植保毕业论文-高粱叶枯病的室内毒力测定.doc

编号：编号：119070241015 本 科 毕 业 论 文 题 目：高粱叶枯病的室内毒力测定 学 院： 农学院 专 业： 植物保护 年 级： 2011 级 姓 名： 赵海龙 指导教师： 赵艳琴 完成日期： 2015 年 5 月 目 录 摘要1 Abstract2 引言3 1 材料和方法3 1.1 供试材料3 1.2 室内药剂筛选及配制4 1.3 试验方法5 2 结果与分析6 2.1 单剂抑制率的测定6 2.2 孢子抑制率及其显著性分析8 2.3 毒力回归方程的计算11 3 结论与讨论12 参考文献13 致谢14 内蒙古民族大学本科毕业论文 0 摘 要 高粱叶枯病是高粱上一种真菌病害，本文主要是以高粱叶枯病为材料，采用生 长速率法和孢子萌发抑制法对常用的五种杀菌剂进行室内毒力测定，结果表明：对 于高粱叶枯 2 号菌株，50%异菌脲 500 倍液 0.01 和 0.05 显著水平下，该病菌的生 长速率均为最低，孢子抑制率最高，菌落生长抑制率最高，是该病菌的有效防治药 剂，而在 50%嘧菌酯 400 倍液和 3%中生菌素在 0.01 显著水平下下生长速率最高， 菌落生长抑制率最低，孢子抑制率最低，对于防治该病并无明显效果；对于高粱叶 枯 4 号菌株，50%异菌脲 500 倍液 0.01 和 0.05 显著水平下该病菌的生长速率最低， 孢子抑制率最高，菌落生长抑制率最高，是防治该病菌的有效药剂，而在 50%嘧菌 酯 400 倍液和 800 倍液下该菌株表现出生长促进作用。 关键词：高粱叶枯病；杀菌剂；毒力测定；萌发抑制率 内蒙古民族大学本科毕业论文 1 Abstract Sorghum leaf blight is a new kind of fungi diseases on sorghum。This paper is based on sorghum leaf blight materials using the growth rate and spore germination inhibition method to measurement the five common fungicides indoor toxicity。The results show that：For the sorghum leaf blight No.2 strain，the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid under the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the lowest growth rate and the best inhibitory effect which is an effective control of the germs。But under the Azoxystrobin 50% w.p. 400 times liquid and the Zhongshengmycin 3% w.p. liquid of the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the highest growth rate and the lowest colony growth inhibition rate。For the sorghum leaf blight No.4 strain， the Iprodione 50% w.p. 500 times liquid of the significant level of 0.01 and 0.05 exhibited the lowest growth rate and the best inhibitory effect which is an effective control of the germs。