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文档简介

实验二 革兰氏染色及真菌形 态结构观察 一、实验目的 学习细菌的革兰氏染色原理和方法 了解霉菌、酵母菌的特点并观察其形态特征 二、实验原理 单染色法:只能观察微生物的大小、形状 、和细胞排列状况,但不能鉴别微生物以 及它的特殊构造等。 复染色法:用两种或两种以上染色液进行 染色,有协助鉴别微生物的作用,故也称 鉴别染色法。常用的有: 革兰氏染色法、荚膜染色法、芽孢染色法 、鞭毛染色法等。 (一) 革兰氏染色 丹麦C.Gram创立,用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构 G肽聚糖层较薄,交联度低,含较多脂 质,故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质,增加了细胞的通透性,使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出,经沙 黄复染呈红色。 G细胞壁结构致密,用脱色剂处理后, 肽聚糖层孔径缩小,通透性降低,故细 菌仍保留初染时的紫色。 (二) 了解霉菌、酵母菌的特点 并观察其形态特征 三、实验材料 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(24h培养物) 革兰氏染色液一套 真核微生物标片 四、实验步骤 革兰氏(Gram)染色法 1. 涂片 2. 初染:在做好的涂面上滴加草酸 铵结晶紫染液,染1分钟,倾去 染液,流水冲洗至无紫色。 3. 媒染:先用新配的路哥氏碘液冲 去残水,而后用其覆盖涂面1分 钟,后水洗。 4. 脱色:除去残水后,滴加95%酒 精进行脱色约1520秒,后立即 用流水冲洗。 5. 复染:滴加番红染色液,染35 分钟,水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检:观察染色结果并绘图。 注意事项 1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性 菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被 染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂 片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以 严格规定。 2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后 ,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀 释而影响染色效果。 3.选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h, E.coli培养24h。若菌龄太老,由于菌体死 亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应 。 观察酵母菌形态和无 性繁殖: 用高倍镜观察啤酒酵母的 形态和出芽繁殖。 观察黑根霉菌丝情况和子囊孢子情 况(着重辨认孢子囊、包囊梗、假 根): 观察青霉菌丝和分 生孢子着生情况: 1.单轮生青霉群;2.对称二轮 生青霉群;3.多轮生青霉群; 4.不对称生青霉群 观察黑曲霉菌丝分隔情况和分生孢子着 生情况(着重辨认分生孢子梗、足细胞 和分生孢子): 五、实验结果 记录所观察到的二种菌革兰氏染色结果 的差别,并判断是阳性还是阴性 观看根霉菌、青霉菌、曲霉菌与酵母菌 的示范片 绘图、写实验报告 六、问题与讨论 要

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