）表8样品的测定（n=4）Table.8 Determination of sample生产批号 本法 药典法 040703 测定值（g/片） 平均值（g/片） 测的值（ g/片） 0.2516 0.2519 0.2529 0.2540 0.2526 0.2643030804 测定值（g/片） 平均值（g/片） 测的值（g/片） 0.2387 0.2407 0.2410 0.2413 0.2404 0.2381 4.2方法的回收率及精密度按照样品测定方法，在样品中分别加入不同量的标准溶液，用标准加入法测定其回收率（结果见表9）。由表9中可知左旋多巴的回收率为：95.56-102.2% ，相对标准偏差在2.32% 之内。5 结论本方法利用左旋多巴与四氯对苯醌形成的荷移络合物的特征吸收测定左旋多巴的含量，快速、简便、灵敏、形成的络合物稳定，结果准确可靠，适用于左旋多巴药物的检测。表9 回收率的测定（n=4）Table.9 Determination result of recovery of sample生产批号加入量（g） 测定值（g） 平均值（g） 回收率（%） RSD（%）040703 79.29 79.12 79.37 79.45 79.79 79.43 100.18 0.35132.15 127.18 129.99 132.57 130.05 129.95 98.34 1.69237.87 226.45 226.67 227.57 228.56 227.31 95.56 0.42030804 71.43 71.16 72.23 73.50 75.10 73.00 102.19 2.32119.05 113.13 117.48 117.59 118.44 116.66 97.99 2.05190.48 190.98 192.52 192.83 193.00 192.33 100.86 0.48参考文献1 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）.北京:化学工业出版社. 2000: 9599602 Milada Dolezalova,Magda Tkaczykova.Direct high-performance liquid chromatographic determination of the enantiomeric purity of levodopa and methyldopa:comparison with pharmacopoeial polarimetric methods.Journal of pharmaceutical and biomedical analysis.1999,19:(3-4)555-5673马红燕.荧光光度法测定左旋多巴的研究.延安大学学报.1999，18（4）：52584金利通，钱静汝.催化伏安法测定左旋多巴.应用化学.1990，7（6）：925沈春镒.园二色谱法测左旋多巴.分析化学.1992，20（10）：11506Kamal A.Sagar,Malcolm R.Smyt.Simultaneous determination of levodopa,carbidopa and their metabolites in human plasma and urine samples using LC-EC.Journal of pharmaceutical and biomedical analysis.2000,22(3)613-6247Martinez-Lozano C.,Perez-Ruiz T.Tom as V.Analyst,1991,116(8):8578胡玉斐，吕弋，何德勇，何树华，章竹君.鲁米诺-铁氰化钾化学发光体系测定左旋多巴.分析试验室.2004，23（5）:18-209杜迎翔，高国强，陈玉英，胡玉柱，韩晓蓉.左旋多巴片中左旋多巴的流动注射分析法.中国药科大学学报.1994，25（4）：227-23010李少燕,韦志明.高效液相色谱同时分析左旋多巴和甲基多巴.广西化工.2000,S111杨星昊,顾觉奋,周荣汉.用离子交换法从植物水中纯化分离左旋多巴的研究.离子交换与吸附.1998,03Charge-Transfer Reaction of Levodopa with Tetrachlorobenquinone Wang Huixian Teacher:Li Shengyun (Department of Chemistry, Taiyuan Normal University, Taiyuan 030031)Abstract A new spetrophotometric method has been developed for the determination of Levodopa. It is based on a reaction of charge-transfer with tetrachlorophobenquinone in borax buffer solution. The complex maximum absorption is at 348nm. The composition of complex of Levodopa with tetrachlorobenquinone is 1:1. The apparent molar absorptivities is 6.231103Lmol-1cm-1 . The calibration curves are liner in the concentration range of 0-26.4g/ml. The method has been applied to the determination of Levodopa with satisfactory result. The recovery is95.56%-102.2% , t