But under the Azoxystrobin 50% w.p. 400 times and 800 times liquid of the significant level of 0.01 and 0.05，the strain showed growth promoting effect。 Key Words:sorghum leaf blight；fungicide；toxicity measurement；germination inhibition rate 内蒙古民族大学本科毕业论文 2 引 言 高粱属禾本科一年生草本植物，又名蜀黍、秫秫、芦粟、茭子、木稷等，高粱 是酿酒的重要原料，泸州特曲、茅台、竹叶青等名酒都是以高粱为主要原料酿造的 【1】。高粱在中国的栽培面积很广，其中山西地区是高粱的主产量区，在内蒙地区， 高粱的的产量也占有很大的比重。 随着高粱大面积的种植，一方面，高粱病害的蔓延也逐渐增长。据统计，目前 高粱病害种类高达 30 多种，其主要为害以黑穗病，叶斑病，炭疽病和大斑病为主 【2】，高粱散黑穗病在我国各高粱产区普遍发病，在华北、东北发病较重，近几年 来严重影响高粱产量【3】。另一方面，高粱上的新病害也逐步增多，高粱叶枯病在 一些地区也被发现。高粱叶枯病是由细极链格孢（Alternaria tenuissima）引起 的真菌性病害，属于半知菌亚门半知菌纲链孢霉目黑霉科链格孢属，链格孢属是全 球分布最广，经济上重要的半知菌类真菌之一，其有性态在自然条件下难以见到， 仅有十余种链格孢的有性态在实验室条件下被发现；其菌丝黑色，大量存在于土壤、 空气和作为培养料的各种有机质上，其孢子通过空气传播【4】。由链格孢引起的病 害一般都属于流行性较强的病害。高粱叶枯病主要危害的是高粱的叶片，影响其光 合作用，从而使高粱产量降低。在发病初期，高粱叶片上形成梭形斑，上面长有白 色柱状霉层，由于湿度的增大，在后发病期病斑的边缘出现黄褐色轮纹。高粱叶枯 病是高粱上一种新的病害，目前还没有特效的防治药剂，对此，本文采用菌丝生长 速率法和孢子抑制率法对五种杀菌剂对于高粱叶枯病菌的室内毒力进行研究，筛选 内蒙古民族大学本科毕业论文 3 出防治该病害有效药剂，用来指导田间生产，从而提高产量，增加经济效益。 1 材料和方法 1.11.1 供试材料供试材料 1.1.11.1.1 供试菌供试菌种种 采集于内蒙古通辽市内蒙古民族大学农学院试验田，进行分离纯化【5】获得两 个菌种：高粱叶枯 2 号菌种和高粱叶枯 4 号菌种，并保存于冷藏箱备用。 1.1.21.1.2 供试药剂及有效成分供试药剂及有效成分 1.1.31.1.3 培养基制备原料培养基制备原料 本试验均采用 PDA 培养基进行接种培养，培养基配制原料包括马铃薯 200g，葡 萄糖 20g，琼脂 20g 和蒸馏水 1000ml。 1.1.41.1.4 试验主要仪器试验主要仪器设备设备 超净工作台，LRHS-250B 恒温恒湿培养箱（上海贺德实验设备有限公司），立 鹤牌电热恒温培养箱（山东潍坊医疗器械厂），101 型电热鼓风干燥箱（江苏省通 州市通用科技仪器厂），万分之一电子天平(上海精密科学仪器公司)，电子显微镜 ( 日本尼康公司)，高压灭菌锅（上海三申），酒精灯，培养皿，移液管，接种环， 打孔器，直尺，锥形瓶，烧杯，搅拌棒，电磁炉，镊子等。 编 号药剂名称有效成分剂型防治对象生产厂家 1 异菌脲 50% 可湿性粉剂小麦赤霉病海南正业中农高科技股份有 限公司 2 多菌灵 50% 可湿性粉剂 水果蔬菜等多 种病害 利民化工 3烯酰福美双55% 水分散粒剂霜霉病青岛瀚生科技 4中生菌素3% 可湿性粉剂辣椒疫病利民化工 5 嘧菌酯 50% 可湿性粉剂黄瓜枯萎病 陕西美邦农药 内蒙古民族大学本科毕业论文 4 1.21.2 试验室内药剂梯度调节及培养基的配制试验室内药剂梯度调节及培养基的配制 1.2.11.2.1 PDAPDA 培养基的培养基的制备制备 按照 PDA 培养基的制备配方，配制 1000ml 培养基五组，每组分装至 3 个三角 瓶中，封装完毕后，用高压灭菌锅 121灭菌 30min 后取出冷却备用。 