实验1：蛋白质的两性电离和等电点.ppt

实 验 一 蛋白质的两性电离和等电点 【原理】 【目的】验证蛋白质两性电离的性质,测定酪蛋白 的等电点。 碱负酸正 【原理】 当蛋白质溶液的pHpI时，蛋白质分子带 电 荷；当蛋白质溶液的pHpI时蛋白质分子带 电 荷。在pH值大于或小于pI的溶液中，由于存在电 荷膜的保护，蛋白质分子不易析出。当溶液pH等 于pI时，溶液的溶解性最低，溶质容易析出。根 据酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度来观察蛋白质 的两性电离，并测定其等电点。 负 正 【试剂】 1. 5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 2. 0.01%溴甲酚绿（BCG）溶液（指示剂， pH3.85.4） 3. 0.04 mol/L盐酸溶液 4. 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液 5. 1.0 mol/L乙酸溶液 6. 0.1 mol/L乙酸溶液 7. 0.01mol/L乙酸溶液 【器材】 试管 试管架 毛滴管 记号笔 蓝 黄 pH3.85.4 【实践操作】1.取洁净大试管1支，按表如下操作 操 作 步 骤结 果结 果 分 析 加入5g/L酪蛋白乙酸钠溶液20滴 ，BCG指示剂5滴，混匀后，观察 并记录溶液的颜色。 缓慢滴加0.04mol/L盐酸溶液，边 滴边摇，直至产生明显的大量沉 淀，观察并记录沉淀与溶液颜色 的变化。 继续滴入0.04mol/L盐酸溶液，直 至沉淀全部溶解，观察并记录沉 淀与溶液颜色的变化。 滴入0.04mol/L 氢氧化钠溶液， 边滴边摇，使之再度产生明显的 颗粒。 继续滴加0.04mol/L 氢氧化钠溶 液，直至沉淀溶解，观察并记录 溶液颜色变化。 结论： 颜色 滴数 滴数 滴数 颜色 滴数 颜色 颜色 颜色 蓝 黄 pH3.85.4 【实践操作】 2.取3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作，注意混匀 加入物体（滴） 1 2 3 蒸馏水 16 30 34 0.01mol/L乙酸溶液 6 0.1 mol/L乙酸溶液 10 1.0 mol/L乙酸溶液 24 5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 10 10 10 溶液PH值 3.2 4.7 5.9 立即混匀各管，静置 10分钟，观察各管沉淀情况 【结果与分析】 沉淀情况 结果分析 沉淀结果用“-，+，+，+”表示并记录于表中。 【注意事项】 1.沉淀符号，“”表示无沉淀，“”表示浑浊无明显沉淀，“” 有明显沉淀，有小颗粒；“”表示大块沉淀。 2.四人共用一组试剂，在本座位，依次轮流添加，不可四处走动。 3.每组派一名代表到前面取一小试管蒸馏水，本组共用。 4.添加各种试剂注意用相应的毛滴管，不可混用！ 5.注意混匀试管，实验1中添加盐酸和氢氧化钠时注意边添加边震荡试管， 接近PI时逐滴添加，沉淀消失后停止添加试剂，在结果一栏记入添加试剂 的滴数。 6.实验1出现明显沉淀，请老师检查后在实验报告上并签字确 认（应两次出现沉淀）。 7.实验2出现结果后请老师检查确认后给予实验成绩。 冒用他人结果，两人成绩全部取消，并加倍扣分。 【实践操作】1.取洁净大试管1支，按表如下操作 操 作 步 骤结 果结 果 分 析 加入5g/L酪蛋白乙酸钠溶液20滴 ，BCG指示剂67滴，混匀后，观 察并记录溶液的颜色。 缓慢滴加0.04mol/L盐酸溶液，边 滴边摇，直至产生明显的大量沉 淀，观察并记录沉淀与溶液颜色 的变化。 继续滴入0.04mol/L盐酸溶液，直 至沉淀全部溶解，观察并记录沉 淀与溶液颜色的变化。 滴入0.04mol/L 氢氧化钠溶液， 边滴边摇，使之再度产生明显的 颗粒。 继续滴加0.04mol/L 氢氧化钠溶 液，直至沉淀溶解，观察并记录 溶液颜色变化。 结论： 蓝色 蓝色浅沉淀 浅黄（白） 浅蓝色沉淀 蓝色 PH=PI，达到等电点时，蛋 白质无电荷膜保护，彼此 聚集，容易析出。 PHPI，此时蛋白质带正电荷 ，彼此排斥，不容易析出。 PHPI ，此时蛋白质带负电荷 ，彼此排斥，不容易析出。 PH=PI，达到等电点时，蛋 白质无电荷膜保护，彼此 聚集，容易析出。 酪蛋白具有两性电离的性质，PH=PI时蛋白质容易沉淀， PHPI或PHPI 时，蛋白质带正电荷或负电荷，彼此排斥，不容易沉淀。 PHPI ，此时蛋白质带负电 荷，彼此排斥，不容易析出。 【小测试】 名词解释 1.蛋白质的等电点 2.蛋白质的变性 请填写下表 方法盐析法有机溶剂沉淀法 常用试剂 沉淀原理 对蛋白质生物 活性的影响 【实践操作】 2.取3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作，注意混匀 加入物体（滴） 1 2 3 蒸馏水 16 30 34 0.01mol/L乙酸溶液 6 0.1 mol/L乙酸溶液 10 1.0 mol/L乙酸溶液 24 5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 10 10 10 溶液PH值 3.2 4.7 5.9 立即混匀各管，静置 10分钟，观察各管沉淀情况 【结果与分析】 沉淀情况 结果分析 酪蛋白于PH=4.7时最容易析出，其等电点为4.7。 沉淀结果用“-，+，+，+”表示并记录于表中。 2.加入班氏试剂的作用？ 酪蛋白的等