1.2.21.2.2 药剂梯度调节及配制方案药剂梯度调节及配制方案 本试验的每个药剂均设定五个梯度，一个对照，每个梯度三次重复。具体配制 为：50%异菌脲可湿性粉剂配制 500 倍母液，配制成 500、1000、1500、2000、2500 倍液；50%多菌灵可湿性粉剂配制 400 倍母液，配制成 400、600、800、1000、1200 倍液；55%烯酰福美双水分散粒剂配制 400 倍母液，配成 400、800、1000、1200、1600 倍液；3%中生菌素可湿性粉剂配制成 400 倍母液，配 制成 400、600、800、1000、1200 倍液；50%嘧菌酯可湿性粉剂配制 400 倍母液， 配成 400、800、1000、1200、1600 倍液。 1.31.3 试验方法试验方法 1.3.11.3.1 生长速率法生长速率法 本试验需在超净工作台上进行，因此在实验前需要对无菌工作室和超净工作台 进行 30min 左右的紫光灯灭菌，确保将空气中的杂菌降到最低。并且试验所用的培 养皿和其他仪器都要放进干热灭菌箱 165灭菌 1h，冷却后取出备用。 首先将之前配制的培养基水浴加热溶解，加入少许的抗生素后冷却备用。在无 菌条件下，将上述配置好的药剂取 1ml 放入 9ml 冷却至约 50的 PDA 培养基中混 合均匀，倒入消毒灭菌的培养皿中制成带药的培养基平板，每个药剂浓度重复 3 次。 然后用直径为 5mm 的打孔器，在试验前将已经培养好的高粱叶枯病 2 号菌种的菌 落中打取直径为 5mm 的菌饼（打取菌落边缘生长旺盛的菌丝），将菌饼分别接种 内蒙古民族大学本科毕业论文 5 在含不同浓度药剂的 PDA 平板的中心（使带菌丝的一面接触培养基），加盖，翻 转,25下放入恒温培养箱中培养。另外，每个药剂做一个对照处理，对照组取 1ml 无菌水放入 9ml PDA 培养基中混合，再倒入平板中，同样用消毒后的打孔器打取菌 饼接到培养基上，重复三次。（高粱叶枯病 4 号菌种采取同样的方法）最后在培养 的第 2、4、6 天分别调查病原菌菌丝生长情况，并用十字交叉法测量其菌落直径， 记录数据。 1.3.21.3.2 孢子孢子数目法数目法 将培养 5 至 6 天的病原菌取出，在培养皿中滴加 50ul 的土温试剂和 500ul 的 蒸馏水，用玻璃棒搅拌，配制成均匀的孢子悬浮液，用球计数板记录孢子数目。 2 结果与分析 2.12.1 单剂抑制率的测定单剂抑制率的测定 根据实验记录的菌落直径数据绘制表格，运用数据分析软件计分析，对于高粱 叶枯 2 号菌株，50%异菌脲抑制率范围为 82.3%-48.3%，其次为 55%烯酰福美双， 抑制率范围为 71.3%-42.2%，接下来是 50%多菌灵，3%中生菌素，而抑制率最低的 是 50%嘧菌酯；其中，50%异菌脲 500 倍液的抑制率最高达 82.3%，其抑制效果最好， 50%异菌脲 1000 倍液和 55%烯酰福美双 1600 倍液的抑制效果仅次之，50%嘧菌酯 400 倍液的抑制效果最差，仅达 17%左右。 表 1 五种药剂各梯度对高粱叶枯 2 号菌株菌落生长平均速率及抑制 药剂及有效成分稀释倍数 GLYK2 菌落生长平均速率抑制率 CK6.3333 50%异菌脲500 倍液 1.1222 0.8228 50%异菌脲1000 倍液 1.6278 0.7429 50%异菌脲1500 倍液 2.1944 0.6535 内蒙古民族大学本科毕业论文 6 50%异菌脲2000 倍液 2.6278 0.5851 50%异菌脲2500 倍液 3.2722 0.4833 CK9.1389 50%多菌灵400 倍液 4.4537 0.5127 50%多菌灵600 倍液 6.2944 0.3112 50%多菌灵800 倍液 6.9185 0.2429 50%多菌灵1000 倍液 5.7426 0.3716 50%多菌灵1200 倍液 7.4278 0.1872 CK12.0556 55%烯酰福美 双 400 倍液 6.9685 0.4219 55%烯酰福美 双 800 倍液 5.2852 0.5616 55%烯酰福美 双 1000 倍液 5.5796 0.5371 55%烯酰福美 双 1200 倍液 4.9407 0.5901 55%烯酰福美 双 1600 倍液 3.4611 0.7129 CK12.2778 3%中生菌素400 倍液 7.2111 0.4126 3%中生菌素600 倍液 8.3981 0.3159 3%中生菌素800 倍液 9.5481 0.2223 3%中生菌素1000 倍液 9.3907 0.2351 3%中生菌素1200 倍液 9.5667 0.2208 CK10.2778 50%嘧菌酯400 倍液 8.4926 0.1736 50%嘧菌酯800 倍液 5.9639 0.4197 50%嘧菌酯1000 倍液 6.4102 0.3763 50%嘧菌酯1200 倍液 5.5454 0.4604 50%嘧菌酯1600 倍液 7.5694 0.2635 内蒙古民族大学本科毕业论文 7 对于高粱叶枯 4 号菌株，50%异菌脲抑制率范围为 68.1%-45.6%，其次为 55%烯 酰福美双，抑制率范围为 67.5%-42.1%，接下来是 50%多菌灵，3%中生菌素，其 中，50%异菌脲 500 倍液的抑制率最高，其抑制效果最好，55%烯酰福美双 1000 倍液和 1200 倍液的抑制效果仅次之；而 50%嘧菌酯低倍液下对于该菌种的生长具有 增效作用，高倍液下仅具有微弱的抑制作用，效果不太明显。 表 1 五种药剂各梯度对高粱叶枯 4 号菌株菌落生长平均速率及抑制率比较 GLYK4 药剂及有效成分稀释倍数 菌落生长平均速率抑制率 CK7.1667 50%异菌脲500 倍液 2.2889 0.6806 50%异菌脲1000 倍液 2.9611 0.5868 50%异菌脲1500 倍液 3.4778 0.5147 50%异菌脲2000 倍液 2.9278 0.5914 50%异菌脲2500 倍液 3.9000 0.4558 CK8.6667 50%多菌灵400 倍液 4.6019 0.4690 50%多菌灵600 倍液 6.0204 0.3053 50%多菌灵800 倍液 6.3352 0.2690 50%多菌灵1000 倍液 5.3981 0.3771 50%多菌灵1200 倍液 6.7519 0.2209 CK10.3056 55%烯酰福美双400 倍液 5.9722 0.4204 55%烯酰福美双800 倍液 6.2685 0.3917 55%烯酰福美双1000 倍液 3.3500 0.6749 55%烯酰福美双1200 倍液 3.6407 0.6467 55%烯酰福美双1600 倍液 3.7611 0.6350 CK12.2222 3%中生菌素400 倍液 6.2204 0.4911 3%中生菌素600 倍液 8.6296 0.2939 内蒙古民族大学本科毕业论文 8 3%中生菌素800 倍液 9.6556 0.2099 3%中生菌素1000 倍液 9.6759 0.2083 3%中生菌素1200 倍液 9.8722 0.1922 CK5.8333 50%嘧菌酯400 倍液 8.0648 -0.3825 50%嘧菌酯800 倍液 8.7148 -0.4939 50%嘧菌酯1000 倍液 5.2954 0.0922 50%嘧菌酯1200 倍液 3.1417 0.4614 50%嘧菌酯1600 倍液 1.8472 0.6833 2.22.2 孢子抑制率及其显著性分析孢子抑制率及其显著性分析 根据试验记录的孢子数量进行相对抑制率的分析和显著水平分析，对于 2 号菌 种，处于 0.05 的显著水平下，50%异菌脲显著水平较其他杀菌剂高，最高的是 50% 异菌脲 500 倍液，孢子抑制效果应是最好的；其次为 50%异菌脲 1500 倍液，50%异 菌脲 2000 倍液；显著水平最低的为 3%中生菌 1200 倍液，55%福美双和 50%多菌灵 差异显著性均处于中间同一水平。处于 0.01 的显著水平下，最高的仍是 50%异菌脲 500 倍液，孢子抑制效果是最好的；其次为 50%异菌脲 1000 倍液，50%异菌脲 1500 倍液，50%异菌脲 2000 倍液；55%福美双和 50%多菌灵差异显著性均处于中间同一水 平。 表 3 五种药剂各梯度对高粱叶枯 2 号菌株孢子抑制率显著性差异比较 显著水平 药剂及有效成分稀释倍数孢子相对抑制率 0.010.05 3%中生菌素1200 倍液 0.8321gK 50%嘧菌酯800 倍液 0.8754fgHK 3%中生菌素400 倍液 0.8016efgGHK 3%中生菌素600 倍液 0.8495defgFGHK 3%中生菌素800 倍液 0.8567cdefgEFGH 50%嘧菌酯1600 倍液 0.8431cdefgdefgh 内蒙古民族大学本科毕业论文 9 3%中生菌素1000 倍液 0.8852cdefgEFGH 50%嘧菌酯400 倍液 0.8946bcdefDEFGH 50%嘧菌酯1200 倍液 0.8846abcdefCDEFG 50%多菌灵1000 倍液 0.9089abcdefBCDEF 50%嘧菌酯1000 倍液 0.8992abcdeABCDE 50%多菌灵1200 倍液 0.9115abcdeABCDE 50%多菌灵800 倍液 0.9123abcdeABCDE 50%多菌灵400 倍液 0.9216abcdABCDE 55%烯酰福美双1600 倍液 0.9253abcdABCDE 50%多菌灵600 倍液 0.9311abcdABCDE 55%烯酰福美双400 倍液 0.9564abcdABCDE 55%烯酰福美双1000 倍液 0.9434abcABCD 55%烯酰福美双1200 倍液 0.9658abcABCD 55%烯酰福美双800 倍液 0.9684abcABC 50%异菌脲2500 倍液 0.9838abAB 50%异菌脲2000 倍液 0.9844aA 50%异菌脲1500 倍液 0.9857aA 50%异菌脲1000 倍液 0.9864aAB 50%异菌脲500 倍液 0.9875aA 对于 4 号菌种，处于 0.01 和 0.05 显著水平下的显著性差异基本相同，50%异 菌脲显著水平较其他杀菌剂高，最高的是 50%异菌脲 500 倍液，其孢子抑制效果为 最佳；显著水平最低的为 50%嘧菌酯，其抑制效果不仅小，反而低倍液下右微弱的 促进效果；而 3%中生菌素，55%福美双和 50%多菌灵差异显著性之间没有大的差别。 表 4 五种药剂各梯度对高粱叶枯 4 号菌株孢子抑制率显著性差异比较 显著水平 药剂及有效成分稀释倍数孢子相对抑制率 0.010.05 50%嘧菌酯400 倍液 -0.3529hK 50%嘧菌酯800 倍液 -0.4165gH 内蒙古民族大学本科毕业论文 10 50%嘧菌酯1000 倍液 0.1521fG 3%中生菌素1200 倍液 0.8105hK 50%嘧菌酯1600 倍液 0.8452efEF 50%多菌灵1200 倍液 0.7986eF 50%嘧菌酯1200 倍液 0.5498deF 50%多菌灵600 倍液 0.8213cdeEF 50%多菌灵800 倍液 0.8252cdeEF 50%多菌灵1000 倍液 0.8123cdeEF 50%多菌灵400 倍液 0.8547bcdeEF 3%中生菌素1000 倍液 0.8426bcdeEF 3%中生菌素800 倍液 0.8245bcdeCDEF 3%中生菌素600 倍液 0.8459abcdeBCDEF 55%烯酰福美双1200 倍液 0.8947abcdeBCDEF 55%烯酰福美双1600 倍液 0.8959abcdeBCDEF 3%中生菌素400 倍液 0.8989abcdeABCDEF 55%烯酰福美双1000 倍液 0.9018abcdeABCDE 55%烯酰福美双800 倍液 0.9125abcdeABCDE 50%异菌脲2500 倍液 0.9431abcdABCD 55%烯酰福美双400 倍液 0.9541abcABC 50%异菌脲2000 倍液 0.9689abcABC 50%异菌脲1500 倍液 0.9657abABC 50%异菌脲1000 倍液 0.9798abAB 50%异菌脲500 倍液 0.9875aA 2.32.3 毒力回归方程的计算毒力回归方程的计算 最后对 5 种杀菌剂进行毒力回归方程的计算，对于高粱叶枯 2 号菌株，五种杀 菌剂的 EC50 高低排列为:50%异菌脲可湿性粉剂50%多菌灵可湿性粉剂55%烯 酰福美双水分散粒剂50%嘧菌酯可湿性粉剂3%中生菌素可湿性粉剂，50%异菌脲 最灵敏，因此抑菌效果最好，而 3%中生菌素 EC50 很大，且 r 值是负值，浓度与抑 制率表现负相关，其抑菌效果最差。 内蒙古民族大学本科毕业论文 11 表 5 五种杀菌剂对高粱叶枯 2 号菌株的毒力回归方程 药剂 r 毒力回归方程EC50（mg/L) 50%异菌脲可湿性粉剂 0.92y=6.97+0.08x4.98E-26 50%多菌灵可湿性粉剂 0.69y=5.68+0.23x1.09E-03 55%烯酰福美双水分散粒剂 0.51y=5.65+0.34x1.23E-02 3%中生菌素可湿性粉剂 -0.59y=7.30-0.41x4.27E+05 50%嘧菌酯可湿性粉剂 0.70y=5.29+0.29x9.88E-02 对于高粱叶枯 4 号菌株，50%异菌脲可湿性粉剂的 EC50 为 7.47E-02，表现为最 灵敏，抑菌效果最好，而 50%嘧菌酯可湿性粉剂的 EC50 非常，抑菌效果表现为最差。 表 6 五种杀菌剂对高粱叶枯 4 号菌株的毒力回归方程 药剂 r 毒力回归方程EC50（mg/L) 50%异菌脲可湿性粉剂 0.96y=5.55+0.49x7.47E-02 50%多菌灵可湿性粉剂 0.94y=4.65+0.41x7.21E+00 55%烯酰福美双水分散粒剂 0.90y=4.44+0.64x7.60E+00 3%中生菌素可湿性粉剂 0.89y=3.76-0.72x5.15E+01 50%嘧菌酯可湿性粉剂 -0.62y=10.39-1.82x9.35E+02 3 结论与讨论 本文选用农业生产中用来防治真菌病害常用的 5 种杀菌剂对高粱叶枯病进行室 内的药剂筛选和毒力测定，这 5 种杀菌剂对于链格孢的病害都具有很好的防治作用， 并且具有不同程度的抑制作用，通过选取不同梯度的药剂用于试验，计算菌丝的生 长抑制率和孢子抑制率，最终结合毒力回归方程，结果初步显示 50%异菌脲可湿性 粉剂对于该病菌的防治效果表现最好，尤其是在 400-100 倍液之间，其防治效果最 高。另外，55%烯酰福美双水分散粒剂和 50%多菌灵对于高粱叶枯病的防治也有一 定的效果；3%中生菌素的防治效果微乎其微，在农业生产中起不到什么大的防治作 用；而 50%嘧菌酯在这几个方法中得出的结果均是对病害的发生有促进作用，因此 在大田防治高粱叶枯病害时，尽量不要用此药剂。 内蒙古民族大学本科毕业论文 12 目前高粱上的病害主要以高粱大斑病和黑穗病为害最为严重，在农业防治中目 前还没有特效的药剂，一般使用的化学药剂多为光谱性杀菌剂或是一些新型生物源 药剂。本文最终筛选出的药剂异菌脲属于低毒类内吸性杀菌剂，对于蔬菜水果上的 霜霉病，叶斑病都有很好的防治效果，另外，异菌脲对于玉米交链格孢叶枯病的防 治效果也比较好，与高粱